附子理中湯對脾陽虛證模型大鼠心肌電生理的影響*

盧 蘭 陳 樺 唐漢慶

（1.廣東省惠州市第四人民醫院，廣東 惠州 516055；2.惠州衛生職業技術學院，廣東 惠州 516025；3.右江民族醫學院，廣西 百色 533000）

脾為后天之本，脾陽虛會累及心陽、腎陽出現心臟的病理改變，本實驗嘗試建立脾陽虛動物模型，采用“方-證”對應藥物附子理中湯為干預藥物，討論其對心律失常的動作電位時程、動作電位0相幅值、動作電位50%復極化時程和90%復極化時程的影響。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級Wistar大鼠50只，雌雄各半，體質量（320±20）g，北京維通利華公司提供，動物合格證號為 SCXX（京）2012-0004 。

1.2 藥物與儀器 水合氯醛（批號20090025，北京化學試劑公司）；附子理中湯由炮附子、黨參、白術、干姜、炙甘草按照原方 3∶5∶4∶3∶2 的比例組成， 諸藥均先經蒸餾水浸泡30 min，炮附子先煎1 h，后納入其余藥物，煎煮兩次 （每次40 min），期間將兩次藥液紗布過濾，合并，水浴加熱濃縮至含生藥量為2 g/mL質量濃度的藥液，殺菌，貯存于4℃冰箱內備用。實驗所用單味藥由本校藥理教研室提供，經本院藥理教研室鑒定。電子天平（AE160型，瑞士Mettler公司）；生物機能實驗系統（BL-420 E+，泰盟，成都）；MedLab-U生物信號采集系統（上海欣曼公司）。

1.3 分組與造模 大鼠適應性喂養1周后，分為對照組、模型組、附子理湯低、中、高劑量組，每組10只，對照組予普通飼料，自由飲水，常態環境喂養。其余大鼠以10%水合氯醛按3 mL/kg腹腔注射麻醉，俯臥位，背部肩胛骨間備皮，碘伏、酒精消毒皮膚，鋪消毒孔巾，在肩胛骨中間切開皮膚，往背部切約4 cm切口，鈍性分離皮膚、皮膚下組織和肌肉，找到BAT（其組織細胞內含有大量血紅蛋白和高水平的血紅素卟啉，細胞呈棕色）并分離，7號線縫合，碘伏、酒精消毒皮膚切口。無菌紗布覆蓋切口并包扎牢固，送回動物房喂養。術后飼以高脂飼料 （83%基本飼料，15%甘油三酯，2%膽固醇），隔日將大鼠置于19℃恒溫實驗室，模擬寒冷刺激，連續3周。

1.4 給藥方法 高劑量組3周后第1日起在模型組基礎上，附子理中湯按20 g/kg體質量灌胃。中劑量組：附子理中湯按10 g/kg體質量灌胃。低劑量組：附子理中湯按5 g/kg體質量灌胃。對照組和模型組按0.9%氯化鈉注射液5 g/kg體質量灌胃。每日1次，連續灌胃4周。灌胃4周后第1日檢測指標。全部大鼠納入統計分析，沒有死亡脫失

1.5 標本采集與檢測 大鼠用10%水合氯醛按3mL/kg腹腔麻醉后，仰位固定。開胸暴露心臟，小心剪開心包膜，采用乏極化電極接觸心外膜記錄單相動作電位（MAP），記錄標準肢體Ⅱ導聯心電圖，MAP和Ⅱ導聯心電圖由MedLab-U生物信號采集系統同步描記。每隔6min記錄MAP，連續測量10個頻率穩定波形的單相動作電位數值，取其平均值為記錄結果。記錄心率（HR），動作電位時程（APD），動作電位 0相幅值（APA），動作電位 50%復極化時程 （APD50），90%復極化時程（APD90）。

1.6 統計學處理 應用SPSS 11.0統計軟件。計量資料以（）表示，采用t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 術后動物行為學觀察 施行肩胛骨BAT切除術后1周，大鼠出現畏冷寒戰、喜扎堆、拱背少動、體毛不榮等癥狀或體征。高脂飼料3周后，大鼠出現食欲不振、倦怠、消瘦、肛周污穢等癥狀或體征。

