維藥熱合美康宮栓提取工藝研究

阿迪力·艾斯托拉，阿不都力米提·阿不力提甫，阿卜杜列提普·奧布力，古再麗努爾·阿布都艾尼，馬元甲

(1.和田地區維吾爾醫藥研究所，新疆 和田 848000；2.和田地區維吾爾醫醫院，新疆 和田 848000)

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維藥熱合美康宮栓提取工藝研究

阿迪力·艾斯托拉1，阿不都力米提·阿不力提甫2*，
阿卜杜列提普·奧布力1，古再麗努爾·阿布都艾尼1，馬元甲1

(1.和田地區維吾爾醫藥研究所，新疆 和田 848000；2.和田地區維吾爾醫醫院，新疆 和田 848000)

目的：篩選熱合美康宮栓的最佳提取工藝。方法：采用L9(34) 正交試驗法，以沒食子酸和鹽酸小檗堿含量及其收膏率為考察指標，分別采用紫外分光光度法與高效液相色譜法測定熱合美康宮栓中沒食子酸和鹽酸小檗堿含量，篩選其最佳提取工藝。結果：石榴皮等四種含多酚類成分藥材的最佳提取工藝為加15倍體積50%乙醇加熱回流提取3次，每次1.5h；黃連等3種藥材的最佳提取工藝為加12倍體積80%乙醇加熱回流提取3次，每次1h。結論：該工藝簡便易行，穩定性好，有效成分得率高，可用于熱合美康宮栓的工業化提取。

熱合美康宮栓；維藥；試驗設計；沒食子酸；鹽酸小檗堿；含量測定

熱合美康宮栓的處方源自維吾爾醫藥古籍文獻《卡地爾方劑集》 (Karabadin Kadiri)《卡拉巴丁愛在木和艾克買力》 (Karabadin Azam wa Akmal)中的“拍日孜節”，由海螵蛸、石榴皮、石榴花、玫瑰花、沒食子、芫荽子、黃連、兒茶八味藥材組成。和田地區老醫藥專家吐爾地買買提阿訇及其女兒沙衣甫汗在長年臨床經驗中調整處方配比，并長期應用于新疆地區。該制劑具有收斂消炎的作用，主要用于宮頸炎、宮頸糜爛、陰道炎等婦科疾病的治療。 原劑型是將藥材粉末直接插入用藥部位，將其制作成栓劑后大大簡便了用藥過程，使用、儲存、攜帶更加方便，患者耐受性較好。本研究以該制劑的主要有效成分沒食子酸、鹽酸小檗堿為考察指標，采用 L9(34) 正交試驗考察影響熱合美康宮栓提取工藝的因素，確定最佳提取工藝，現報道如下。

1 儀器與材料

戴安U3000高效液相色譜儀(美國戴安公司)，包括自動進樣器WPS-3000SL，可變波長紫外檢測器(含流通池)VWD-3100，二級管陣列檢測器DAD-3000RS，柱溫箱TCC-3000 ，變色龍化學工作站軟件；UV2550型紫外分光光度儀(日本島津公司)；YP5102型電子天平(上海光證醫療儀器有限公司)；SK5200HP超聲波清洗器(上?？茖С晝x器有限公司)；KDM型電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司)；FW135型高速萬能粉粹機(北京市永光明醫療儀器有限公司)；CPA124S型分析天平(梅特勒-托利多儀器(北京)有限公司)；鹽酸小檗堿對照品，沒食子酸對照品(均由中國食品藥品檢定研究院提供， 沒食子酸批號：110831-201204，鹽酸小檗堿批號：110731-201212)；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純(天津福宇精品化工有限公司)；原藥材均由新疆安薩爾維吾爾藥業有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 沒食子酸含量測定

2.1.1 供試品溶液制備 分別稱取處方藥材25g(石榴皮2.5g、石榴花10g、玫瑰花7.5g、沒食子5g)，加適量50%乙醇提取，提取液置于1 000mL容量瓶中，加50%乙醇至刻度，即得供試品溶液。精密量取供試品溶液1mL至25mL棕色容量瓶中，加水稀釋至刻度。再精密量取上述溶液0.5mL依次加入1.5mL水、1mL磷鉬鎢酸鈉試液和10mL水，加適量29%碳酸鈉溶液至刻度，搖勻，放置30min，備用。同法同時制備空白溶液。

2.1.2 對照品溶液制備 精密稱取沒食子酸對照品1mg，置于50mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL含沒食子酸0.02mg的對照品溶液。

2.1.3 標準曲線制備 分別精密量取對照品溶液2、3、4、5、6、7、8mL，置于25mL棕色容量瓶中，加水稀釋至12mL，加1mL磷鉬鎢酸鈉試液，再加適量29%碳酸鈉溶液至刻度，搖勻，放置30min。以相應的試劑為空白溶液，參照紫外-分光光度法(附錄ⅤA)，于760nm波長處測定各溶液吸光度值。以吸光度值為縱坐標Y，沒食子酸濃度為橫坐標X，繪制標準曲線，回歸方程為Y=0.107 60X+0.04 700(r=0.999 6)，沒食子酸在0.082～7.840mg質量范圍內與其吸光度值線性關系良好。見圖1。

