艾灸治療大鼠系膜增生性腎小球腎炎實驗研究

魏鐵花,王慶國,李珊珊,唐 強,孫妲男,邊曉燕,王 丹

(1.深圳市光明新區人民醫院 康復科，廣東 深圳 518000；2.黑龍江中醫藥大學 博士后科研流動站，黑龍江 哈爾濱 150040)

慢性腎小球腎炎在中醫學上可以歸入“血尿”“腰痛”“虛勞”“水腫”等范疇。慢性腎小球腎炎的發病通常比較隱匿，臨床上一般病程比較長，在出現明顯癥狀前多有一段時間的無癥狀尿異常期，之后隨著疾病的緩慢持續發展，患者的腎功能可出現明顯減退，最終可導致慢性腎衰竭。目前關于慢性腎小球腎炎的治療方法的研究有很多，比如針刺[1]、黃蜀葵花總黃酮[2]、針藥結合[3]等。本研究通過艾灸治療系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN)大鼠模型,觀察治療后尿蛋白、尿紅細胞計數、血清肌酐和尿素氮的變化，從而為系膜增生性腎小球腎炎在臨床實踐中的治療提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性(SD)健康大鼠共56只，平均體質量為(150±20)g，由長春高新醫學動物實驗研究中心提供。經適應性喂養1周后，檢測尿常規、尿紅細胞、尿蛋白(自動生化分析儀)，定性結果顯示均為陰性。

1.2 實驗試劑 天津生化制品廠生產的小牛血清蛋白(BSA);長春匯力生物技術有限公司生產的血總蛋白試劑盒、血尿素試劑盒、血肌酐試劑盒。

1.3 實驗方法 模型制備[4-5]：正常組大鼠10只，模型組大鼠46只。對于模型組大鼠，從第1天開始，隔日灌胃BSA 20 mg次(約l mL/100 g)，持續至實驗結束(10周末)。在第1天與第8天經大鼠皮下分點注射完全弗氏佐劑0.2 mg(含BSA 2 mg)，第8天和第15天可經尾靜脈注射葡萄球菌腸毒素B(SEB)水溶液(0.4 mg/kg)各1次。從第6周開始每周收集大鼠尿液，并對所有尿液進行常規紅細胞、白細胞和尿蛋白檢測。當蛋白尿定性檢測結果為陽性時，可提示MsPGN大鼠模型制作取得成功，隨后繼續給大鼠灌胃BSA直到實驗結束。

1.4 動物分組 將大鼠隨機(采用隨機數字表)分為5組:正常組10只、模型組10只，灸背組12只，灸腹組12只，灸肢組12只。

1.4.1 正常組 該組大鼠不進行造模與艾灸,每天參考艾灸組同樣的操作與時間進行抓取固定。

1.4.2 模型組 該組大鼠造模成功后，不要艾灸,每天參考艾灸組同樣的操作與時間進行抓取固定。

1.4.3 灸背組 選穴造模成功后，將大鼠固定在鼠籠內,使大鼠尾部自由活動，頭與身體無法動彈。大鼠進行備皮消毒，參照“大鼠標準穴位圖譜”，取雙腎俞穴、命門；選用自制香煙型艾條(直徑約0.8 cm)，于穴位上方2～3 cm處懸灸，每個腎俞穴灸7 min，命門穴灸6 min,左腎俞穴、命門、右腎俞穴每次共20 min，每日1次，治療6次休息1 d，共治療6周。

1.4.4 灸腹組 造模成功后，將大鼠固定在鼠籠內,使大鼠尾部自由活動，頭與身體無法動彈。對大鼠進行備皮消毒，參考“大鼠標準穴位圖譜”，選用自制的香煙型艾條(直徑約0.8 cm)，于穴位上方2～3 cm處懸灸，中脘、關元各10 min，先灸中脘穴、再灸關元穴，每次20 min，每日1次，治療6次休息1 d，共治療6周。

1.4.5 灸肢組 造模成功后，將大鼠固定在鼠籠內,使大鼠尾部自由活動，頭與身體無法動彈。對大鼠進行備皮消毒，參考“大鼠標準穴位圖譜”，取后(足)三里、涌泉，灸法同灸背組，每個后(足)三里穴灸5 min,涌泉穴灸5 min,灸法順序左三里、右三里、左涌泉、右涌泉穴，每次20 min，每日1次，每治療6次后休息1 d，共治療6周。

