葛根芩連湯煮散顆粒與傳統湯劑煎煮效率比較研究

徐曉秋,傅超美,盧君蓉,盛菲亞,高 飛,季寧平

(成都中醫藥大學藥學院中藥材標準化教育部重點實驗室中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地,四川 成都 610075)

葛根芩連湯煮散顆粒與傳統湯劑煎煮效率比較研究

徐曉秋,傅超美,盧君蓉,盛菲亞,高 飛,季寧平

(成都中醫藥大學藥學院中藥材標準化教育部重點實驗室中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地,四川 成都 610075)

為對比研究葛根芩連湯煮散顆粒與其傳統湯劑的煎煮效率,采用單因素試驗法,以不同煎煮時間點煮散顆粒和傳統湯劑煎液中葛根素的煎出量和其干膏收率為指標,用綜合加權評分法對煎煮效率進行評價,并繪制煎煮曲線.結果表明:煎煮5～60 min過程中,煮散顆粒的煎出效率均高于同時間點傳統湯劑的煎出效率,且兩者之間均具有極顯著性差異.結論:本試驗表明煮散顆粒具有節省藥材與時間的優點,為煮散顆粒后續開發提供試驗基礎.

葛根芩連湯;煮散顆粒;葛根素;干膏收率

0 引 言

基于節約中藥資源、提高中藥飲片煎出效率、保證臨床療效的思路,在傳統中藥煮散的形式上融合現代制劑技術,不添加任何外加輔料,將傳統飲片制成煮散顆粒,并以《傷寒論》中的經典名方——葛根芩連湯為代表,探索復方煮散顆粒與其傳統湯劑的煎煮效率對比關系,擬為臨床合理運用煮散顆粒提供試驗基礎數據.

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

實驗所用儀器包括:SHIMADZU LC-10AT高效液相色譜儀(島津公司),Sartorius-BS110S分析天平(賽多利斯公司),DJ靈巧型粉碎機(上海淀久中藥機械制造有限公司),DZKW-4型電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業儀器有限公司).

1.2 試 藥

實驗所用試藥包括:葛根飲片(批號,1108025)經鑒定為豆科植物野葛的干燥根,黃芩飲片(批號,1106102)經鑒定為唇形科植物黃芩的干燥根,黃連片飲片(批號,1105114)經鑒定為毛茛科植物黃連的干燥根莖,炙甘草飲片(批號,0902216)經鑒定為豆科植物甘草的干燥根和根莖,以上飲片均購于四川新荷花中藥飲片股份有限公司;葛根煮散顆粒(批號,12041201),黃芩煮散顆粒(批號,12041202),黃連煮散顆粒(批號,12041203),炙甘草煮散顆粒(批號,12041204)均為實驗室自制;葛根素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號,0752-9806);甲醇為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純.

2 方法與結果

2.1 制備方法

1)按照葛根芩連湯一日處方劑量縮小2倍量,分別取葛根煮散顆粒10 g,黃芩煮散顆粒3.75 g,黃連煮散顆粒3.75 g,炙甘草煮散顆粒2.5 g,精密稱定,共10份,分別加入10倍量水,浸泡30 min,取5份樣品分別煎煮 5、10、15 、20、30 min,濾過 ,濾液定容至500 mL,備用.另外5份樣品煎煮30 min,濾過,收集濾液備用,濾渣中加入10倍量水分別煎煮5、10 、15、20 、30 min,濾過 ,合并濾液 ,定容至500 mL,得到煮散顆粒煎液樣品,備用.

2)取葛根飲片10 g,黃芩飲片3.75 g,黃連飲片3.75 g,炙甘草飲片2.5 g,精密稱定,共10份,按“煮散顆粒煎液”制備方法制備,得到傳統湯劑煎液樣品,備用.

2.2 不同煎煮時間點葛根素煎出量測定

2.2.1 液相色譜條件與系統適用性實驗[1].

