IGHMBP2過表達促進食管鱗癌細胞的侵襲和遷移

王春麗，郝佳潔，吳李飛，潘蓓青，徐昕，蔡巖，王明榮，賈雪梅

?

IGHMBP2過表達促進食管鱗癌細胞的侵襲和遷移

王春麗1，郝佳潔2，吳李飛3，潘蓓青2，徐昕2，蔡巖2，王明榮2，賈雪梅1

1. 安徽醫科大學組織胚胎學教研室，合肥 230032；2. 中國醫學科學院北京協和醫學院，腫瘤醫院腫瘤研究所，分子腫瘤學國家重點實驗室，北京 100021；3. 安徽醫科大學安慶市立醫院消化內科，安慶 246000

(Immunoglobulin mu binding protein 2)基因編碼一種解旋酶，參與DNA的復制和修復，并且作為轉錄調節因子在基因轉錄中發揮重要作用?；蚨ㄎ挥?1q13.2，該染色體區段在食管鱗癌中擴增頻率較高。為了探討基因在食管鱗癌中的擴增情況及其在食管鱗癌中的作用，文章對本實驗室前期報道的59例食管鱗癌原發腫瘤array-CGH數據進行分析，結果顯示基因擴增頻率為28.9%(17/59)。進一步利用熒光原位雜交(FISH)和Western blot技術，發現食管鱗癌細胞系KYSE30、KYSE180、KYSE510和KYSE150中存在基因擴增/增益以及蛋白高表達。敲降IGHMBP2后，KYSE30和KYSE150細胞的侵襲遷移能力明顯降低(<0.001)，侵襲遷移相關蛋白E-cadherin的表達水平升高；敲降后轉染IGHMBP2質粒，回復其蛋白表達后，細胞的侵襲遷移能力又得以恢復(<0.01)。上述結果表明，IGHMBP2過表達可能通過降低E-cadherin的表達從而增強食管鱗癌細胞的侵襲遷移能力。

IGHMBP2；食管鱗癌；擴增；侵襲；遷移

食管鱗癌是人類常見的惡性腫瘤之一。盡管術前分期充分，可手術原發性食管鱗癌患者的術后5年生存率仍未超過40%[1]。近年來，手術方式和放化療技術取得很大改進，但食管鱗癌仍然具有較差預后[2]。因此，研究食管鱗癌發生和轉移的分子機制，將有助于了解腫瘤形成原因，為建立新的治療方法提供可能。

基因擴增是惡性腫瘤常見的遺傳學改變之一[3~5]，也是癌基因激活的機制之一[6]。擴增引起的DNA拷貝數增加可能通過上調凋亡抑制蛋白表達等機制，導致癌變細胞逃避凋亡，從而產生耐藥[7,8]。因此基因擴增有可能作為腫瘤治療的分子靶點[9]。

Ying等[10]利用比較基因組雜交鑒定出3q26-q27、8p22-p24、11q13及13q21-q31等染色體區段的擴增。位于11q13區段的和等癌基因的擴增可能在食管鱗癌中發揮重要作用，其中擴增與位于中上段食管腫瘤的低分化顯著相關，而食管鱗癌中擴增及蛋白過表達可能與淋巴結轉移相關[11,12]。Shi等[13]發現11q13.3染色體區段內基因在mRNA及其編碼的蛋白ANO1水平均高表達，且mRNA水平和拷貝數增加相關，蛋白過表達與淋巴結轉移和臨床進展期相關。11q13.1-q13.4、3q24-q29等是最常見的拷貝數改變的區域，研究發現在食管鱗癌病人中長生存組和短生存組均檢測到位于11q13.2的兩個基因(和)的拷貝數改變[14,15]。因此推測11q13.2可能存在對食管鱗癌發生發展起重要作用的基因。

本文對59例食管鱗癌原發腫瘤比較基因組雜交微陣列(Array-CGH)數據進行了分析，并在8個食管鱗癌細胞系中檢測了(Immunoglobulin mu binding protein 2)基因的擴增和表達情況，初步探討了其在食管鱗癌細胞中的作用。

1 材料和方法

1.1 食管鱗癌細胞系

KYSE30、KYSE70、KYSE150、KYSE180、KYSE410、KYSE450、KYSE510和Colo680N食管鱗癌細胞系由日本東京大學Shimada教授惠贈。細胞培養條件：含10%胎牛血清(康源生物)的RPMI 1640培養基(BIOROC)，在37℃含5%CO2的培養箱中培養。

