我國動物狂犬病疫苗的質量管理

狂犬?。≧abies）是由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）引起的一種人獸共患急性接觸性傳染病。盡管可通過接種疫苗來預防，每年全世界仍有約55000 人死于該病。我國近五年每年死亡3000 人左右，僅次于印度，并且主要由犬引發，因此預防狂犬病的主要措施是對犬進行狂犬病疫苗的免疫接種。WHO狂犬病專家建議使用狂犬病滅活疫苗代替弱毒疫苗以便最終消滅人和動物狂犬病。長期以來，國產動物用狂犬病疫苗僅有活疫苗，滅活疫苗則依賴進口?？上驳氖?，近幾年國內已研制出多種狂犬病滅活疫苗并陸續上市。本文就我國當前使用的動物用狂犬病疫苗種類及疫苗的質量管理作以下綜述，期望對我國犬、貓等動物接種狂犬病疫苗提供參考。

一、國產動物用狂犬病疫苗種類及質量標準

我國動物狂犬病疫苗的生產經歷了解放初期的羊腦組織滅活疫苗，上世紀80年代的細胞培養活疫苗，到近幾年的細胞培養滅活疫苗，產品的質量有了很大的提高。由于羊腦組織滅活疫苗含有腦組織的鞘磷脂，動物接種后易引起神經副反應，并殘留有活病毒，使用不安全，1980年以后停止使用。目前應用的國產動物用狂犬病疫苗有弱毒活疫苗和滅活疫苗兩種?；钜呙绨ㄈ袢。≧b/E3 株）、犬瘟熱、犬副流感、犬腺病毒病與細小病毒感染癥五聯活疫苗（以下簡稱五聯苗）和狂犬?。‵lury LEP 株）活疫苗。

（一）五聯苗

五聯苗于2000年獲得農業部頒發的新獸藥證書和獸藥生產許可。疫苗含有狂犬病病毒Rb/E3 株在Vero 細胞的培養液，半成品病毒含量≥105.0LD50/0.03mL。成品檢驗中的物理性狀、無菌檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗均按《中國獸藥典》進行。

安全檢驗和效力檢驗是疫苗成品檢驗的主要指標。五聯苗的安全檢驗：是將疫苗用注射用水稀釋至原量，取對5 種病毒中和抗體效價均＜2 的2～3月齡健康易感犬5 頭，各肌肉注射疫苗10 頭份，隔離飼養21日，精神、食欲、體溫與糞便均應正常。效力檢驗：是將疫苗用注射用水稀釋至原量，取對5 種病毒中和抗體效價均＜2 的2～3月齡健康易感犬5 頭，各肌肉注射疫苗1頭份，隔離飼養21日，均應正常；并測定中和抗體效價，抗狂犬病病毒中和抗體效價應≥10(小白鼠法)為合格。

疫苗在-20℃以下保存，有效期為1年；2～8℃，有效期為9個月。使用時，用注射用水將疫苗稀釋成2mL，斷奶幼犬以21日的間隔，連續免疫3 次，每次2mL。成犬每年免疫2 次，間隔21日，每次2mL。

（二）Flury LEP 株活疫苗

我國農業部1979年頒布了Flury LEP 株活疫苗試行規程，2006年重新修訂規程。該苗采用Flury LEP 株在BHK21 細胞培養，半成品病毒含量≥104.0LD50/0.03mL。成品檢驗中的物理性狀、無菌檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗均按《中國獸藥典》進行。

安全檢驗：1.將疫苗用注射用水（或pH 值7.2～7.4 的磷酸鹽緩沖鹽水）溶解后，肌肉注射成年家兔4 只，每只2.5 頭份，觀察21～28日，應不出現任何狂犬病癥狀（興奮或抑郁型腦炎癥狀）。試驗兔若在觀察期內，出現死亡但無神經癥狀，應剖取腦組織，用注射用水制成10-3乳劑，離心后取上清，腦內注射11～13g小鼠5只，每只0.03mL。觀察21日，如全部健活，疫苗判為合格。若有小鼠死亡，可重檢1次。2.選用至少3月齡犬（無狂犬病抗體）2 只，每只肌肉注射疫苗10 頭份，觀察21～28日，應健活。

效力檢驗：將疫苗用pH 值7.2的磷酸鹽緩沖鹽水恢復為每毫升含5 頭份，再作10 倍系列稀釋。取10-3、10-4、10-53個稀釋度，分別腦內接種11～13g 小鼠4 只，每只0.03mL，觀察至14日，計算LD50，應≥104.0LD50/0.03mL。

疫苗在-15℃以下保存，有效期為12個月；2～8℃保存的有效期為6個月；25℃保存應不超過7日。疫苗規格有5 頭份/瓶和10 頭份/瓶。使用時，用注射用水或pH 值7.2～7.4的磷酸鹽緩沖鹽水按瓶簽注明頭份稀釋疫苗（1mL 含1頭份）。2月齡以上的犬，每只肌肉注射1mL。

（三）滅活疫苗

自2010年開始，國產狂犬病滅活疫苗陸續獲得新獸藥證書和獸藥生產許可，目前已有4 家企業的產品上市銷售。國產狂犬病滅活疫苗生產用毒株主要有Flury LEP 株、CVS-11株、PV2061株、SAD 株和CTN-1株等，細胞系主要有BHK-21、Vero 和BSR，采用β-丙內酯（BPL）作為滅活劑，多數疫苗采用生物反應器懸浮培養并經純化處理?？袢缁钜呙绲陌踩珯z驗通常對犬、小鼠或豚鼠等進行注射，觀察是否有局部或全身等不良反應或狂犬病癥狀。采用國際上通用的NIH（National Institutes of Health）法進行效力檢驗。通過計算待檢疫苗和參考疫苗的半數保護量（PD50），并以WHO 或OIE 參考疫苗的抗原有效含量來標化，以國際單位（IU）表示。國產狂犬病滅活疫苗成品效力標準通?！?.0IU/劑量，個別產品高于2.5 IU/劑量，均高于WHO 關于獸用狂犬病疫苗≥1.0IU/劑量的標準。