通過實驗確定液相色譜條件與系統適用性為:色譜柱 ,Diamonsil C18(250 mm ×4.6 mm,5 μ m);流動相 ,甲醇 —水(25∶75);檢測波長,250 nm;流速,1 mL/min;柱溫,30℃.理論板數按葛根素峰計算應不低于3 000.

2.2.2 對照品溶液的制備.

取葛根素對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1 mL含 53.5 μ g的溶液,即得 .

2.2.3 供試品溶液的制備.

分別取“2.1”項下各樣品溶液,搖勻,用0.45 μ m微孔濾膜濾過,取續濾液,即得供試品溶液.

2.2.4 線性范圍的考察.

精密吸取葛根素對照品溶液,進樣體積分別為1、2 、4、6、8、10 μ L,記錄峰面積值,以峰面積(Y)為縱坐標,對照品進樣量(X)為橫坐標繪制標準曲線,得到回歸方程為,

結果表明,在 5.35 ～ 53.5 μ g/mL 范圍內,葛根素峰面積與進樣量呈良好線性關系.

2.2.5 精密度試驗.

精密吸取葛根素對照品溶液10 μ L,重復進樣6次,測定葛根素色譜峰峰面積,計算得到葛根素峰面積RSD為1.15%,表面儀器精密度良好.

2.2.6 穩定性試驗.

取同一供試品溶液,分別于 0、2、4、6、8、10、12 h各進樣 10 μ L,計算得到葛根素峰面積 RSD為1.98%,表明供試品溶液在12 h內穩定性良好,能滿足測定要求.

2.2.7 重復性試驗.

按“2.2.3項下供試品溶液的制備”方法平行制備供試品溶液6份,分別進樣 10 μ L,記錄葛根素色譜峰峰面積并計算其煎出率,計算得到葛根素煎出率RSD為1.91%,表明本實驗方法重復性良好.

2.2.8 加樣回收率試驗.

精密稱定葛根芩連煮散顆粒共6份,分別精密加入葛根素對照品溶液(53.5 μ g/mL)1 mL,按“2.1項下煎煮15分鐘的供試品溶液制備方法”進行制備,分別進樣 10 μ L,測定葛根素煎出率,計算回收率,其平均回收率為98.77%,RSD為1.71%,表明本實驗方法可靠,符合含量測定的要求.

2.2.9 供試品溶液的含量測定.

參照《藥典》2010年版一部附錄ⅥD高效液相色譜法,分別精密吸取各供試品溶液10 μ L,注入液相色譜儀,依次進行含量測定并計算葛根素煎出量,試驗結果見表1,色譜圖見圖1、圖2.

圖1 葛根素對照品色譜圖

圖2 葛根芩連湯色譜圖

2.3 不同煎煮時間點干膏收率測定

分別精密吸取“2.1”項下各樣品溶液100 mL,置于已恒重的蒸發皿中,水浴揮干,殘渣于105℃烘箱干燥至恒重,取出,移置于干燥器中,冷卻后,迅速精密稱定,計算干膏收率,結果見表1.

2.4 煎出曲線繪制

選擇葛根素煎出量和干膏收率為評價指標,采用綜合加權評分法對葛根芩連湯煮散顆粒和其傳統湯劑不同時間點的煎出效率進行評分,繪制煎出曲線.葛根素煎出量(A)作為主要評價指標,權重系數相應較高,以0.6為宜;干膏收率(B)是煎煮工藝的參考指標,能側面反映飲片的煎出效率,綜合評價時權重系數相應較小,以0.4為宜,計算公式為,

綜合評分結果見表1,煎出曲線見圖3.