1.2 熒光原位雜交(FISH)及結果評定標準

基因BAC探針(NONSC29F5)和11號染色體著絲粒探針(Centromere enumeration probe，CEP)11分別用Cyanine 3 (Cy3)-dUTP和Fluorescein (FITC)-dUTP通過隨機引物法標記。

熒光原位雜交步驟及圖像采集參照本實驗室之前報道的方法[16]。

FISH結果評定標準為：計算細胞核內紅色的熒光信號和綠色熒光信號的數目比值，若紅色和綠色熒光信號的數目大于3而且比值大于或等于1.5視為陽性擴增；若紅色和綠色熒光信號的數目等于3而且比值等于1視為增益；若紅色和綠色熒光信號的數目等于2則視為未擴增。

1.3 Western blot

培養細胞至對數生長期時收獲，用預冷PBS洗兩次，加入適量PBS，用細胞刮刮取細胞收集于1.5 mL離心管中，1 000 r/min離心10 min后棄上清，加入細胞裂解液，冰上裂解30 min，4℃、12 000 r/min離心15 min，取上清移至新的離心管中。蛋白定量后取50 μg蛋白樣品，加入上樣緩沖液，沸水浴中變性10 min，離心，經10% SDS-PAGE在80 V電泳30 min，然后100 V電泳2 h；采用半干式電轉儀(12 V，2 h)將蛋白從分離膠轉移至PVDF膜，5%牛奶封閉，分別加入一抗4℃孵育過夜，一抗分別為抗IGHMBP2(Proteintech)、E-cadherin(BD)、β-catenin (Cell signaling Technology)和GAPDH(Proteintech)。TBST洗3次，每次6 min，以辣根過氧化物酶標記羊抗兔IgG和羊抗鼠IgG(Applygen)為二抗常溫孵育1 h，加入化學發光劑(Applygen)，在X片膠上顯影。

1.4 siRNA轉染

siRNA靶序列分別為5￠-GCUUUACUUCUGG-U-GAUAUTT-3￠和5￠-GGACACCUCCCAGAAAGA-ATT--3￠，由吉瑪基因公司設計。Non-silencing siRNA序列為5￠-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3￠。siRNA溶于125 μL DEPC水后，4℃溶解過夜。將對數期細胞接種到6孔板，待細胞長到30%~50%時，用LipofectamineTM2000 (Invitrogen)轉染。5 μL siRNA 和LipofectamineTM2000分別溶于250 μL Opti- MEM(Gibco)，放置5 min混勻，室溫放置20 min。6孔板中細胞用PBS洗2次后，用少量無血清無抗生素RPMI 1640洗一次，加入2 mL RPMI 1640。將上述混合液加入6孔板中，混勻，37℃含5%CO2的培養箱中培養4~6 h，換成含10%胎牛血清的RPMI 1640培養基培養24~48 h。

1.5 載體構建

以食管正常上皮組織cDNA為模板，擴增基因CDS全長。上游引物為5￠-TAAAAG-CTTCGATGGCCTCGGCAGCTG-3￠，下游引物為 5￠-TGCTCTAGACGTCCCCCTCTCCTTCCT-3￠。PCR擴增體系如下：模板1 μL，2×GC buffer 10 μL，dNTP (2.5 mmol/L)1.6 μL，引物(10 μmol/L)1 μL，PrimeStar (2.5 U/μL)0.2 μL，ddH2O 6.2 μL。PCR擴增程序如下：98℃預變性5 min；98℃ 15 s，60℃ 5 s，72℃ 3 min，30次循環；最后再72℃延伸7 min。將PCR片段和空載體pcDNA3.1于37℃雙酶切6 h(體系為：PCR片段900 ng，空載體900 ng，d Ⅲ 1 μL，Ⅰ 1 μL，10×M 2 μL，Nonclease-free water補足至20 μL體系)，載體酶切產物經電泳后切膠純化回收，PCR片段酶切產物直接回收，回收產物載體和模板以1:3 pmol的比例，16℃在Solution I(TaKaRa)作用下進行連接16 h。將連接產物pcDNA3.1-IGHMBP2轉化入Trans5α感受態細胞(TransGen Biotech)，經菌液PCR鑒定，選取陽性克隆測序驗證。