1.5 標本采集及指標檢測 分別于10、12、14、16周末對大鼠24 h內的尿液進行尿蛋白定量檢驗，分別于10、16周末對大鼠24 h內的尿液進行尿紅細胞檢驗，分別于10、16周末尾靜脈取血10 mL，檢驗血清尿素氮和肌酐水平。

2 結果

2.1 對各組大鼠一般狀況影響 正常對照組大鼠的精神狀態、反應性、活動度均較好，毛色普遍光澤，大小便正常。而通過觀察模型組大鼠發現，實驗結束時，大鼠普遍出現體形消瘦，精神不振，食欲降低，反應下降，毛色光澤差，弓背豎毛，眼球、耳廓、尾巴蒼白，大小便異常。3個治療組所有大鼠精神狀態、反應性、活潑度均較好,毛色普遍光澤，大小便正常。在實驗結束時，各組均出現大鼠死亡(可能與給藥損傷、操作不當有關,病理解剖證實死亡原因)。各組大鼠相關死亡情況:從造模開始至治療前，總共有2只動物死亡，灸背組1只，灸腹組1只。而從治療開始到實驗結束，灸肢組在12周時死亡1只，其余各組均未出現死亡。

2.2 對各組大鼠24 h尿蛋白的影響 見表1。

表1 對各組大鼠24 h尿蛋白的影響(±s) mg/L

2.3 對各組大鼠尿紅細胞計數的影響 見表2。

表2 對各組大鼠尿紅細胞計數的影響(±s) (個/視野)

2.4 對各組大鼠腎功能的影響 見表3。

表3 對各組大鼠腎功能的影響(±s)

3 討論

灸腹和灸背治療后，MsPGN大鼠的血清尿蛋白水平出現顯著的下降，提示2種治療方法可有效降低尿蛋白水平，但未恢復到正常對照組的水平。艾灸單一治療MsPGN能在一定程度上減輕尿蛋白，但還不能完全緩解MsPGN,本研究中也可能由于治療時間不夠長而未能達到完全緩解。本研究還發現灸背組大鼠與灸腹組大鼠的尿紅細胞出現明顯減少，提示艾灸可能通過抑制腎小球系膜病變的疾病進展，降低尿液中的紅細胞數目，從而緩解與改善系膜增生性腎炎的尿血癥狀，減少鏡下血尿。因此，艾灸可有效保護腎臟功能，提高腎小球濾過率，防止氮質血癥的產生，特別是灸腹治療的療效顯著。

背部組取命門穴，腎俞；命門為督脈之穴，腎俞為調整腎臟機能的要穴，2穴單純補腎。腹部組取關元穴，中脘；關元穴為小腸募穴，足三陰會穴，足三陰任脈交會穴，為一身元氣所在，中脘為胃經之募穴，2穴亦脾腎雙補，均為任脈之穴，且“命門者，下丹田精氣處也”其命門學說定位在下丹田即關元穴。肢體組取足三里，涌泉穴；足三里為足陽明胃經之合穴，是五輸穴之一，胃腑的下合穴，涌泉穴為足少陰腎經之井穴，2穴脾腎雙補，但與命門學說關系甚微。

艾灸可有效減少MsPGN大鼠尿蛋白含量，改善血尿，降低血尿素氮及血肌酐，同時能夠對模型大鼠的腎臟起到一定的保護作用,說明艾灸組對實驗所致大鼠MsPGN有一定的治療作用。在系膜增生性腎小球腎炎的針灸治療中，命門學說脾腎雙補組，即腹部組，優于命門學說單純補腎組，即背部組，命門學說單純補腎組優于非命門學說脾腎雙補組，即肢體組。

[1]魏鐵花,王慶國,韓玉生,等.針刺對系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN)大鼠的實驗研究[J].醫學信息(上旬刊),2011,24(7):4123-4124.

[2]胡翠云,戴敏,陳君君,等.黃蜀葵花總黃酮對大鼠濕熱型慢性腎炎的作用及其對紅細胞免疫黏附功能的影響[J].安徽中醫學院學報,2011,30(1):57-61.

[3]卞勇,鞠曉云,范乃斌,等.針藥結合治療對慢性腎小球腎炎大鼠IL-1、IL-2的影響[J].安徽醫藥,2010,14(7):762.

[4]劉震,周樹錄,譚建三.大鼠系膜增生性腎模型的復制與改進[J].華西醫科大學學報,1996,27(2):182-184.

[5]賈慧,鄒萬忠.改良慢性血清病性大鼠系膜增生性腎炎模型的建立[J].腎臟病與透析腎移植雜志,1996,5(3):21-25,98.