圖1 沒食子酸標準曲線

2.1.4 提取溶媒考察 稱取處方藥材25g(石榴皮2.5g、石榴花10g、玫瑰花7.5g、沒食子5g)，共4份，分別加15倍量水、50%乙醇、65%乙醇及80%乙醇加熱回流提取1.5h，濾過，合并濾液。結果表明，50%乙醇提取液中沒食子酸含量相對較高，故采用50%乙醇作為沒食子酸的提取溶媒。

2.1.5 提取次數考察 稱取處方藥材25g(石榴皮2.5g、石榴花10g、玫瑰花7.5g、沒食子5g)，共3份，分別加50% 乙醇加熱回流提取2次、3次和4次，濾過，合并濾液。結果顯示，提取3次所得提取液中沒食子酸含量相對較高，故提取次數定為3次。

2.1.6 醇提取正交試驗設計 選擇提取溫度、提取時間及溶媒用量為考察因素，根據正交試驗表L9(34) 進行試驗，見表1。

表1 L9(34) 正交試驗設計因素水平 (n=3)

2.1.7 樣品測定 根據表1試驗設計，共進行9組試驗，所得提取溶液均于760nm波長處測定吸光度值，代入標準曲線計算沒食子酸含量。另分別精密吸取各組溶液20mL于干燥至恒重的蒸發皿中，105℃下干燥5h后移至干燥器中，放涼，迅速稱重，再干燥1h，放涼后稱重，計算收膏率。以沒食子酸含量和收膏率為考察指標進行綜合評分，直觀分析結果見表2，方差分析結果見表3 。

2.1.8 結果分析 由直觀分析結果可知，各因素對提取效果的影響大小依次為A (提取溫度) >B (提取時間) >C (加醇倍量)，最佳因素水平為A3B3C3，即加25倍量50% 乙醇，提取溫度為80℃，提取3次，每次2h 。由方差分析結果可知，提取溫度(A)對提取效果有顯著影響(P<0.05)，而提取時間和加醇量無顯著影響(P>0.05)。為降低成本，選取最佳提取工藝為A3B1C1，即加15倍量乙醇，提取溫度為80℃，提取3次，每次1h 。

2.1.9 驗證實驗 以最優工藝條件A3B1C1重復提取3次，結果表明所選工藝條件各次驗證試驗所得沒食子酸含量差別不大，重現性較好，結果見表4。驗證試驗結果表明，該提取工藝較穩定。

表2 L9(34) 正交試驗結果 (%)

表3 方差分析

表4 最佳工藝驗證試驗結果

2.2 鹽酸小檗堿含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-3 (250mm×4.6mm，5μL)；流動相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀(磷酸調pH值為4.0)；檢測波長：345nm；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min。

2.2.2 標準曲線制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品，用鹽酸-甲醇(1∶100)溶液配制成一系列梯度濃度溶液，按照上述色譜條件，分別進樣10μL，測定峰面積積分。以鹽酸小檗堿峰面積積分為縱坐標Y，鹽酸小檗堿含量為橫坐標X，得回歸方程：Y=-13.141 7+149.308 0X(r=0.999 7)。結果表明，鹽酸小檗堿在0.15～1.03μg質量范圍與其峰面積積分線性關系良好。

2.2.3 供試品溶液制備 稱取處方藥材 35g(黃連5g、兒茶10g、芫荽子15g)，加適量80% 乙醇提取，提取液置于 2 000mL容量瓶中，加 80% 乙醇至刻度，即得供試品溶液。精密量取供試品溶液 1mL 至10mL容 量瓶中，加甲醇至刻度，靜置，微孔濾膜(0.4μL)濾過，采用高效液相色譜儀進行測定。

2.2.4 提取次數考察 稱取處方藥材35g(黃連5g、兒茶10g、芫荽子15g)，共3份，加適量80% 乙醇，分別加熱回流提取2次、3次和4次，濾過，合并濾液。結果表明，提取3次時提取液中的鹽酸小檗堿含量相對較高，故提取次數定為3次。

2.2.5 醇提取正交試驗設計 選擇乙醇濃度、提取時間及溶媒用量為考察因素，按照正交試驗 L9(34)表設計試驗，所選因素水平見表5。

表5 L9(34) 正交試驗因素水平設計 (n=3)

2.2.6 樣品測定 分別取供試品溶液和鹽酸小檗堿對照品溶液，按照上述色譜條件進樣測定。鹽酸小檗堿對照品色譜見圖2，供試品溶液色譜見圖3。按照正交試驗設計的9組試驗條件提取樣品，正交試驗結果見表6，方差分析結果見表7。