1.6 細胞侵襲和遷移實驗

敲降或正轉質粒的細胞消化收集后，用不含血清的RPMI 1640懸浮細胞并計數。在細胞遷移實驗中，Transwell小室內加入200 μL含1×105個細胞的懸液，對應24孔板中加入700 μL含20%血清的RPMI 1640，將加好的Transwell板置于5%CO2培養箱中培養(KYSE30培養24 h，KYSE150培養36 h)，取出培養板，使用PBS將小室洗2次，置于固定液中(甲醇:丙酮=1:1)固定20 min，0.5%結晶紫染色30 min，水洗2~3次。將膜置于載玻片上，滴加中性快干膠后用蓋玻片封片，鏡下拍照計數。細胞侵襲實驗需提前將Matrigel膠置于4℃解凍，用無血清的RPMI 1640稀釋至終濃度300 ng/μL，加50 μL于Transwell 小室，室溫晾至1 h，吸出后用RPMI 1640洗2次，然后加入200 μL含1×105個細胞的懸液，對應24孔板中加入700 μL含20%血清的RPMI 1640，于5%CO2培養箱中培養(KYSE30培養24 h，KYSE150培養36 h)，取出培養板，使用PBS清洗2次，固定、染色及封片步驟同細胞遷移實驗。

1.7 細胞增殖檢測

敲降處理48 h后，消化收集細胞，進行計數。96孔板內每孔加入含1000~2000個細胞的200 μL懸液。每組至少設3個平行孔和空白對照孔，共接種7板，37℃、5%CO2培養箱中培養，每天取出一塊96孔板進行檢測。CCK-8用RPMI 1640按1:10稀釋，每孔加入100 μL的CCK-8稀釋液，37℃培養箱培養1 h，酶標儀(BioTek)測定450 nm(450)吸光值。以不同處理組的450為縱坐標，培養時間為橫坐標，繪制細胞生長曲線。

1.8 統計方法

應用SPSS17.0統計軟件對數據進行統計學分析。兩組間均數的比較采用檢驗兩組以上均數間的比較采用單因素方差分析。<0.05代表具有顯著性差異。

2 結果與分析

2.1 IGHMBP2在食管鱗癌細胞中擴增和過表達

本文對本實驗室前期報道的59例食管鱗癌原發腫瘤array-CGH數據(GEO編號：GSE46452)進行進一步分析，結果顯示的擴增頻率為28.9%(17/59)(圖1A)。對8個食管鱗癌細胞系進行了FISH檢測，結果顯示在KYSE30、KYSE180和KYSE510中呈現擴增，在KYSE70、KYSE150、KYSE410和KYSE450中呈現增益，在Colo680N中未擴增(圖1B)。Western blot結果顯示，在未擴增的細胞系Colo680N中，其蛋白表達水平較低；在增益的4個細胞系(KYSE70、KYSE150、KYSE410和KYSE450)中，蛋白表達量高于未擴增的細胞系Colo680N；而在擴增的3個細胞系(KYSE30、KYSE180和KYSE510)中，蛋白表達水平最高。

圖1 IGHMBP2基因在食管鱗癌的擴增及蛋白表達情況

A：array-CGH分析(定位于11q13.2)在食管鱗癌原發腫瘤擴增。每一個紅色方塊代表一個探針?？v坐標代表基因拷貝數的log2ratio值，該值為0時代表基因無拷貝數改變，大于0為擴增。B：FISH結果?；蛱结楴ONSC29F5(Cy3- dUTP，紅色)的信號明顯多于CEP11(FITC-dUTP，綠色)的信號，表明該基因存在擴增；基因探針與CEP11均具有3個信號，表明存在增益；基因探針與CEP11均具有2個信號，表明未擴增。C：Western blot結果。

2.2 IGHMBP2過表達促進食管鱗癌細胞的侵襲和遷移能力

選取IGHMBP2蛋白水平表達較高的KYSE30和KYSE150細胞，檢測其對細胞的侵襲和運動能力的影響。結果顯示，KYSE30和KYSE150中敲降IGHMBP2后，食管鱗癌細胞的侵襲和遷移能力明顯降低(<0.001)(圖2：A，B)；在敲降IGHMBP2后的KYSE30和KYSE150中，回復IGHMBP2的表達后，兩種細胞的侵襲和遷移能力均得到恢復(<0.01) (圖2：C，D)。