2.2 各組大鼠心肌細胞動作電位的比較 見表1。與對照組比較，模型組 HR、APD50均降低（P<0.05）；APD、APD90、APA 均顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，中劑量組 HR、APD、APD50均升高（P<0.05）；與模型組比較，高劑量組 HR 升高（P<0.05）而 APD、APD50、APD90、APA均顯著升高（P<0.01）。

表1 各組大鼠心肌細胞動作電位比較（）

表1 各組大鼠心肌細胞動作電位比較（）

與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

3 討 論

動物模型的構建是進行實驗研究的重要環節，以復合因素建立病證結合、適合中醫科研特點的動物模型值得探討，在本實驗工作中，筆者嘗試建立脾陽虛大鼠模型。脾陽虛證中脾虛癥狀表現為納少、消瘦、乏力、脘腹脹痛、便溏及腹瀉等；陽虛癥狀為畏寒喜溫、形寒肢冷等。又考慮到BAT為大鼠最主要的產熱物質［1-2］，施行肩胛骨BAT切除術減少其產熱物質來源，大幅度衰減其陽氣，使陽虛癥狀群突出，因此采用“BAT切除術+高脂飼料喂養+隔日寒冷環境刺激”的復合因素方法并結合大鼠行為學觀察評價建立脾陽虛證動物模型。本實驗中，筆者觀察到模型大鼠大便稀，肛門周圍有污物，畏冷寒戰、喜扎堆、拱背少動、體毛不榮等，參考脾陽虛證兩大癥狀群的文獻評價［3-4］，建立脾陽虛大鼠模型，這一方法有待同仁指正。

在本實驗工作中，筆者觀察到，和對照組比較，模型組 HR、APD50、APD、APD90、APA 均降低 （P<0.05 或0.01），提示脾陽虛模型動物發生心臟電生理病理改變?！端貑枴ど鷼馔ㄌ煺摗分赋觥瓣枤庹?，若天與日，失其所則折壽而不彰”，陽氣衰弱，無力鼓動心脈而出現病變，盡管心臟病變與心陽關系最密切，但以臨床為例，單純的心陽虛少見，以心脾或心腎陽虛等多見。從本實驗結果推斷，脾陽虛也可能累及心陽，從側面再次提示臨床以整體觀念進行辨證的重要性。

附子理中湯具有溫陽健脾功效，主治脾陽虛重證或心脾陽虛證。本實驗觀察到，與模型組比較，附子理中湯中劑量組、高劑量組HR提高（P<0.05），提示附子理中湯在一定程度上恢復脾陽虛動物心臟的正常自律性或傳導性。同時，附子理中湯能延長APD和升高APA，使之趨向于對照組，和模型組比較差異明顯（P<0.01），附子理中湯的干預作用和濃度有關，表現為隨濃度增高，APD和APD50明顯延長，推測是通過改變心肌細胞膜鉀、鈣和鈉離子通道特性，一定程度上提高心肌應激性所致［5］。改善心臟電生理病理變化可能是附子理中湯溫陽健脾功效的體現之一。

［1］Smith RE， Horwitz BA.Brown fat tissue and thermogenesis［J］.Physiol Rev，1969，49（2）：330-332，425.

［2］Nicholls DG，Locke RM.Thermogenic mechanisms in brown fat［J］.Physiol Rev，1984，64（1）：1-3.

［3］楊雪，楊文思，王勇，等.脾陽虛證中陽虛癥狀群的實驗評價［J］.中華中醫藥雜志，2008，23（3）：244-246.

［4］楊雪，楊文思，王勇，等.脾陽虛消化不良癥狀群客觀評價的實驗研究［J］.中國中醫基礎醫學雜志，2008，14（4）：271-272.

［5］馬越，田瑤，姚小芹，等.石韋抗大鼠緩慢性心律失常作用的實驗研究［J］.吉林中醫藥，2011，31（9）：915-916.