裴明日,王苗苗,姜 麗
(吉林省吉林市食品藥品檢驗所,吉林 吉林 132001)
紅寶散由葛根、紅花、紫草等14味中藥制成的散劑,具有祛瘀止痛、強筋壯骨之功效[1]。該制劑為成方制劑,無含量測定方法。為有效控制藥品質量,提高該制劑的質量標準,筆者采用高效液相色譜法測定葛根素的含量,結果表明,該方法準確、簡便、可行,可供該制劑質量控制參考。
LC-2010A型高效液相色譜儀;CLASS-VP色譜工作站;METTLER TOLEDO AG-135型電子天平。葛根素對照品(中國藥品生物制品檢定所,供含量測定用,純度 96.0%,批號為110752-200912);紅寶散(市售樣品,吉林市皇城股骨頭??漆t院,批號分別為120401,120402,120403);甲醇為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純。
色譜柱:Apollo C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流動相:甲醇 -水(25 ∶75);流速:1.0 mL/min;檢測波長:250 nm;柱溫:室溫。理論板數按葛根素峰計算應不低于4 000。
精密稱取葛根素對照品適量,加甲醇制成質量濃度為0.1001g/L的溶液,即得對照品溶液[2]。取本品適量,研細,取約1.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入30%乙醇50 mL,稱定質量,加熱回流30 min,放冷,再稱定質量,用30%乙醇補足減失的質量,搖勻,濾過,取續濾液,即得供試品溶液[2]。因實驗室只能做小量的樣品,故按處方量將取樣量減量,取除葛根以外的處方中其余藥材1/10的量,依法制成散劑,再按供試品溶液制備方法,制成陰性對照品溶液。
專屬性試驗:分別精密吸取2.2項下3種溶液各5 μL,注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,見圖1??梢?,供試品溶液色譜中,在與對照品溶液色譜相應位置上有相同保留時間(葛根素20.292 min)的色譜峰,陰性試驗無干擾。
圖1 高效液相色譜圖
線性關系考察:精密吸取對照品溶液 1,2,5,8,10 μL,注入高效液相色譜儀,測定峰面積。以峰面積為縱坐標、進樣量為橫坐標進行線性回歸,得回歸方程 Y=6 000 000 X+6 174.1,r=1.0000(n=5)。結果表明,葛根素進樣量在 0.1001 ~1.0010μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。
穩定性試驗:精密吸取葛根素對照品溶液(0.100 1 g/L),按擬訂色譜條件分別在 0,4,8,12,24 h時測定。結果的 RSD為0.8%,表明葛根素對照品溶液在24 h內穩定。
重復性試驗:取同一樣品(批號為120403)共5份,依法制備供試品溶液,按擬訂方法測定。結果的 RSD為0.7%,表明該方法重現性較好。
精密度試驗:精密吸取葛根素對照品溶液(0.100 1 g/L)5 μL,按擬訂色譜條件重復進樣5次測定,計算葛根素面積的 RSD為0.6%,表明儀器精密度較好。
加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為120403,葛根素含量3.972 mg/g)約1 g,精密稱定,共9份,分別置具塞錐形瓶中,精密加入葛根素對照品,相當于樣品含量的80%,100%,120%,依法制備供試品溶液,按擬訂色譜條件測定。結果見表1。
精密稱取3個批號的樣品(每個批號2份),依法制備供試品溶液,分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各5 μL,注入高效液相色譜儀,測定3批樣品中葛根素的峰面積,按外標法計算其含量,結果批號分別為120401,120402,120403的3批樣品中葛根素含量分別為 2.983,4.207,3.972 mg/g。
表1 葛根素加樣回收試驗結果(n=9)
3批樣品中葛根素的最高含量為4.207mg/g,最低為2.983mg/g,綜合考慮,確定限量每克含葛根素不得低于2.952 mg[3-5]。本試驗所用方法簡便、準確,重復性好,可供該制劑質量控制參考。
[1]JLZJ-ZB-0019-2006,吉林省食品藥品監督管理局醫療機構制劑標準[S].
[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:312.
[3]江蘇新醫學院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1977:4 796.
[4]國家醫藥管理局中草藥情報中心站.植物藥有效成分手冊[M].北京:人民衛生出版社,1986:871.
[5]張 蕾,潘 楊.不同品種及產地的葛根中葛根素含量的比較[J].中國中藥雜志,1995,20(7):399-400.