為了排除細胞增殖對上述實驗結果的影響，本文同時檢測了IGHMBP2敲降對細胞增殖能力的影響。結果顯示，敲降和未敲降IGHMBP2的KYSE30細胞增殖速度始終較為接近；對于敲降和未敲降IGHMBP2的KYSE150細胞，在48 h內的增殖速度也較為接近(圖2E)，表明IGHMBP2 敲降對細胞侵襲和遷移能力的影響與細胞增殖無關，由此可以排除細胞增殖對上述Transwell實驗結果的影響。

圖2 IGHMBP2過表達顯著增強食管鱗癌細胞的侵襲遷移能力

A：KYSE30和KYSE150中敲降IGHMBP2后，聚碳酯膜下表面每個視野的細胞數在敲降組明顯低于對照組和親本組細胞數；B：3次實驗統計結果(mean ± SD，***代表<0.001)；C：KYSE30和KYSE150中敲降后聚碳酯膜下表面每個視野的細胞數減少，敲降后正轉IGHMBP2，每個視野的細胞數增多；D：3次實驗統計結果(mean ± SD，**代表<0.01)；E：敲降IGHMBP2后食管鱗癌細胞的增殖情況。2個細胞系敲降48 h內的增殖速度與對照組比較均無顯著變化。

2.3 敲降IGHMBP2能夠上調E-cadherin蛋白表達

為了明確該基因在食管鱗癌細胞侵襲遷移惡性表型中作用，本文分析了IGHMBP2對細胞侵襲遷移相關分子的影響。結果顯示敲降IGHMBP2后，KYSE30中E-cadherin蛋白的表達水平升高，且KYSE150中E-cadherin蛋白的表達水平也略微升高，而β-catenin蛋白表達水平均未見明顯變化(圖3)。

圖3 敲降IGHMBP2后E-cadherin蛋白表達上調

3 討 論

染色體拷貝數改變和結構異常是食管鱗癌常見的特征，可能與腫瘤的發生和進展有關。食管鱗癌中3q26、8q24、11q13等區段的擴增和3p14、16p13、18q22等區段的丟失是常見的染色體異常[15,17,18]。位于11q13染色體的CCND1是從G1期到S期的重要調節因子，其擴增與食管鱗癌進展和患者預后相 關[19]。一些癌癥相關基因，如、和等均位于11q13區段，基因也位于此區段。本文在28.9%的食管鱗癌原發腫瘤中檢測到擴增，還發現該基因在食管鱗癌細胞KYSE30、KYSE180和KYSE510中擴增且高表達。該基因在KYSE150中未擴增，但存在增益，而且其蛋白表達水平也較高。

1993年，Mizuta等[20]分離了編碼IGHMBP2蛋白的小鼠cDNA序列，其特異結合于富含G嘌呤的5￠-磷酸化的單鏈DNA，編碼蛋白屬于解旋酶超家族，參與DNA復制、重組和修復。Fukita等[21]克隆了人同源IGHMBP2蛋白的cDNA序列，發現其含解旋酶序列，可能參與免疫球蛋白μ鏈的轉換。Liepinsh等[22]通過核磁共振光譜學解析了人IGHMBP2的R3H結構域的3D結構，其能夠以序列特異性方式結合單鏈DNA或RNA。在肝癌治療中，Gemfibrozil可能促進IGHMBP2結合病毒反應組件，然后激活載脂蛋白I(apoA-I)啟動子，使apoA-Ⅰ表達水平上調，從而有利于膽固醇轉運至肝臟代謝[23]。在神經膠質細胞中，IGHMBP2和其截短體膠質因子1(GF-1)能夠調節JC病毒啟動子活性，下調JCV病毒的復制水平和上調其轉錄水平，這一過程可能參與脫髓鞘疾病進行性多灶性腦白質病的發病機制[24]。近期有文獻報道IGHMBP2可能是蛋白翻譯機制的組成成分之一，可能發揮遺傳調控作用進而抑制運動神經元變性[25]。這些研究表明，IGHMBP2是一個多功能蛋白，可能影響轉錄、重組、翻譯等多種細胞功能。本文發現敲降IGHMBP2后，食管鱗癌細胞的侵襲和遷移能力明顯減弱，轉染IGHMBP2質粒后，食管鱗癌細胞的侵襲和遷移能力又得以恢復，而且排除了增殖對侵襲和遷移能力的影響，表明該基因可能促進食管鱗癌細胞的侵襲和遷移。