二、國產動物用狂犬病疫苗的監督管理

我國農業部依照《獸藥管理條例》、《獸用生物制品管理辦法》、《中國獸藥典》、《獸用生物制品制造與檢驗規程》及《獸用生物制品質量標準》等對包括動物用狂犬病疫苗在內的獸用生物制品進行嚴格管理。種毒和細胞均由中國獸醫藥品監察所（以下簡稱“中監所”）統一編號、鑒定、保管和分發，全部符合生產要求，并實行種子批制度。

所有狂犬病疫苗生產企業應全部符合GMP要求，生產的每批狂犬病疫苗實行批簽發管理。每批產品的樣品和檢驗報告報中監所，產品的樣品可以每15日集中寄送1次。中監所在接到生產企業報送的樣品和質量檢驗報告后7個工作日內，做出是否可以銷售的判定，并通知生產企業。

對于中監所認為有必要進行復核檢驗的，可以在中監所或其指定單位、場所進行復核檢驗。復核檢驗必須在中監所接到企業報送的樣品和質量檢驗報告2個月內完成。復核檢驗結束后，由中監所作出判定，并通知生產企業，當對產品作出不合格判定時，應當同時報告農業部。生產企業取得中監所的“允許銷售通知書”后，方可進行銷售。另外，中監所定期派專業技術人員進行駐廠監督以確保疫苗質量，并在中國獸藥信息網上對疫苗質量管理的結果予以發布。所有的狂犬病疫苗需達到《中國獸藥典》和《獸用生物制品質量標準》的要求。

動物狂犬病疫苗批簽發程序通常包括：批簽發申請、抽樣與樣品管理、批簽發的審核與簽發、批簽發的復審、批簽發申報資料的核查等方面。中監所批簽發審核流程具體包括：企業申報；業務管理處接收；相關檢測室提出技術審核意見；業務管理處綜合審核意見并簽發；通知企業結果。

2012年，我國4 家動物用狂犬病滅活疫苗生產企業共批簽發17 批102 萬頭份，8 家活疫苗企業共批簽發95 批3451萬頭份。

三、進口狂犬病疫苗的監督管理

多年來，富道、英特威、維克、梅里亞以及羅曼等公司壟斷了我國獸用狂犬病滅活疫苗市場。這些產品均使用BPL 作為滅活劑，以氫氧化鋁膠為佐劑制成。進口狂犬病疫苗的生產按照《美國藥典》、《歐洲藥典》和《英國藥典》等標準執行，要求疫苗免疫期至少1年。在2～8℃保存，有效期為24～48個月。

安全檢驗：取8～14 周齡健康易感比格犬2 頭，各皮下或肌肉注射疫苗2 頭份，觀察21日，應全部健活。效力檢驗：按照NIH（美國國立衛生院）法進行，每頭份至少≥1.0IU。

我國對于進口獸用生物制品按照《進口獸藥管理辦法》進行管理，實行注冊管理制度。凡國外企業生產的獸用狂犬病疫苗首次對華銷售的，必須申請注冊。農業部對申請企業提供的資料進行審查，主要包括制品的原材料（菌毒種來源、代次和制備方法）標準；細胞種來源、代次和傳代方法、鑒定方法和標準；滅活劑、佐劑的種類和標準等。對符合規定的發給“進口獸藥注冊申請受理通知書”。在企業接到該通知書后，提供疫苗在我國境內進行質量復核以及安全性等試驗。各項檢驗合格后，頒發《進口生物制品登記許可證》。進口獸藥注冊證書的有效期為5年。到期后如繼續銷售，需辦理進口獸藥再注冊申請。未經注冊的狂犬病疫苗，不準在我國境內進行銷售、分裝、使用和進行商業性宣傳。對于進口狂犬病疫苗按照農業部發布的《進口生物制品質量標準》進行質量監督。同時依照《獸藥管理條例》第十九條的規定進行審查核對和抽查檢驗。

我國對于進口狂犬病疫苗同樣實行批簽發管理。2012年，5 家國外企業的狂犬病疫苗共批簽發22批348 萬頭份。

目前狂犬病滅活疫苗質量管理中存在一個問題，就是關于效力檢驗的方法（NIH 法），這個方法是WHO 認可的用于狂犬病滅活疫苗效果評價的金標準方法。由于受小鼠健康狀況、實驗操作人員技術水平等因素影響，其實驗結果的變異系數較大（25%～400%之間），而且實驗需要的小鼠數量較多，實驗周期長（28 天），給疫苗批簽發工作帶來很大障礙，這也是國內外狂犬病滅活疫苗生產普遍面臨的問題，因此加快對NIH 替代方法的研究已成為趨勢。

接種安全、有效的狂犬病疫苗仍是控制狂犬病的主要措施。目前我國養犬數量已遠遠超過1億。世界衛生組織倡議，到2020年在全球消滅狂犬病。為實現這一目標，需要努力提高我國動物狂犬病疫苗的免疫覆蓋率，才能從源頭上控制我國狂犬病的流行。因此還需進一步提高動物用狂犬病疫苗生產的數量，加強疫苗質量管理，滿足我國對犬、貓等動物強制免疫的需要，以盡早控制我國狂犬病的流行。