冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者血清同型半胱氨酸與氧化高密度脂蛋白水平及其相關性研究

趙新秀，王仁萍，胡 松，賈韻平，毛擁軍

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(CAD)是威脅人類健康的主要疾病之一，目前對其危險因素的探尋和防治已成為預防該疾病的重要手段。作為惟一保護因素的血脂指標高密度脂蛋白(HDL)一旦發生氧化反應生成氧化高密度脂蛋白(OX-HDL)，便將喪失逆轉膽固醇的作用，并可通過凝血、血小板聚集等多種途徑促進動脈平滑肌細胞(SMC)增加，從而加速動脈粥樣硬化[1-2]，因此OX-HDL成為CAD患者不可忽視的血脂監測指標。另外，血清同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)可通過多種機制導致動脈粥樣斑塊形成，是近年來研究較活躍的新的CAD事件評估危險因素[3]。目前國內外對于CAD血清Hcy與OX-HDL水平之間關系的研究甚少。本研究以CAD患者為研究對象，探討血清Hcy與OX-HDL的水平及二者的相關性。

1 對象與方法

1.1 研究對象 (1)采用分層隨機抽樣方法，抽取2012年6月—2013年6月青島大學醫學院附屬醫院特需保健科、心內科行冠狀動脈造影被確診為CAD的患者115例為CAD組，按WHO診斷標準中典型的臨床表現、心電圖、心肌酶學等檢查結果嚴格篩選患者；其中男65例，女50例；平均年齡(73.3±2.3)歲。選擇冠狀動脈造影正常者38例為對照組，其中男24例，女14例；平均年齡(69.3±11.9)歲。CAD組與對照組的性別構成、年齡比較，差異無統計學意義(χ2=0.517，P=0.300；t=0.93，P=0.350)。(2)依據2006年美國心臟協會(AHA)推薦，將血清Hcy水平>10 μmol/L定義為高同型半胱氨酸，將CAD患者分為Hcy正常組(28例)與Hcy異常組(87例)。Hcy正常組男17例，女11例；平均年齡(71.2±1.8)歲。Hcy異常組男48例，女39例；平均年齡(72.6±7.5)歲。Hcy正常組與Hcy異常組的性別構成、年齡比較，差異無統計學意義(χ2=0.265，P=0.386；t=1.12，P=0.270)。研究對象均簽署知情同意書，并排除急慢性感染、血液系統疾病、惡性腫瘤、腦血管疾病、肝腎功能不全、自身免疫性疾病及服用激素等免疫抑制劑和維生素類藥物者。

1.2 研究方法 患者于入院次日清晨空腹10 h后抽取肘靜脈血2 ml，置于血清管中，以3 000 r/min離心15 min，離心半徑為13.5 cm，離心后取血清，并用離心管分裝置于-80 ℃冰箱中貯存待用。采用羅氏日立7600全自動生化分析儀測定血清三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、脂蛋白a(LP-a)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、尿酸(UA)、葉酸(FA)及維生素B12(VitB12)水平；血清Hcy、OX-HDL水平測定則采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒，嚴格按照說明書操作。

2 結果

2.1 兩組Hcy與OX-HDL水平的比較 CAD組血清Hcy、OX-HDL水平均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05,見表1)。

2.2 Hcy正常組與Hcy異常組血脂指標水平的比較 Hcy異常組HDL水平低于Hcy正常組，OX-HDL、LDL水平高于Hcy正常組，差異均有統計學意義(P<0.05)；而兩組的TG、TC、LP-a水平比較，差異無統計學意義(P>0.05，見表2)。

2.3 CAD患者Hcy、OX-HDL的秩相關分析 分別以Hcy和OX-HDL為因變量，FA、VitB12、TC、TG、UA、HDL、LDL為自變量進行Spearman秩相關分析，結果顯示CAD組Hcy與FA、VitB12呈負相關，OX-HDL 與FA呈負相關(P<0.05，見表3)；同時對Hcy、OX-HDL做相關性分析，結果顯示Hcy與OX-HDL呈正相關(r=0.772，P=0.000，見圖1)。

表1 兩組 Hcy與OX-HDL水平的比較〔M(QR)〕

注:CAD=冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，Hcy=同型半胱氨酸，OX-HDL=氧化高密度脂蛋白

表2 Hcy正常組與Hcy異常組血脂指標水平的比較〔M(QR)〕

注：TG=三酰甘油，TC=總膽固醇,LP-a=脂蛋白a，HDL=高密度脂蛋白，LDL=低密度脂蛋白

表3 CAD患者Hcy、OX-HDL的秩相關分析

注：FA=葉酸,VitB12=維生素B12，UA=尿酸

圖1 CAD患者血清Hcy與OX-HDL水平的相關性散點圖

Figure1 Scatter plot of correlation between serum Hcy and OX-HDL levels in CAD patients

2.4 CAD影響因素的多因素Logistic回歸分析 采用多因素Logistic回歸分析，以CAD為因變量，年齡、性別、體質指數(BMI)、2型糖尿病病史、高血壓病史OX-HDL、Hcy、UA、TG、TC、HDL、LDL、LP-a為自變量，采用逐步法篩查CAD的影響因素。結果顯示高血壓病史、OX-HDL、Hcy是CAD發生的危險因素(見表4)。

