高效液相色譜法測定桃花前列康丸中綠原酸的含量

高琳琪 崔紅彬

（1 虞城縣食品藥品檢驗所，河南 虞城 476300；2 商丘市食品藥品檢驗所，河南 商丘 476000）

桃花前列康丸是由桃仁、紅花、延胡索、金銀花、薏苡仁、鱉甲、丹參、懷牛膝等26味藥材加工制成的醫院制劑，具有解毒化瘀、通淋止疼之功效，主治前列腺炎、前列腺增生、睪丸炎、附睪炎、尿道炎、性病后遺癥等[1]。綠原酸為金銀花的主要有效成分，綠原酸具有抗菌、消炎、止血作用，對治療前列腺炎起重要作用?，F行質量標準中未收載含量測定項目，不能有效的控制藥品質量。本文以綠原酸為指標成分，建立了測定桃花前列康丸中綠原酸的高效液相測定法，為該制劑的質量控制提供了客觀的含量評價方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilengt 1260高效液相色譜儀，AUW-220D電子分析天平DSQ10260超聲儀。

1.2 試藥

圖1 高效液相色譜圖

綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-200212）；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。桃花前列康丸由市中醫院提供。

2 方法與結果[2]

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilengt Eclipse Plus-C18色譜柱（4.6×100mm）

流動相：乙腈：0.4%磷酸（17∶83）為流動相；流速0.6mL/min；檢測波長327nm；進樣量10μL；柱溫：30℃，理論板數按綠原酸峰計算應不低于1000。

2.2 線性關系考察

取綠原酸對照品約10mg，精密稱定，置50mL棕色量瓶中，加50%甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為備用溶液（10℃以下保存）。精密取上述備用液2mL，置10mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，即得。按照“2.1”項色譜條件，分別進樣1、2、4、6、8、10、12、14、16μL，記錄綠原酸對照品峰面積值，以峰面積積分值（Y）對對照品濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程：Y=5442.12716X-33.94086 r=0.9996。結果表明，綠原酸對照品在0.04256～0.6810μg范圍內與峰面積值呈良好的線性關系。

2.3 供試品溶液及陰性對照溶液的制備

取本品約8.0g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率35kHz）30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密取續濾液5mL，置25mL棕色量瓶中加入50%甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。另取缺金銀花的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑，按上述方法制備陰性對照溶液。

2.4 干擾試驗

取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10μL，按照“2.1”項色譜條件，分別進樣測定，記錄色譜圖，陰性樣品無干擾，結果見圖1。

2.5 精密度試驗

取同一對照品溶液，重復進樣6次，每次10μL，記錄綠原酸峰面積，RSD=0.32%（n=6），表明精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一對照品溶液，分別在0、2、4、8、12、16h進樣測定，RSD=0.89%，供試品溶液在16h內峰面積基本穩定。

2.7 加樣回收率試驗

稱取6份已知含量為0.0847mg/g的樣品約5.0g，精密稱定，分別置1～6號錐形瓶中，分別精密加入對照品儲備液2mL，按照“2.3”項下供試品溶液制備方法制備溶液，按照“2.1”項色譜條件，分別測定，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

表2 3批樣品中綠原酸的含量

2.8 樣品測定

取3批樣品，按“2.3”項下方法制備供試液，各進樣10μL，按外標法計算綠原酸的含量，結果見表2。

3 討 論

3.1 提取溶劑的選擇

發現以50%甲醇為溶劑測定含量，比用甲醇為溶劑所得的含量高[3]。

3.2 流動相選擇

本試驗曾用甲醇-0.4%磷酸溶液（15∶85），為流動相[4]，主成份峰出峰效果較差，而采用乙腈-0.4%磷酸（17∶83）為流動相，色譜峰顯示，綠原酸與相鄰的組分分離度＞1.5，具有較好的分離效果，且理論板數較高

3.3 桃花前列康丸是由桃仁、紅花、延胡索、金銀花、薏苡仁、鱉甲、丹參、懷牛膝等26味藥材加工制成的醫院制劑，組分復雜，質量難以控制，綠原酸對其療效具有重要作用，本試驗操作簡便，具有較強的專屬性，回收率好，能夠更有效的控制該制劑質量的質量。

[1]河南省醫療機構制劑標準[S].

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:中國醫藥科技出版社,2010.

[3]張云,徐照輝.高效液相色譜法測定抗感口服液中綠原酸的含量[J].中國現代應用藥學,2007,24(S1):631-633.

[4]莫文電,韋建橋,石天松.高效液相色譜法測定痔炎消膠囊中綠原酸的含量[J].中國藥師,2008,6(11):661-663.