EphA2在胃癌中的表達及臨床病理學意義

金響國 孫向東 胡 凱 李興江 張麗艷 許景偉 王瑩穎

(齊齊哈爾醫學院第一附屬醫院普外一科，黑龍江 齊齊哈爾 161041)

胃癌是消化系統常見的腫瘤之一，其轉移及復發是引起患者死亡的主要原因，也是影響預后的主要因素。近來研究表明作為酪氨酸激酶受體家族重要成員之一的促紅細胞生成素產生肝細胞受體 A2 家族成員(EphA2 )在調節腫瘤細胞生長、轉移及血管形成過程中發揮重要的作用〔1，2〕。EphA2是最早被分離出來的Eph亞家族成員，在多種腫瘤組織中有高表達〔2〕。有關EphA2表達與胃癌發生發展關系的研究較少。本文采用免疫組化SP法檢測EphA2在胃癌組織中的表達，旨在探討其在胃癌組織中表達的臨床病理學意義，為胃癌的臨床治療提供基礎理論依據。

1 資料和方法

1.1標本來源 收集本院病理中心2009年1月1日至2010年12月31日胃腺癌手術標本60例，其中女24例，男36例，年齡50～62歲，中位年齡55歲，術前患者均未接受放化療。高分化胃腺癌23例(高分化管狀腺癌16例、高分化乳頭狀腺癌7例)，中低分化腺癌37例(中分化管狀腺癌18例、中分化乳頭狀腺癌5例、低分化黏液腺癌10例、腺鱗癌3例、神經內分泌腫瘤1例)。浸潤深度：早期胃癌(癌組織局限胃壁黏膜層及黏膜下層)10例；進展期胃癌(癌組織浸潤到黏膜下層)50例；有淋巴結轉移42例，無淋巴結轉移18例；有血道轉移13例，無血道轉移47例。腫瘤直徑<4 cm 26例，腫瘤直徑≥4 cm 34例。根據國際抗癌聯盟(IUCC)胃癌TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ～Ⅳ期37例。

1.2主要試劑 兔抗EphA2多克隆抗體(SC-924，Santa Cruz)，通用型SP免疫組化試劑盒(SP-9000)及二氨基聯苯胺(DAB，ZLI-9031)均購北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3免疫組織化學檢測 胃癌及癌旁胃組織(距腫瘤邊緣>5 cm的組織標本)經石蠟包埋后5 μm連續切片，常規脫蠟、水化、抗原修復。SP免疫組織化學染色方法按試劑盒說明書進行，兔抗EphA2 稀釋比例為1∶200。磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對照。已知陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對照。

1.4結果判斷標準 EphA2蛋白主要表達于細胞質中，以細胞質內出現黃的顆粒為陽性細胞。結果判定〔3〕：染色強度計分淺黃色計1分，棕黃色計2分，黃褐色或棕褐色計3分。染色陽性細胞百分率計分<25%計0分，26%～50%計1分，51%～75%計2分，>75%計3分。染色強度的計分乘以陽性細胞率計分≥3為陽性表達，計分<3分者為陰性表達。

1.5統計學處理 應用SPSS13.0軟件進行分析，組間差異之間采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1EphA2胃癌組織及癌旁組中的表達 EphA2在胃癌組織中的陽性表達率為76.7%(46/60)，主要表達于癌細胞的細胞質中，呈棕黃色顆粒狀。EphA2在癌旁胃組織中的陽性表達率為48.3%(29/60)。EphA2在胃癌組織中的陽性表達率高于癌旁胃組織(χ2=10.276，<0.01)。見圖1。

圖1 胃癌組織中EphA2陽性表達(×200)

2.2EphA2蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系 EphA2在中低分化胃癌組織中的陽性表達率高于高分化胃癌組織(P<0.05)；在早期胃癌組織中的陽性表達低于進展期胃癌組織(P<0.05)；在有淋巴結轉移組胃癌組織中表達高于無淋巴結轉移組(P<0.05)；在TNM分期中Ⅰ～Ⅱ期表達的陽性率低于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)。EphA2的陽性表達與患者年齡、性別、腫瘤直徑及是否有血道轉移無關(P>0.05)。見表1。

