p27、p21和cyclin E在喉鱗狀細胞癌中表達的意義

賀紅艷，張桂華，賈桂芬

（河北省秦皇島市第二醫院耳鼻喉科，河北秦皇島066600）

·論 著·

p27、p21和cyclin E在喉鱗狀細胞癌中表達的意義

賀紅艷，張桂華，賈桂芬

（河北省秦皇島市第二醫院耳鼻喉科，河北秦皇島066600）

目的 探討細胞周期調節因子p27、p21和cyclin E在喉鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義。方法采用免疫組織化學法檢測p27、p21和cyclin E在72例喉鱗狀細胞癌和21例正常喉黏膜中的表達。結果喉癌中p27、p21和cyclin E陽性表達率分別為30.6％、26.4％、51.4％，與正常喉黏膜比較差異有統計學意義（P＜0.05）；p27、p21和cyclin E在喉癌中的表達與分化程度及淋巴結轉移差異有統計學意義（P＜0.05），但與發病部位無關（P＞0.05）。結論p27、p21和cyclin E與喉癌的發生密切相關，檢測三者對喉癌的早期診斷、治療及預后有重要意義。

喉；腫瘤，鱗狀細胞；細胞周期蛋白類

細胞周期受控于細胞周期蛋白（cyclin）、細胞周期依賴性激酶（cyclin-dependent kinases，CDKs）和細胞周期依賴性激酶抑制劑（cyclin-dependent kinases inhibition，CDKIs）3種調控因子。Cyclin E與CDKs結合形成復合物，對細胞周期的啟動及各時相的轉換具有關鍵性調控作用，在腫瘤的形成中均發揮了重要作用［1］。Cyclin A/p21與cyclin E/ p27是2組重要的細胞周期調控因子，與細胞的增殖及腫瘤的形成密切相關。本研究采用免疫組織化學法檢測p21、cyclin E和p27蛋白的表達，分析其在喉鱗狀細胞癌發生過程中的作用及意義，以及與患者病理特征等因素之間的關系，旨在探討喉鱗狀細胞癌的發病機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2004—2008年河北省張家口地區喉鱗狀細胞癌手術切除標本72例，男性51例，女性21例，年齡38～70歲，平均52歲。正常喉黏膜21例，男性15例，女性6例，年齡27～65歲，平

均47歲。

1.2 標本處理：標本經10％中性甲醛固定，梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，連續切片6張，切片厚度5μm。

1.3 試劑及染色：采用免疫組織化學SP染色方法。鼠抗人p27、p21和cyclin E抗體和SP試劑盒購自北京中山生物技術有限公司。嚴格按照實驗操作規程進行。每批實驗陽性對照片用已知陽性片作對照；陰性對照片用PBS液代替第Ⅰ抗。

1.4 染色結果判定：p27分布于細胞核，p21和cyclin E多分布于細胞核，少數胞漿也同時著色。每張切片隨機觀察10個高倍視野（×400），用半定量積分法判斷結果，陽性細胞≤5％為0分，＞5％～25％為1分，＞25％～50％為2分，＞50％～75％為3分，＞75％為4分；陽性強度黃色為1分，棕黃為2分，棕褐色為3分。兩者積分相乘，0分為陰性（-），1～4分為弱陽性（+），5～8分為中度陽性（++），9～12分為強陽性（+++）。以中度陽性和強陽性為過表達（++～+++）。

1.5 統計學方法：應用SAS11.0軟件包處理數據，計數資料以百分率表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 p27、p21和cyclin E在正常喉黏膜及鱗狀細胞癌中的表達：光鏡下陽性物為棕黃色，p27分布于細胞核，p21和cyclin E多分布于細胞胞核，少數胞漿也同時著色。p27、p21和cyclin E在正常喉黏膜中陽性率分別為61.9％（13/21）、71.4％（15/21）和23.8％（5/21），在喉癌中的陽性率分別為30.6％（22/72）、26.4％（19/72）、51.4％（37/72），差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 p27、p21和cyclin E的表達與喉癌臨床病理學的關系：p27、p21和cyclin E在喉癌中的表達與分化程度及淋巴結轉移差異有統計學意義（P＜0.05），與發生部位無關（P＞0.05）。見表1。

表1 p27、p21和cyclin E的表達與喉癌臨床病理學的關系Table 1 Expression of p27，p21 and cyclin E and relationship w ith clinical pathological param eters in laryngeal squamous cell carcinoma （n，％）

*P＜0.05 vs normalgroup #P＜0.05 vs low △P＜0.05 vs No byχ2testLSCC：laryngeal squamous cell carcinoma

3 討 論

喉癌是耳鼻喉-頭頸外科的常見惡性腫瘤，喉鱗狀細胞癌的發生、發展是一個多因素共同參與的多階段復雜生物學過程，其與癌基因激活，抑癌基因失活密切相關。腫瘤發生的共同特征是細胞周期控制機制的紊亂導致細胞的失控性生長。CDKs和cyclin結合，催化細胞周期進程，而CKIs作為細胞周期的負調控因子則抑制其活性或結合。本研究檢測的cyclin E是細胞周期素中的一個亞型，對細胞周期有正調節作用；p21、p27則是CDKs家族成員，對細胞周期有負調節作用。