表1 不同煎煮時間點煮散顆粒與傳統湯劑煎煮效率比較(n=3)

圖3 葛根芩連湯煮散顆粒與傳統湯劑煎出曲線比較結果

2.5 結 果

由表1、圖3分析可知,在5～60 min的煎煮過程中,不同時間點煮散顆粒煎液中的葛根素煎出量和干膏收率均高于傳統湯劑,且具有極顯著性差異(P＜0.01).通過試驗可知,煮散顆粒煎液中葛根素的最大煎出量為25.41 mg,而傳統湯劑的最大煎出量為19.02mg;以葛根素煎出量為評價指標,煮散顆粒的煎煮效率較傳統湯劑提高了33.59%,以干膏收率為評價指標,煮散顆粒的煎煮效率較傳統湯劑提高了27.29%,從綜合評分出發,煮散顆粒的煎煮效率較傳統湯劑提高了31.01%.

3 結 論

研究發現,單味飲片制備成煮散顆粒之后,其浸提效果相較于傳統飲片有顯著提高[2-5].中藥浸提過程的滲透及擴散階段受藥材粒度影響較大,飲片粉碎后粒徑大幅度減小,溶劑更易于滲入顆粒內部,成分擴散速率增大,浸提過程加快.此為煮散顆粒能顯著性提高飲片煎出效率的科學內涵[6].

葛根芩連湯全方重用葛根為君,黃連、黃芩為臣,甘草調和諸藥,是為佐使.本試驗依循方解選擇葛根素的煎出量為主要考察指標,同時以干膏收率的測定為輔佐,對比研究煮散顆粒與傳統湯劑煎煮效率.研究表明,從葛根素煎出量和干膏收率的角度出發,葛根芩連湯煮散顆粒煎出效率明顯高于其傳統湯劑,在一定程度上表明了煮散顆粒具有顯著提高飲片利用率和減少煎煮時間的優點.需說明的是,本研究主要評價指標稍顯單一,還應對煮散顆粒和傳統湯劑的藥理藥效進行研究,此有待后續研究完善.

[1] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010.

[2] 鄭為騫,傅超美,胡慧玲,等.陳皮現代飲片與傳統飲片煎出效果對比研究[J].中藥與臨床,2011,2(3):36-38.

[3] 林俊芝,傅超美,毛茜,等.黃柏飲片與煮散顆粒在不同煎煮時間點鹽酸小檗堿含量和干膏收率的比較[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(12):41-43.

[4] 馬雪瑋,傅超美,劉婧,等.干姜煮散顆粒與傳統飲片在不同煎煮時間點干膏收率與6-姜辣素含量的對比研究[J].成都大學學報(自然科學版),2012,31(2):121-123.

[5] 毛茜,傅超美,林俊芝,等.牛蒡子飲片與粉末煎煮過程中牛蒡苷含量變化的比較研究[J].中藥與臨床,2012,3(1):15-17.

[6] 張兆旺.中藥藥劑學[M].北京:中國中醫藥出版社,2003.

Comparative Study on Decoction Process of Zhusan Granule and Traditional Decoction of Gegenqinlian

XUXiaoqiu,FU Chaomei,LU Junrong,SHENGFeiya,GAO Fei,JI Ningping
(Pharmacy College,The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine,State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research,Development and Utilization of Chinese Medicine Resources,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075,China)

To compare the efficiency of decoction process between gegenqinlian zhusan granule and it's traditional decoction,we adopted the single factor test.The content of puerarin and yield of dry extract were used as indexes.We analyzed the data by the comprehensive evaluation of multiple marks and drew curve of decoction process.The results showed that both the yield of dry extract and the content of puerarin at different time points from the zhusan granule were greatly more than its traditional one during the whole 5～60 minutes decoction process,and there was a significant difference.The study shows that the zhusan granule has the advantages of saving material and time,providing experimental basis for the subsequent development.

gegenqinlian decoction;zhusan granule;puerarin;yield of dry extract

R283.6

A

1004-5422(2013)01-0024-04

2012-12-17.

徐曉秋(1986—),女,碩士研究生,從事中藥制劑新技術研究.