侵襲遷移是食管鱗癌細胞發生遠端轉移的重要步驟，與侵襲遷移相關的一些分子，如MMPs家族是一組鋅依賴性內肽酶，參與腫瘤的生長、分化、凋亡、遷移和侵襲變化[26,27]。上皮細胞-間充質轉換在癌癥侵襲遷移中發揮重要作用，主要特征表現為E-cadherin蛋白的功能缺失以及N-cadherin蛋白上調[28,29]。Wnt/β-catenin信號通路的異常激活在腫瘤進展過程中的起始階段也發揮著重要作用[30,31]。本文檢測了敲降IGHMBP2后β-catenin及E-cadherin蛋白表達水平的變化，結果顯示E-cadherin的表達水平升高，β-catenin的表達未發生明顯變化。上述結果提示，IGHMBP2可能是通過調節E-cadherin的表達影響食管鱗癌細胞的侵襲和遷移能力，具體機制有待進一步研究。

綜上所述，本文發現基因在食管鱗癌原發腫瘤中存在擴增，在細胞系中存在擴增和蛋白過表達，功能研究提示IGHMBP2過表達可能通過降低E-cadherin的表達，而增強食管鱗癌細胞的侵襲遷移能力。這些發現可能為進一步闡明食管鱗癌細胞侵襲遷移的分子機制提供理論基礎。

[1] van Hagen P, Hulshof MCCM, van Lanschot JJB, Steyer-berg EW, van Berge Henegouwen MI, Wijnhoven BPL, Richel DJ, Nieuwenhuijzen GAP, Hospers GAP, Bonen-kamp JJ, Cuesta MA, Blaisse RJB, Busch ORC, ten Kate FJW, Creemers GJ, Punt CJA, Plukker JTM, Verheul HMW, Spillenaar Bilgen EJ, van Dekken H, van der Sangen MJC, Rozema T, Biermann K, Beukema JC, Piet AHM, van Rij CM, Reinders JG, Tilanus HW, van der Gaast A, CROSS Group. Preoperative chemoradiotherapy for esophageal or junctional cancer., 2012, 366(22): 2074–2084.

[2] Siegel R, Naishadham D, Jemal A. Cancer statistics, 2013., 2013, 63(1): 11–30.

[3] Miyawaki Y, Kawachi H, Ooi A, Eishi Y, Kawano T, Inazawa J, Imoto I. Genomic copy-number alterations ofandgenes are associated with survival in esophageal squamous-cell carcinoma., 2012, 103(8): 1558–1566.

[4] Kornegoor R, Moelans CB, Verschuur-Maes AHJ, Hogenes MCH, de Bruin PC, Oudejans JJ, Marchionni L, van Diest PJ. Oncogene amplification in male breast cancer: anal-ysis by multiplex ligation-dependent probe amplification., 2012, 135(1): 49–58.

[5] Brown JR, Hanna M, Tesar B, Werner L, Pochet N, Asara JM, Wang YE, Dal Cin P, Fernandes SM, Thompson C, MacConaill L, Wu CJ, Van de Peer Y, Correll M, Regev A, Neuberg D, Freedman AS. Integrative genomic analysis implicates gain ofat 3q26 andat 8q24 in chronic lymphocytic leukemia., 2012, 18(14): 3791–3802.

[6] Xu FP, Xie D, Wen JM, Wu HX, Liu YD, Bi J, Lü ZL, Zeng YX, Guan XY. SRC-3/AIB1 protein and gene amplification levels in human esophageal squam-ous cell carcinomas., 2007, 245(1–2): 69–74.

[7] Solyanik GI. Multifactorial nature of tumor drug resistance., 2010, 32(3): 181–185.

[8] Harvey H, Piskareva O, Creevey L, Alcock LC, Buckley PG, O'Sullivan MJ, Segura MF, Gallego S, Stallings RL, Bray IM. Modulation of chemotherapeutic drug resistance in neuroblastoma SK-N-AS cells by the neural apoptosis inhibitory protein and miR-520f., 2014, doi: 10.1002/ijc.29144.

