見血清止血作用研究

宋 芹,趙 琦,茍小軍,陳封政,顏 軍,郭曉強,肖 豆,楊偉峰

(1.成都大學生物產業學院,四川 成都 610106;2.中國中醫科學院西苑醫院實驗研究中心,北京 100091;3.湖北中醫藥大學藥學院,湖北武漢 430065)

見血清止血作用研究

宋 芹1,趙 琦1,茍小軍1,陳封政1,顏 軍1,郭曉強1,肖 豆1,楊偉峰2,3

(1.成都大學生物產業學院,四川 成都 610106;2.中國中醫科學院西苑醫院實驗研究中心,北京 100091;3.湖北中醫藥大學藥學院,湖北武漢 430065)

為明確民間藥見血清的止血有效部位,采用毛細玻管法及載玻片法觀察見血清醇提部位對小鼠凝血時間的影響;采用斷尾法觀察其對小鼠出血時間的影響.實驗結果顯示:毛細玻管法和載玻片法中,見血清醇提部位高、低劑量均能顯著縮短小鼠的凝血時間,與空白對照組比較有顯著統計學差異(P＜0.01,P＜0.05);斷尾法中,見血清醇提部位高、低劑量均能顯著縮短小鼠出血時間,與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.01);見血清醇提部位具有止血功效.

見血清;凝血時間;出血時間

0 引 言

見血清為蘭科羊耳蘭屬植物羊耳蘭的干燥全草,具有涼血止血、清熱解毒之功效[1].目前,有關于見血清止血有效部位、化學成分及作用機理的系統研究報道較少,本研究在結合見血清民間傳統用藥方法的基礎上,擬通過測定實驗小鼠凝血、出血時間,對見血清止血活性進行科學評價,擬為見血清藥材的深入開發利用提供參考依據.

1 材料與儀器

1.1 實驗動物

實驗動物為SPF級昆明種小鼠120只,雌雄各半,體質量20±2 g,均由四川省醫學實驗動物中心提供(合格證號:SCXK(川)2010-12).

1.2 藥 材

實驗所用藥材包括:見血清藥材購自四川成都荷花池中藥材市場,經成都大學中藥化學實驗室陳封政教授鑒定為蘭科羊耳蘭屬羊耳蘭的干燥全草;云南白藥膠囊,為云南白藥集團股份有限公司生產(批號,20110904).

1.3 儀 器

實驗所用的儀器包括:SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵(鄭州長城科工貿有限公司),RE-52AA旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠),HH-2型恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司),ZKF040型真空干燥箱(上海實驗儀器廠有限公司),GB204電子分析天平(瑞士梅特勒),JY-2002電子秤(上海精密科學儀器有限公司),毛細管(內徑0.9～1.1 mm,長10 cm,華西醫科大學儀器廠).

2 方法與結果

2.1 供試藥品的制備

取見血清藥材粗粉約300 g加入75%乙醇回流提取2次,每次3 h,每次加入10倍量乙醇,趁熱過濾,合并兩次濾液,回收至無醇味.將乙醇提取物放入研缽中加入適量0.5%CMC-Na溶液,研磨均勻,再加入適量蒸餾水配制成含生藥0.1 g/mL懸濁液.

2.2 止血作用的實驗研究

2.2.1 對凝血時間(CT)的影響.

1)毛細管法.取體重20±2 g的昆明種小鼠40只,雌雄各半,稱重、標記、隨機分為4組.灌胃藥物,每日1次,連續7 d,空白對照組給予蒸餾水.末次給藥30min后,用一次性玻璃毛細管插入小鼠眼球后靜脈叢取血,至玻璃毛細管內充滿血液為止,置于水平處,每隔30 s折斷玻璃毛細管0.5 cm,并緩慢左右拉開,觀察有無凝血絲出現.記錄從毛細玻管采血到出現凝血絲的時間,作為凝血時間,并計算縮短率.

2)載玻片法.取體重20±2 g的昆明種小鼠40只,雌雄各半,稱重、標記、隨機分為4組.灌胃給藥,每日1次,連續7 d.末次給藥30 min后,用眼科彎鑷迅速摘取一側眼球,即有血液流出.于載玻片兩端各滴一滴血,血滴直徑約為5 mm,立即用秒表計時.每隔30 s用清潔大頭針自血滴邊緣向里輕輕挑動一次,并觀察有無血絲挑起.從采血開始至挑起血絲止,所歷時間即為凝血時間.另取一滴血供復驗.記錄凝血時間,并計算縮短率.

