中藥復方外用于大鼠急性痛風性關節炎模型療效及不同關節腫脹度測量方法效果的比較*

楊 輝 謝志軍 溫成平

（浙江中醫藥大學，浙江 杭州 310053）

急性痛風性關節炎是尿酸鹽在關節滑膜或軟骨沉積，導致滑膜及關節周圍組織的炎癥反應。本研究通過觀察大鼠痛風性關節炎的模型，以足趾容積測量法、關節直徑測量法、關節周長測量法3種不同方式對痛風性關節炎的腫脹度進行測量，系統比較了3種方法的優缺點，為相關的療效評價做參考?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1 實驗動物 雄性SD大鼠，體質量160～200 g，由上海SIPPR／BK實驗動物中心提供。實驗操作在浙江中醫藥大學動物實驗中心完成。按隨機區組法設計將大鼠均分為6組：模型組、雷公藤低劑量組、雷公藤高劑量組、青風藤低劑量組、青風藤高劑量組、扶他林對照組。每組10只，普通飼料喂養 1周后開始局部造模用藥。

1.2 模型制備 實驗性尿酸鹽性踝關節炎動物模型制作參照Coderre及陳氏法改良進行［1-2］。稱取10 g水合氯醛，用蒸餾水溶解、稀釋至100 mL，得到10%水合氯醛溶液對大鼠進行腹腔麻醉。稱取0.2 g尿酸鈉（Sigma 公司生產，批號 12OK5305，規格：每瓶 5 g），充分研細，加入4 mL 0.9%氯化鈉注射液，配成5%尿酸鈉混懸液，無菌操作，用4號注射針頭，將5%尿酸鈉溶液0.2 mL注入各組大鼠右后足內踝的脛跗關節腔內，每只動物僅注射1次。針頭探及關節囊有落空感為度，注射完成后觀察脛跗關節腔腫脹情況。

1.3 處理方法 造模成功5 h后開始用藥，分別于24、30 h換藥治療。模型組：只造模不治療。雷公藤高劑量組：予雷公藤方藥（組成：制川烏、雷公藤、細辛、山慈菇、、冰片、石膏）生藥濃度18.51 g/kg，外用。雷公藤低劑量組：予雷公藤方藥（組成：制川烏、雷公藤、細辛、山慈菇、冰片、石膏）生藥濃度6.17 g/kg，外用。青風藤高劑量組：予青風藤方藥（組成：制川烏、細辛、山慈菇、青風藤、冰片、石膏）生藥濃度20.05 g/kg，外用。青風藤低劑量組：予青風藤方藥（組成：制川烏、細辛、山慈菇、青風藤、冰片、石膏）生藥濃度6.682 g/kg，外用。扶他林對照組：予扶他林乳膠劑（外用雙氯芬酸二乙胺乳膠劑，20 g/支，北京諾華制藥有限公司生產）6.682 g/kg，外用。

1.4 檢測指標 分別用足趾容積測量儀、游標卡尺和皮尺（所用皮尺的寬度是6 mm，最小刻度是0.5 mm）測量各組大鼠左右后足踝關節下0.5 mm處的足趾容積、直徑和周長值。造模前測量左右足踝作為0 h測量值，造模后5、24、30、48 h分別測量大鼠足踝的周長值和直徑以及足趾容積。觀察右后足（造模側）關節炎各時間點腫脹度，腫脹度計算公式：腫脹率 （%）=（Vt-Vn）/Vn×100%，Vn、Vt分別代表致炎前后足趾容積值（周長法及直徑法與所測周長、直徑計算公式同上）。

1.5 統計學處理 應用SPSS19.0統計軟件。計量資料以（）表示。顯著性檢驗先采用重復測量的方差分析，采用非配對t檢驗進行組間比較。多組間均數比較用單因素方差分析，組內前后比較采用配對t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組足趾腫脹度比較 見表1。雷公藤高劑量組及扶他林對照組與模型組同時段比較，踝關節關節腫脹度明顯小于模型組（P＜0.05或0.01）。

表1 各組足趾腫脹率（%，）

表1 各組足趾腫脹率（%，）

與模型組同時段比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

2.2 各組關節直徑增加比 見表2。雷公藤高劑量組及扶他林對照組踝關節直徑增加比明顯小于模型組（P<0.05）。

表2 各組關節直徑增加比（%，）

表2 各組關節直徑增加比（%，）

2.3 各組關節周長增加比 見表3。各組造模后踝關節周長增加比明顯高于造模前（P<0.05），提示造模成功。用藥后，雷公藤高劑量組及扶他林對照組踝關節周長增加比明顯小于模型組（P<0.05）。

表3 各組關節周長增加比（%，）

表3 各組關節周長增加比（%，）

3 討 論

大鼠痛風急性期造模后局部腫脹，通過預實驗持續對大鼠的局部腫脹度進行測量，急性期的痛風性關節炎在造模后24 h最為明顯，在48 h后開始逐步消退，為了便于觀察局部用藥腫脹度的消退，筆者對大鼠局部進行持續敷貼給藥，預實驗時采用多種方法進行觀察，例如自制小夾板、使用橡皮套，但是均不便于局部給藥的劑量控制且容易脫落。最終選用防水性膠布粘好且大小均一的醫用干棉球固定于大鼠造模側，再用去針頭的5 mL注射器給干棉球處注入適量的煎煮液，以棉球沒有浸出藥液為度達到觀察目的。

上述結果說明，外用藥治療痛風性關節炎的療效觀察僅采用一種方法的測量是不夠的，應多種方法聯合，且實施全程監測，但是考慮到測量步驟煩瑣，所以應該尋求最佳的測量組合以提高實驗效率。足趾容積測量法因為其操作簡便且能準確讀取測量值，在關節腫脹度的測量中應予以優先考慮。周長法能測量出關節腫脹處的周長，但是當測量對象過多時，不能保證每次測量都在同一位置，所以疊加起來誤差較大。直徑法也同樣面臨上述問題。因直徑法只反映局部腫脹度，測量值較小、誤差大，為減小誤差常需多點測量，不夠簡便。

綜上所述，關節腫脹度檢測方法很多，如容積法、直徑法、周長法、質量測定等。造模的注射部位選取需準確，保證關節的腫脹主要局限在大鼠的同一部位，同時對腫脹度的評測需要多種方法的聯用，綜合分析。其中足趾容積測量法和周長測量法是最優聯用組合，容積法測定過程中需保證大鼠每次浸入水中同一位置，這個是容積法測量的關鍵所在。傳統中西藥內服對急性痛風性關節炎有良好的消炎止痛作用，但其不良反應大，其中胃腸道反應發生率高達80%［3］。有關中藥外用評估關節腫脹的報道很少，本觀察通過多種方法聯用來評價痛風性關節炎的關節腫脹度，進一步驗證了在中藥外用評價痛風性關節炎大鼠腫脹度過程中，容積法能很好測量整個關節腫脹度，而周長和直徑法能更好評價局部腫脹。因此，多種方法聯用為中藥外用評價關節腫脹有一定的參考意義。

［1］Coderre TJ，Wall PD.Ankle joint urate arthritis in rats：an alternative animal model of arthritis to that produced by Freund's adjuvant［J］.Pain，1987，28：379-393.

［2］陳文照，關士良，顧瑞生，等.防己黃芪烏苡湯對急性痛風外周神經遞質的影響［J］.中國醫藥學報，1997，12（4）：25-26.

［3］劉湘源.表格式臨床醫學系列叢書：風濕病分冊［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2001：202，206-207.