3 討論

Hcy通過氧化應激使血管內皮功能發生障礙，直接導致血管內皮損傷。此外,Hcy還可促使血管平滑肌細胞增殖,促進炎性反應，增加血小板的黏附性和聚集性,促進血栓的發生和血管鈣化，導致凝血和纖溶異常等[4]；其還可通過促進血脂紊亂導致動脈粥樣硬化。Hcy含有活性巰基，可形成二硫鍵使許多蛋白質分子在

表4 CAD影響因素的多因素Logistic回歸分析

注：BMI=體質指數

內質網內發生錯誤折疊，從而使蛋白質分子不能順利地從內質網轉運至高爾基復合體，也就不能分泌到細胞表面，而在內質網中大量聚集造成應激狀態，而內質網應激可加劇心腦血管細胞脂質調節紊亂。用氧化型HDL單克隆抗體或串聯質譜法，均可在人體動脈粥樣硬化斑塊和CAD患者的血清中檢測到OX-HDL[5]。本研究OX-HDL的測定采用ELISA試劑盒，對照組和CAD組的OX-HDL水平分別為125.64(48.00)μg/L和198.29(48.38)μg/L，與Nakajima等[6]人的研究結果近似。體外試驗發現OX-HDL可減少巨噬細胞、成纖維細胞、SMC中膽固醇的流出，并抑制其與HDL受體連接，與天然HDL相比，OX-HDL可使巨噬/泡沫細胞內膽固醇及膽固醇酯的堆積增加[7]。另外OX-HDL還能通過凝血、纖溶、血小板聚集和活化途徑加速血栓形成、促進SMC增殖、發生炎性反應、導致內皮細胞損失[8]，從而加速動脈粥樣硬化的形成。本研究結果顯示，CAD組血清Hcy、OX-HDL水平均高于對照組，且多因素Logistic回歸分析結果顯示Hcy、OX-HDL是CAD發生的危險因素。提示Hcy與OX-HDL可通過炎性反應、氧化應激、內皮損傷、凝血異常等機制參與動脈粥樣硬化的形成。

研究證實，LDL在體內可被多種機制氧化修飾，促進動脈粥樣硬化的發生[4]。如血液循環中的Hcy發生自身氧化產生活性氧(ROS)，抑制NO的合成及其生物利用度[9]，使細胞膜上的LP-a發生氧化反應，導致LDL被氧化成OX-LDL，OX-LDL被巨噬細胞吞噬，從而加速細胞內膽固醇的聚集和泡沫細胞的形成[10]。近年來國內外研究發現具有抗動脈粥樣硬化作用的HDL同LDL一樣能被體內外多種因素如脂加氧酶、髓過氧化物酶、超氧陰離子、NO、內皮細胞、巨噬細胞等氧化修飾，形成OX-HDL后不但喪失抗動脈粥樣硬化作用，反而有致動脈粥樣硬化的作用[11]。有研究者采用同位素稀釋液相質譜/串聯質譜研究發現，人動脈粥樣硬化病變存在OX-HDL，在CAD患者粥樣病變內，HDL的 3-氯絡氨酸、3-硝絡氨酸[12-13]和氨甲酰賴氨酸[14]水平高于HDL水平，表面髓過氧化物酶(MPO)氧化人動脈壁內的HDL。為探討HDL能否像LDL一樣被Hcy氧化成OX-HDL，本研究搜集115例CAD患者血清，檢測Hcy、OX-HDL水平并最終得出二者呈正相關，但其相關性是否能證明Hcy是致動脈粥樣硬化的機制之一及其具體機制還有待通過動物實驗深入研究。同時本研究發現，CAD組Hcy與FA、VitB12呈負相關。OX-HDL 與FA呈負相關，提示補充FA、維生素對于降低Hcy、OX-HDL水平存在一定作用，但其具體機制還有待于進一步研究。

綜上所述，血清Hcy、OX-HDL是CAD的危險因素，可發揮疾病診斷和病情評估作用，并且二者在CAD中存在相關性，可為今后探究OX-HDL的產生及致病機制提供線索。另外，熊向暉[9]和戴瑞等[10]的相關研究得出Hcy與冠狀動脈病變嚴重程度相關，因此，對于今后的研究還有待于采用Gensini積分評價冠狀動脈病變程度，比較不同Gensini積分患者血清Hcy水平，探討Hcy水平評價動脈粥樣硬化斑塊穩定性及疾病嚴重程度的價值。本研究由于從外周靜脈采血，可能不能充分反映CAD患者冠狀動脈內各類因子的變化，如果經冠狀竇采血可能更為準確；并且由于觀察時間較短，樣本量不足，故今后將進一步擴大樣本量進行深入研究；鑒于研究對象為CAD患者且為研究初級階段，因此尚待進行Hcy、OX-HDL的相關因子受體拮抗劑干預試驗。

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