Cyclin E是參與細胞周期G1/S轉換的重要調節因子，在正常細胞和腫瘤細胞中主要在G1晚期發揮正常調控細胞周期的作用，其作用機制為cyclin E與CDK2結合形成cyclin E-CDK2復合物，促使CDKs被磷酸化而具有酶活性，在G1/S轉換過程中發揮作用。Cyclin E在眾多人類腫瘤中表達異常，與消化、生殖系統的腫瘤發生有關，并與一些增殖性疾病如尖銳濕疣的發病關系密切。本研究結果顯示，cyclin E在正常組陽性表達率顯著低于喉癌組。表明cyclin E在喉癌的發生中起重要作用，并對喉癌的早期診斷具有一定價值。在低分化及有淋巴結轉移喉癌中cyclin E均有高表達，說明cyclin E表達過度與分化不良有關，并提示預后不佳。

p21、p27蛋白是二種重要的CDK抑制劑，對細胞周期起負調控作用。p21蛋白幾乎是每一個cyclin-CDK復合物的結合的抑制因子。p21主要是與cyclin-CDKs復合物結合，使其激酶活性喪失，使細胞周期停滯于G2期。p27蛋白則是通過與激活狀態cyclin-CDKs復合物結合并抑制其活性而達到抑制細胞周期的目的，p27蛋白主要是在G1期與cyclin-CDK2和cyclin-CDK4復合物結合并抑制期活性，使細胞周期滯于G1期，抑制細胞增殖在人類許

多腫瘤中都存在p27蛋白的降低，如胃癌、前列腺癌、乳腺癌、子宮頸癌、輸卵管癌等［2-6］。本研究結果顯示，p27、p21在喉鱗狀細胞癌組織中陽性表達率降低，提示喉黏膜組織在癌變過程中p27、p21的陽性表達率及表達程度在衰減，從而失去對細胞增殖的負性調控作用，導致腫瘤的發生。盡管其蛋白表達水平變化與多種腫瘤的發生密切相關，但是人類惡性腫瘤中p27、p21基因的缺失、重排和突變比較罕見，僅個別密碼子有多態性表現。在喉鱗狀細胞癌組織不同分化程度、淋巴結是否轉移的檢測中p27、p21的表達差異有統計學意義（P＜0.05），但與腫瘤的發生部位無關（P＞0.05），因此認為隨著喉鱗狀細胞癌的組織學分化變差，淋巴結轉移增多，臨床分期趨增高，p27、p21的陽性表達率逐漸降低，這表明了p27、p21蛋白在喉鱗狀細胞癌的癌變過程中逐漸喪失了作為細胞周期負性調控蛋白的作用，從而使癌細胞不斷增殖而具有更高的惡性程度和侵襲力。在膽囊癌患者的生存分析中發現，p27、p21高表達者的生存率明顯大于低表達者，這進一步說明p27、p21在喉鱗狀細胞癌組織中低表達率的出現，預示著病程處于晚期而且預后較差。

在喉鱗狀細胞癌中，cyclin E隨著組織學分級的增高及淋巴結轉移的發生，表達逐漸增高，而p27、p21則是隨著組織學分級的增高及淋巴結轉移的發生，表達逐漸降低，說明cyclin E表達增高與p27、p21表達降低共同影響喉鱗狀細胞癌的惡性行為，三者在喉鱗狀細胞癌發生發展過程中關系密切，共同參與細胞周期的調控過程，因此進一步深入探討它們之間的關聯性可能為喉鱗狀細胞癌的研究提供分子生物學基礎。

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（本文編輯：趙麗潔）

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF p27，p21 AND CYCLIN E IN LARYNGEAL SQUAMOUSCELL CARCINOMA

HE Hongyan，ZHANG Guihua，JIA Guifen （Department of Otolaryngology，the Second Hospitial of Qinhuangdao City，Hebei Province，Qinhuangdao 066600，China）

ObjectiveTo study the clinical significance and expression of p27，p21 and cyclin E in laryngeal squamous cell carcinoma.MethodsImmunohistochemistrymethod was used to detect the expressions of p27，p21 and cyclin E in 72 cases of laryngeal carcinoma and 21 cases of normalmucosa.ResultsThe positive rates of p27，p21 and cyclin E in laryngeal carcinoma were 30.6％，26.4％，51.4％.There were significant difference between laryngeal carcinoma and normalmucosa of laryngeal（P＜0.05）.Expression of p27，p21 and cyclin E were significantly correlated with the degree of differentiation and lymph node metastasi（sP＜0.05），but they were not related with the location（P＞0.05）.Conclusionp27，p21and cyclin E were closely correlated with the occurrence of laryngeal carcinoma.Detection of p27，p21 and cyclin E have important significance for early diagnosis，treatment and prognosis in laryngeal carcinoma.

larynx；neoplasms，squamous cell；cyclins

R739.95

A

1007-3205（2013）07-0783-03

2012-12-11；

2013-01-27

賀紅艷（1975-），女，河北昌黎人，河北省秦皇島市第二醫院主治醫師，醫學學士，從事耳鼻喉科疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.07.014