2.2.7 結果分析 由直觀分析結果可知，各因素對提取效果的影響大小依次為C (提取時間) >A (乙醇濃度) >B (加醇倍量)，最佳因素水平為A3B3C2，即加16倍量80% 乙醇，提取3次，每次1.5h 。由方差分析結果可知，各因素均對實驗結果無顯著影響(P>0.05)。為降低成本，選則最佳提取工藝為A3B2C2，即加12倍量80% 乙醇，提取3次，每次1.5h 。

2.2.8 驗證實驗 以最佳工藝條件A3B2C2重復試驗3次，結果表明所選工藝條件各次驗證試驗結果差別不大，重現性較好，結果見表8 。驗證試驗結果表明，該提取工藝較穩定。

3 討論

優選熱合美康宮栓提取工藝時以沒食子酸和鹽酸小檗堿含量為考察指標原因有二：一方面，石榴皮、石榴花、沒食子、玫瑰花均含有多酚類成分(沒食子酸)，黃連的有效成分為鹽酸小檗堿；另一方面，現代藥理學研究已證實以上兩種成分具有較強的體內外抗腫瘤活性，并對多種革蘭陽性及陰性菌具有抑制作用，其作用機制為抑制細菌DNA、RNA蛋白質及脂類合成，與細胞DNA形成復合體，干擾其復制，進而抑制細菌繁殖。

圖2 鹽酸小檗堿對照品色譜

圖3 樣品溶液色譜

本實驗結果表明，石榴皮等四種含多酚類成分藥材的最佳提取工藝為加15倍體積50%乙醇加熱回流提取3次，每次1.5h；黃連等3種藥材的最佳提取工藝為加12倍體積80%乙醇加熱回流提取3次，每次1h。該工藝簡便易行，穩定性好，有效成分得率高，可用于熱合美康宮栓的工業化提取。該研究結果彌補了現代維吾爾醫藥制劑研究的不足。

表6 L9(34) 正交試驗安排與結果

表7 方差分析

表8 最佳工藝驗證試驗結果

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(2010年版)[M].一部.北京:中國醫藥科技出版社,2010.

[2] 張琦巖,孫耀華.藥劑學[M].北京:人民衛生出版社,2009.

[3] 黃健,涂明惠.婦康寧栓劑提取工藝的研究[J].廣東藥學,2005,15(3):26-28.

[4] 張小梅,梁旭明,楊榮平,等.正交試驗優選婦平樂栓劑的提取工藝[J].重慶中草藥研究,2011,64(1):18-21.

[5] 楊安平,陸原,張曉林,等.婦陰康潔栓劑不同提取工藝的比較[J].中藥材,2001,24(4):291-292.

[6] 尹清.HPLC測定黃連中鹽酸小檗堿含量[J].上海中醫藥雜志,2003,37(7):53-54.

[7] 劉婷,梁宗鎖,丁美海.黃連葉片中鹽酸小檗堿提取工藝研究[J].西北林學院學報,2010,25(6):144-147.

(責任編輯：尹晨茹)

Study on the Extraction Process of the Uyghur Medicine Wahimi Rahmi Cervical Suppository

Adil Astulla1,Ablimit Ablitip2*,Ablitip Ubol1,Ayxamgul Ubulkasim1，Ma Yuanjia1

(1.Hotan Uyghur Medical Research Institute,Hotan 848000,China;2.Hotan Uyghur Medical Hospital,Hotan 848000,China)

Objective:To optimize the extraction process of Wahimi Rahmi Cervical Suppository.Methods:The content of gallic acid and berberine hydrochloride and its extract rate were selected as the examining indexes,using L9(34) orthogonal experiment,determine the content of gallic acid and berberine hydrochloride by ultraviolet spectrophotometry and high performance liquid chromatography (HPLC) method.Results:The optimal extraction conditions: Four types of medicinal materials which contains polyphenols like granatum were heated with 15 times the volume of 50% ethanol and reflux extract 3 times,1.5 hours each time .Three types of medicinal materials like Coptis chinensis were heated with 12 times the volume of 80% ethanol and reflux extract 3 times,each time 1 hour.Conclusion:The process is simple and easy with good stability,which provides the optimal extraction condition for Wahimi Rahmi Cervical Suppository.

Wahimi Rahmi Cervical Suppository;Testing Design; Gallic Acid; Berberine Hydrochloride; Content Determination

2015-08-04

新疆維吾爾自治區科技廳高新技術發展計劃項目(201317103)；新疆維吾爾自治區科研機構創新發展專項資金項目(2014018)

阿迪力·艾斯托拉(1973-)，男，博士，新疆和田地區維吾爾醫藥研究所研究員，研究方向為維吾爾醫藥研究開發。

阿不都力米提·阿不力提甫(1983-)，男，新疆和田地區維吾爾醫醫院主管藥師，研究方向為民族醫藥。

R284.2

A

1673-2197(2015)24-0027-04

10.11954/ytctyy.201524011