[9] Ong CA, Shannon NB, Ross-Innes CS, O'Donovan M, Rueda OM, Hu DE, Kettunen MI, Walker CE, Noorani A, Hardwick RH, Caldas C, Brindle K, Fitzgerald RC. Amplification of TRIM44: pairing a prognostic target with potential therapeutic strategy., 2014, 106(5), doi: 10.1093/jnci/dju050.

[10] Ying JM, Shan L, Li JS, Zhong L, Xue LY, Zhao H, Li LL, Langford C, Guo L, Qiu T, Lu N, Tao Q. Genome-wide screening for genetic alterations in esophageal cancer by aCGH identifies 11q13 amplification oncogenes associated with nodal metastasis., 2012, 7(6): e39797.

[11] Togashi Y, Arao T, Kato H, Matsumoto K, Terashima M, Hayashi H, de Velasco MA, Fujita Y, Kimura H, Yasuda T, Shiozaki H, Nishio K. Frequent amplification of ORAOV1 gene in esophageal squamous cell cancer promotes an aggressive phenotype via proline metabolism and ROS production., 2014, 5(10): 2962–2973.

[12] Luo ML, Shen XM, Zhang Y, Wei F, Xu X, Cai Y, Zhang X, Sun YT, Zhan QM, Wu M, Wang MR. Amplification and overexpression of() contribute to the metastasis of esophageal squamous cell carcinoma by promoting cell migration and anoikis resistance., 2006, 66(24): 11690–11699.

[13] Shi ZZ, Shang L, Jiang YY, Hao JJ, Zhang Y, Zhang TT, Lin DC, Liu SG, Wang BS, Gong T, Zhan QM, Wang MR. Consistent and differential genetic aberrations between esophageal dysplasia and squamous cell carcinoma dete-cted by array comparative genomic hybridization., 2013, 19(21): 5867–5878.

[14] Hu N, Wang CY, Ng D, Clifford R, Yang HH, Tang ZZ, Wang QH, Han XY, Giffen C, Goldstein AM, Taylor PR, Lee MP. Genomic characterization of esophageal squa-mous cell carcinoma from a High-Risk population in China., 2009, 69(14): 5908–5917.

[15] Shi ZZ, Liang JW, Zhan T, Wang BS, Lin DC, Liu SG, Hao JJ, Yang H, Zhang Y, Zhan QM, Zhang KT, Wang MR. Genomic alterations with impact on survival in esophageal squamous cell carcinoma identified by array comparative genomic hybridization.,, 2011, 50(7): 518–526.

[16] 郝佳潔, 王春麗, 顧文躍, 程瀟鈺, 張鈺, 徐昕, 蔡巖, 王明榮. 利用染色體區段混合BAC探針鑒定食管癌細胞中的染色體畸變. 遺傳, 2014, 36(6): 559–566.

[17] Hirasaki S, Noguchi T, Mimori K, Onuki J, Morita K, Inoue H, Sugihara K, Mori M, Hirano T. BAC clones related to prognosis in patients with esophageal squa-mous carcinoma: an array comparative genomic hybridi-zation study., 2007, 12(4): 406–417.

[18] Ying JM, Shan L, Li JS, Zhong L, Xue LY, Zhao H, Li LL, Langford C, Guo L, Qiu T, Lu N, Tao Q. Genome-wide screening for genetic alterations in esophageal cancer by aCGH identifies 11q13 amplification oncogenes associated with nodal metastasis., 2012, 7(6): e39797.

[19] Takeshita H, Ichikawa D, Komatsu S, Tsujiura M, Kosuga T, Deguchi K, Konishi H, Morimura R, Shiozaki A, Fujiwara H, Okamoto K, Otsuji E. Prediction of CCND1 amplification using plasma DNA as a prognostic marker in oesophageal squamous cell carcinoma., 2010, 102(9): 1378–1383.

[20] Mizuta TR, Fukita Y, Miyoshi T, Shimizu A, Honjo T. Isolation of cDNA encoding a binding protein specific to 5'-phosphorylated single-stranded DNA with G-rich sequences., 1993, 21(8): 1761–1766.

[21] Fukita Y, Mizuta TR, Shirozu M, Ozawa K, Shimizu A, Honjo T. The human S μ bp-2, a DNA-binding protein specific to the single-stranded guanine-rich sequence related to the immunoglobulin mu chain switch region., 1993, 268(23): 17463–17470.

[22] Liepinsh E, Leonchiks A, Sharipo A, Guignard L, Otting G. Solution Structure of the R3H Domain from Human Sμbp-2., 2003, 326(1): 217–223.