表1 EphA2表達與胃癌臨床病理學特征的關系〔n(%)〕

3 討 論

Eph家族是已知受體酪氨酸激酶家族(RTK) 中最大的亞家族，為膜結合型糖蛋白，與配體結合后其構象發生改變，形成受體-配體復合物，激活胞質內酪氨酸激酶，啟動下游不同信號通路，從而引起一系列生物學效應，參與胚胎發育、血管發生、細胞生長、分化、遷移及腫瘤形成等過程〔1，2〕。

EphA2基因是第一個被篩選出來的Eph亞家族成員，定位染色體1p36.1，編碼分子量為130 kD的蛋白。EphA2 與其配體結合，啟動細胞內不同信號傳導通路，發揮不同作用〔2，4～7〕。EphA2廣泛表達于人類多種腫瘤細胞和腫瘤組織中，如肺癌、胃癌和結腸癌中〔4～7〕。本研究說明EphA2在胃癌組織中的高表達與胃癌的發生有著密切的關系，EphA2表達增高與其蛋白穩定性增加、降解減少有關；EphA2表達增加促進細胞的惡性轉化〔8〕及細胞增殖〔9〕參與腫瘤的發生及發展。本研究結果與袁偉杰〔5，6〕等的研究結果基本一致，認為EphA2的高表達與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移及TNM分期密切相關，說明EphA2蛋白的表達增加在胃癌的惡性進展中發揮了重要作用。已有研究顯示，EphA2蛋白具有促進腫瘤侵襲的作用。EphA2受體與其配體結合發揮作用，如結合血管內皮生長因子(VEGF)促進腫瘤血管生成、通過調節鈣黏蛋白及黏著斑激酶等影響腫瘤細胞間的黏附或腫瘤細胞與細胞外基質的黏附，促進腫瘤細胞的遷移和侵襲〔9〕，進而促進腫瘤的發展。針對EphA2的靶向治療研究也取得一定進展〔10〕。

綜上所述，EphA2的高表達與胃癌的發展、浸潤密切相關，在臨床上檢測EphA2的表達能作為判斷胃癌惡性程度的指標之一。EphA2有望成為胃癌基因治療的一個新靶點，對其結構和功能的進一步研究將為胃癌的治療開辟新思路。

4 參考文獻

1Lindberg RA，Hunter T.cDNA cloning and characterization of eck，an epithelial cell receptor protein-tyrosine kinase in the eph/elk family of protein kinase〔J〕.Mol Cell Biol，1990；10(12)：6316-24.

2Zhou N，Zhao WD，Liu，DX，etal.Inactivation of EphA2 promotes tight junction formation and impairs angiogenesis in brain endothelial cells〔J〕.Microvasc Res，2011；82(2)：113-21.

3王明濤，王紹清.胃癌組織VEGF表達和MVD與臨床病理因素相關性分析〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2012;19(14)：1078-81.

4管宏俊，馮一中，陳云琦，等.EphA2、E-cad和VEGF在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義〔J〕.江蘇醫藥，2011；37(1)：65-7.

5袁偉杰，陳志康，伍紹斌，等.EphA2和E-cadherin在胃癌中的表達及其意義〔J〕.中國普通外科雜志，2008；17(4)：397-9.

6Nakamura R，Kataoka H，Sato N，etal.EPHA2/EFNA1 expression in human gastric cancer〔J〕.Cancer Sci，2005；96(1)：42-7.

7蔣 萍，李景和，羅庚求，等.大腸癌組織中EphA2，VEGF和MMP9蛋白的表達及其相關性研究〔J〕.中國普通外科雜志，2007；16(7)：696-9.

8Zantek ND，Asimi M，Fedor-Chaiken M，etal.E-cadherin regulates the function of the EphA2 receptor tyrosine kinase〔J〕.Cell Growth Differ，1999；10(9)：629-38.

9劉 輝，郭建文，劉江惠，等.胃癌組織中EphA2基因的表達及其與細胞凋亡、增殖的關系〔J〕.中國老年學雜志，2010；30(3)：293-6.

10方艷偉，邱文娜，耿少梅.EphA2-ephrinA1與惡性腫瘤發生的關系及靶向治療潛能探討〔J〕.腫瘤防治研究，2012；39(6)：750-3.