羅 亞
(湘潭職業技術學院,湖南 湘潭 411101)
三膠顆粒由丹參、陳皮、龜甲膠、枸杞子、女貞子、鹿角膠、黃芪、黃精、阿膠、當歸、山楂11位中藥加工制成,具有補腎,益氣,養血。適用于脾虛不足引起頭暈、目眩、疲倦乏力、腰腿酸軟等癥;也可用于缺鐵性貧血的輔助治療。方中陳皮、枸杞子、黃芪、黃精、山楂采用水提工藝,丹參、當歸、女貞子采用醇提工藝,原標準已通過檢測橙皮苷和含氮量來控制產品質量,為了進一步有效控制三膠顆粒的質量,保證臨床療效,作者參照《中國藥典》[1]2005年版一部丹參項下,采用HPLC法對三膠顆粒中丹參的主要成份丹酚酸B進行含量測定研究,本方法簡便,快捷、準確、重復性好,能有效控制三膠顆粒的質量。
島津LC-10A型高效液相色譜儀(SPD-10AVP檢測器LC-10AVP泵);C18色譜柱(Hypersil 200×4.6mm,5μm,大連依利特公司);甲醇、乙腈為色譜純,水為重蒸水,其它試劑均為分析純;丹酚酸B對照品(中國藥品生物制品檢定所,供含量測定用,批號為111562-200403),三膠顆粒由湖南飛鴿藥業有限公司提供。
Hypersil BDS C18色譜柱(4.6×200 mm,5μm),流動相甲醇-乙腈-甲酸-水(27∶10∶1∶62),流速1.0mL/min,柱溫為室溫,檢測波長286nm,進樣量5μL。在上述色譜條件下,丹酚酸B峰和樣品中其它組的峰可達基線分離,且與其它相鄰峰分離度>1.5,按丹酚酸B峰計算,理論板數在2000以上,陰性對照無干擾,對照品、供試品、陰性樣品、丹酚酸B色譜圖見圖1。
圖1 三膠顆粒HPLC圖
精密稱取丹酚酸B對照品適量,加75%甲醇制成每1mL含0.04mg的溶液,即得。
精密吸取濃度為0.2082mg/ml的丹酚酸B對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置10mL量瓶中,加75%甲醇稀釋至刻度,搖勻,吸取上述對照品系列溶液5μL,進樣,測定峰面積積分值,以進樣量(μg)為橫坐標,峰面積積分值為縱坐標,繪制標準曲線,其回歸方程為:Y=977976X+13030,r=0.9998,結果表明丹酚酸B在0.05205~0.5205μg范圍內具有良好的線性關系。
取裝量差異項下的內容物,研細,取細粉約1.2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入75%甲醇50mL,密塞,稱定重量,加熱回流60分鐘,放冷,密塞,再稱定重量,用75%甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續濾液,即得。
取除丹參外的其余處方量藥物,按制備工藝方法制備缺丹參的陰性樣品,按上述供試品溶液制備方法制成缺丹酚酸B的陰性溶液。
精密吸取同一供試品溶液5μL,重復進樣6次,測定丹酚酸B峰面積,RSD1.3%。
分別精密吸取對照品和同一供試品溶液5μL,于0、2、4、6、10小時進樣,對照品RSD1.4%,供試品RSD1.7%,
取同一批號樣品6份,按上述含量測定項下的條件,依法測定,計算,結果RSD1.0%。
精密稱取已知含量為1.492mg/g的樣品(批號:091011)約0.6g,共6份,置50mL容量瓶中,分別精密加入丹酚酸B對照品溶液(1.03mg/mL)1.0ml,即1.03mg,按上述含量測定項下的方法測定含量,計算回收率,結果表明,本方法加樣回收率好。結果見表1。
表1 丹酚酸B加樣回收率
取3批樣品(091011,091012,091013),按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液,按2.1色譜條件進行含量測定,計算含量,結果3批三膠顆粒中丹酚酸B的含量分別為每袋14.92,15.01,14.83mg,RSD分別為0.47%,0.94%,1.0%。
參照《中國藥典》2005年版一部藥材丹參中丹酚酸B含量測定的提取方法,以75%甲醇為溶劑,加熱回流進行提取,并對提取時間進行了考察,結果表明樣品經75%甲醇加熱回流60min,丹酚酸B含量不再增加,說明丹酚酸B已提取完全。
制劑中每劑處方含丹參90g,共制成100袋,每袋含丹參藥材0.9g,按《中國藥典》2005版一部丹參項下規定的丹酚酸B最低含量限度3.0%計,樣品的最低理論限度值為每袋27mg;三批樣品所用藥材含量為4.48%,樣品中丹酚酸B的轉移率約為40%,以此轉移率折算最低理論限度值,數值為每袋10.8mg,根據上述計算,同時根據測定結果,確定本品含丹參以丹酚酸B計,每袋不得少于10.0mg。
[1]國家藥典委員會.中國藥典.一部[S].北京:化學工業出版社,2005:52.