[23] Mohan WS, Chen ZQ, Zhang X, Khalili K, Honjo T, Deeley RG, Tam SP. Human S μ binding protein-2 binds to the drug response element and transactivates the human apoA-I promoter: role of gemfibrozil., 1998, 39(2): 255–267.

[24] Chen NN, Kerr D, Chang CF, Honjo T, Khalili K. Evidence for regulation of transcription and replication of the human neurotropic virus JCV genome by the human Sμbp-2 protein in glial cells., 1997, 185(1): 55–62.

[25] de Planell-Saguer M, Schroeder DG, Rodicio MC, Cox GA, Mourelatos Z. Biochemical and genetic evidence for a role of IGHMBP2 in the translational machinery., 2009, 18(12): 2115–2126.

[26] Page-McCaw A, Ewald AJ, Werb Z. Matrix metalloprotei-nases and the regulation of tissue remodelling., 2007, 8(3): 221–233.

[27] Ma LQ, Lan FH, Zheng ZY, Xie FL, Wang L, Liu W, Han JY, Zheng F, Xie YC, Huang QJ. Epidermal growth factor (EGF) and interleukin (IL)-1β synergistically promote ERK1/2-mediated invasive breast ductal cancer cell migration and invasion., 2012, 11: 79.

[28] Thiery JP, Sleeman JP. Complex networks orchestrate epithelial-mesenchymal transitions., 2006, 7(2): 131–142.

[29] Mikaelian I, Malek M, Gadet R, Viallet J, Garcia A, Girard-Gagnepain A, Hesling C, Gillet G, Gonzalo P, Rimokh R, Billaud M. Genetic and pharmacologic inhibition of mTORC1 promotes EMT by a TGF-β-independent mechanism., 2013, 73(22): 6621–6631.

[30] Heuberger J, Birchmeier W. Interplay of cadherin-med-iated cell adhesion and canonical Wnt signaling., 2009, 2(2): a002915.

[31] Chang HW, Lee YS, Nam HY, Han MW, Kim HJ, Moon SY, Jeon H, Park JJ, Carey TE, Chang SE, Kim SW, Kim SY. Knockdown of β-catenin controls both apoptotic and autophagic cell death through LKB1/AMPK signaling in head and neck squamous cell carcinoma cell lines., 2013, 25(4): 839–847.

(責任編委: 史慶華)

IGHMBP2 overexpression promotes cell migration and invasion in esophageal squamous carcinoma

Chunli Wang1, Jiajie Hao2, Lifei Wu3, Beiqing Pan2, Xin Xu2, Yan Cai2, Mingrong Wang2, Xuemei Jia1

Immunoglobulin mu binding protein 2 () is located in 11q13.2, which is frequently amplified in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC).encodes a helicase involved in DNA replication and repair. IGHMBP2 protein also regulates gene transcription. The present study aims to explore the amplification ofand its potential role in ESCC. A further analysis of our previously reported array-CGH data showed thatwas amplified in 28.9% of primary ESCC tumors. Fluorescencehybridization (FISH) and Western blot showed that IGHMBP2was amplified and overexpressed in KYSE30, KYSE180, KYSE510 and KYSE150 esophageal cancer cell lines. Transwell assays demonstrated that knockdown of IGHMBP2 in KYSE30 and KYSE150 inhibited cell invasion and migration, and increased the expression levels of E-cadherin. When rescue plasmids expressing IGHMBP2 were introduced, the abilities of cell invasion and migration were restored. These data suggest that IGHMBP2 overexpression may promote invasion and migration of ESCC cells through down-regulation of E-cadherin.

IGHMBP2; esophageal squamous cell carcinoma; amplification; invasion; migration

2014-10-29;

2014-12-04

國家高技術研究發展計劃項目(863計劃)(編號：SS2014AA020601)和國家自然科學基金項目(編號：81321091)資助

王春麗，碩士研究生，專業方向：腫瘤遺傳學。E-mail: wcl4496@126.com

王明榮，博士，研究員，研究方向：腫瘤遺傳學。E-mail: wangmr2015@126.com；賈雪梅，碩士，教授，研究方向：腫瘤遺傳學。E-mail: jiaxueme@126.com

10.16288/j.yczz.14-371

2015-1-7 8:50:11

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1913.R.20150107.0850.001.html