表1 對凝血時間的影響(min,±SD)

表1 對凝血時間的影響(min,±SD)

注:與空白組比較,**P＜0.01,*P＜0.05.

空白對照組 10 — 3.2±1.11 — 3.5±1.52云南白藥組 10 0.3 1.4±0.34** 56.25 2.0±0.84* 42.86醇提低劑量組 10 2 1.7±0.26** 46.88 2.7±0.14* 22.86醇提高劑量組 10 4 1.3±0.38** 59.38 2.3±0.63* 34.29

由表1數據可見,就小鼠凝血時間影響而言,無論是毛細管法還是載玻片法,見血清醇提高、低劑量組與空白對照組比較,統計學上均有顯著差異(P＜0.01,P＜0.05);與陽性藥云南白藥比較并無統計學差異(P＞0.05).

2.2.2 對出血時間(BT)的影響.

取體重20±2 g的昆明種小鼠40只,雌雄各半,稱重、標記、隨機分為4組.灌胃給藥,每日1次,連續7 d.末次給藥30min后,將小鼠趨入固定器中,露鼠尾于外,用剪刀剪去尾尖約3 rnm,待血液自行溢出.每隔30 s用濾紙輕輕吸取血滴,以人工形成創面到出血停止所經時間為出血時間.記錄出血時間,并計算縮短率.

表2 對出血時間的影響(剪尾法)(min,±SD)

表2 對出血時間的影響(剪尾法)(min,±SD)

注:與空白組比較,**P＜0.01.

空白對照組 10 — 30.5±5.51 —云南白藥組 10 0.3 20.3±4.64** 33.44醇提低劑量組 10 2 22.7±6.14** 25.57醇提高劑量組 10 4 18.3±3.43** 40.00

由表2數據可見,就小鼠出血時間影響而言,見血清醇提高、低劑量組與空白對照組比較,統計學上均有顯著差異(P＜0.01);與陽性藥云南白藥比較并無統計學差異(P＞0.05).

3 討 論

見血清在民間運用廣泛,在四川、貴州等地民間常用藥材目錄中均有記載[3-5].見血清既可內服也可外敷,民間傳統使用方法為水煎煮入藥和酒泡服入藥.因此,在結合見血清民間傳統用藥方法的基礎上,本研究對見血清的止血作用進行了科學評價.結果表明:醇提部位可明顯縮短小鼠出、凝血時間,其止血活性與云南白藥相近.由此可知,見血清止血活性突出,單味藥材入藥其優勢顯而易見,可將其作為止血藥的新資源進行系統研發,但關于該藥材的系統研究較少,其止血藥效物質基礎,作用機制等都將有待進一步研究.

[1] 四川省食品藥品監督管理局.四川省中藥材標準[M].成都:四川科學技術出版社,2010.

[2] 陳奇,鄧文龍,張世瑋,等.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社,1993.

[3] 浙江省革命委員會生產指揮組衛生辦公室.浙江民間常用草藥[M].杭州:浙江人民出版社,1969.

[4] 四川省中藥研究所.四川常用中草藥[M].成都:四川人民出版社,1971.

[5] 國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海:上?？茖W技術出版社,1999.

Study on Hemostasis Effect of Liparis Nervosa(Thunb.)Lindl

SONGQin1,ZHAO Qi1,GOU Xiaojun1,CHEN Fengzheng1,YAN Jun1,G UOXiaoqiang1,XIAO Dou1,YANGWeifeng2,3
(1.School of Bioindustry,Chengdu University,Chengdu 610106,China;2.Experimental Research Center of Xiyuan Hospital,China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100091,China;3.Pharmacy Faculty,Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065,China)

Objective:To indicate the blood coagulation location of Liparis nervosa(Thunb.)Lindl.Methods:The glass capillary tube method and slide method were used to observe the effects of Liparis nervosa(Thunb.)Lindl on the clotting time;the effect of Liparis nervosa(Thunb.)Lindl on the bleeding time was observed by cutting tails of mice.Results:In slide method and glass capillary tube method,the clotting time wasobviously shortened in high-dose and low-dose alcohol extract groups,comparedwith control group with significant difference(P＜0.01,P＜0.05).In tail method,there was significant difference(P＜0.01)in bleeding time between alcohol extract groups and control group,either in high-dose or low-dose.Conclusion:Alcohol extractive position of Liparis nervosa(Thunb.)Lindl has hemostasis effect.

Liparis nervosa(Thunb.)Lindl;clotting time;bleeding time

R285.5

A

1004-5422(2013)01-0027-03

2013-01-14.

宋 芹(1982—),女,博士,講師,從事天然藥物有效物質基礎及作用機制研究.