液相色譜分離－飛行時間質譜法鑒定中藥三七中主要皂苷化合物

何 弦 唐曉花 閆海全 李崇瑛

（1.成都理工大學材料與化學化工學院，四川 成都，610059；2.廣西欽州市欽南區沙埠中學，廣西 欽州，535000；3.四川省瀘州市環境保護監測站，四川 瀘州，646000）

三七為五加科人參屬，在我國傳統名貴中藥材中具有較重要的地位，是馳名中外的“云南白藥”的主要功能成分［1］，我國廣西是傳統產區之一。在中國傳統中醫中發揮活血化瘀和消腫定痛的功效［2］。研究發現，三七中含有的皂苷化合物是具有特征性的活性成分，對它們的深入研究已成為業界技術熱點。三七總皂苷和單體皂苷含量測定研究以及三七總皂苷化合物穩定性已有較多報道［3－6］，但普遍采用可靠性較低的色譜分離－紫外檢測并用對照品進行定性的方法，而可靠性更高的質譜應用近幾年才有所報道［7－8］。但由于三七成分復雜，準確鑒定其成分要靠高分辨色譜－質譜才能完成。

筆者建立了三七中皂苷含量的液相色譜分離－飛行時間質譜鑒定方法，對廣西三七中的主要皂苷化合物進行了確認，飛行時間質譜的高分辨率保證了結果的準確性。實驗結果表明人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd等是廣西三七中皂苷化合物的主要類型。

1 實驗部分

1.1 主要儀器和試劑

液相色譜－質譜聯用儀：Waters Q－Tof－2，美國Waters公司；恒溫水浴鍋：HH－Z4，鞏義市英裕高科儀器廠；精密電子天平：BSA224S，北京賽多利斯儀器系統有限公司；電熱恒溫鼓風干燥箱：DHG，上海一恒科技有限公司；三七總皂苷樣品：95%～99%，廣西昌州天然產物開發有限公司；甲醇：色譜純，浙江黃巖化學試劑有限公司；乙腈：色譜純，國藥集團化學試劑有限公司；高純氮氣：99.999%，廣漢市氨源化工有限公司；實驗所用其他試劑均為分析純，實驗用水為一級水。

1.2 三七總皂苷樣品溶液的制備

精密稱取三七總皂苷0.25g（精確至0.01g），置于250mL容量瓶中，用高純水溶解并稀釋至標線，制得1mg／mL三七總皂苷樣品溶液。

1.3 儀器工作條件

1.3.1 高效液相色譜儀

色譜柱：Kromasil C18（200mm×4.6mm，5μm）；流速：1mL／min；檢測波長：202nm；實驗溫度：室溫；梯度洗脫條件：流動相為乙腈－水，采用梯度洗脫，洗脫程序見表1，進樣量：20μL。

表1 流動相梯度洗脫條件

1.3.2 質譜儀

檢測模式：負離子模式；霧化器壓力：0.34MPa；毛細管電壓：3600V；碎片器電壓：100V；氮氣流量：10L／min；氮氣溫度：300.0℃。

2 結果與討論

2.1 三七總皂苷總離子流圖

在1.4.1高效液相儀器工作條件下，三七總皂苷標準樣品溶液的總離子流圖如圖1。

由圖1可見，用乙腈和水進行梯度洗脫可以在Kromasil C18色譜柱中對三七總皂苷樣品中的化合物進行較好的基線分離，為后續質譜定性鑒定中獲得可解釋的質譜圖提供了基礎。

2.2 質譜鑒定

由于皂苷化合物易形成脫氫負離子和脫糖負離子，預計電噴霧負離子質譜模式便可對皂苷化合物進行有效的定性鑒定。

在1.4.2質譜儀工作條件下，對圖1中含量較豐富的5種化合物（1，2，3，4，5號峰，分別對應人參皂苷Rg，Re，R1，Rb1，Rd）進行質譜鑒定，質譜圖見圖2，質譜數據及碎片歸屬解析結果見表2。

圖1 三七總皂苷總離子流圖

圖2 5種皂苷化合物質譜圖

皂苷化合物中的醇型皂苷元的羥基易電離形成脫氫負離子［M－H］－，從該離子的m／z值即可獲得未知皂苷化合物的分子量。皂苷化合物中糖分子在電噴霧條件下即可與苷元分子斷裂形成脫糖碎片離子，根據不同皂苷化合物皂苷元種類、糖分子種類及數量，即可對碎片離子進行解釋并對皂苷化合物進行可靠的定性鑒定。

表2 三七中五種皂苷化合物的質譜碎片分析結果

3 結論

（1）三七總皂苷成分復雜、種類繁多、極性差異較大，采用梯度洗脫液相色譜才能在較短時間內獲得較好的分離效果，但還不足以完成所有成分的基線分離。

（2）醇型皂苷元的羥基易電離形成負離子，且糖分子在電噴霧條件下即可與苷元分子斷裂形成碎片離子，因此用電噴霧負離子模式對皂苷化合物進行質譜鑒定更有效，且TOF－MS的高分辨率保證了定性鑒定結果的準確性。

（3）廣西三七中含有較豐富的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd等皂苷化合物，是三七中的上品，既可入藥也可食補。

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