人參皂苷Rb1對微血管自律性舒縮活動及大鼠心肌微血管內皮細胞內鈣瞬時變化的影響

王 鑫，馮 波，孫向婉，李平麗，董 虹*，穆 祥*

(1.北京農學院 獸醫學(中醫藥)北京市重點實驗室，北京 102206；2.中國農業大學 動物醫學院，北京 100193)

人參皂苷Rb1對微血管自律性舒縮活動及大鼠心肌微血管內皮細胞內鈣瞬時變化的影響

王 鑫1，馮 波2，孫向婉1，李平麗1，董 虹1*，穆 祥1*

(1.北京農學院 獸醫學(中醫藥)北京市重點實驗室，北京 102206；2.中國農業大學 動物醫學院，北京 100193)

探討人參皂苷Rb1(GSRb1)對人合谷穴區皮內微血管自律性舒縮活動振幅及大鼠心肌微血管內皮細胞(RMMECs)內游離鈣離子瞬時變化的影響。利用激光多普勒血流測定儀結合離子導入儀檢測微血管自律性舒縮活動的振幅。利用激光共聚焦顯微鏡、鈣離子熒光探針Fluo-3AM檢測ATP引起的RMMECs細胞內鈣離子的變化及Rb1對其的影響。結果表明：試驗確定了能夠引起RMMECs細胞內游離鈣離子釋放的ATP的最低量為0.5 μg·mL-1，瞬時升高差異顯著的劑量是0.7 μg·mL-1，能夠影響RMMECs細胞內鈣離子變化的GSRb1的最低量為8 μg·mL-1。RMMECs經 8 μg·mL-1GSRb1孵育后，能夠刺激細胞內游離鈣離子釋放的ATP的最低量升高為1.5 μg·mL-1。本研究說明，提高微血管自律運動振幅的中藥成分GSRb1能夠通過對RMMECs胞內鈣離子的影響，提高RMMECs對ATP的耐受能力(ATP的刺激量由0.5 μg·mL-1升高到1.5 μg·mL-1)。

微血管自律運動；GSRb1；ATP；Ca2+；RMMECs

微血管的自律運動是一種具有獨特的振幅和頻率的復雜的似周期性的生物波[1]。眾多疾病狀態下微血管自律性舒縮活動減弱，如急性和長期慢性炎癥[2-3]、糖尿病[4]、高血壓[5]和肥胖患者[6]等。有研究顯示中藥成分[7]、電針[8]、半導體激光[9]等刺激均可提高微血管自律性舒縮活動的幅度，說明提高微血管自律運動幅度對治療疾病具有潛在的意義。微血管自律性舒縮活動能評估微血管內皮的功能狀態[10]，而微血管內皮細胞的功能異常會直接導致各種心血管相關疾病的產生。

迄今為止，中藥及其有效成分的作用機制研究大多集中在血液流變學[11-12]和對心血管系統的保護作用[13,15]方面。而本研究旨在通過研究中藥成分人參皂苷(Ginsenoside Rb1，GSRb1)對微血管自律性舒縮活動振幅以及微血管內皮細胞對外界刺激的耐受能力來探討中藥治療疾病的機制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

Fluo-3AM購自美國Invitrogen，Pluronic F-127購自美國Invitrogen，GSRb1購自上海融禾醫藥科技有限公司(純度>98%)，胎牛血清、DMEM、D-Hank’s購自美國Gibco，CD31因子兔抗鼠一抗、FITC標記二抗購自北京博奧森(貨號bs-0195R)，細胞培養6孔板購自Costar，玻底細胞培養皿(底部帶有一個直徑10 mm的小坑)購自美國Corning，L-谷氨酰胺購自美國Sigma，胰蛋白酶、膠原酶Ⅱ型凍干粉購自美國GiBco公司。

1.2 微血管自律性舒縮活動的測量

解剖學位置結合穴位定位儀找到志愿者手陽明大腸經上的合谷穴作為待測穴位，并標記。用生理鹽水溶解GSRb1(終質量濃度為50 μg·mL-1)，以導入生理鹽水(Normal saline NS)作為對照。離子導入儀(瑞典Perimed 公司，Milli-QA10型)將藥物導入穴位；激光多普勒血流監測儀(瑞典Perimed 公司主機型號PeriFlux5000，探頭型號Probe481-1)測量導藥前后微血管血流灌注量(PU)。以PUmax-PUmin表示微血管自律性舒縮活動振幅。采用Perimed 提供的統計軟件，從每位自愿者導藥前后微血管舒縮活動振幅圖像中分別選取5段數據計算導藥前后振幅平均值﹝(PUmax-PUmin)÷5﹞。

1.3 大鼠心肌微血管內皮細胞(rat myocardial microvascular endothelial cells，RMMECs)的原代培養及鑒定

10日齡SD大鼠，脫頸處死，取出左心室壁，剝離心內膜和外膜，于0.2%的Ⅱ型膠原酶中剪碎，37 ℃消化20 min，終止消化過200目篩，1 500 r·min-1離心6 min，接種于6孔板內，4 h后更換培養液，刮除形態不規則的細胞，待細胞長至80%匯合時傳代。第二次傳代將細胞培養在培養碟底部的坑內，待細胞貼壁生長20 h后進行試驗。形態學結合免疫熒光法鑒定細胞的純度。倒置顯微鏡觀察細胞的形態；用兔抗大鼠CD31相關抗原一抗(對照不加一抗，加等量PBS)37 ℃孵育2 h，PBS沖洗3次，每次3 min；加FITC標記的二抗，37 ℃孵育45 min，PBS沖洗3次，每次3 min；PBS沖洗2次，去離子水洗1次，熒光顯微鏡下觀察。

1.4 激光共聚焦測量內皮細胞內游離鈣的變化

先將Fluo-3AM混于Pluronic F-127(終濃度為0.02%)中，再使用不含Ca2+、Mg2+的無色D-Hank’s稀釋，使Fluo-3AM終濃度為5 μmol·mL-1。5 μmol·mL-1的Fluo-3AM裝載細胞15 min，不含Ca2+、Mg2+的D-Hank’s洗兩遍，加入含有1%胎牛血清的D-Hank’s(不含Ca2+、Mg2+、無色)繼續孵育20 min(讓細胞內的酯酶將Fluo-3AM水解成Fluo-3)，不含Ca2+、Mg2+的D-Hank’s洗兩遍，加入Hepes緩沖液(NaCl 140 mmol·L-1，KCl 5 mmol·L-1，Hepes 10 mmol·L-1，Glucose 3 mmol·L-1，CaCl22 mmol·L-1，MgCl21 mmol·L-1，用NaOH調pH為7.4)緩沖5 min后使用激光共聚焦顯微鏡(Leica TCS SP5，Leica Application Suite Advanced Fluorescence,40倍物鏡)檢測。

1.5 數據分析

2 結 果

2.1GSRb1對微血管自律性舒縮活動振幅的影響

經皮將NS導入穴位前后微血管血流管住量變化極不顯著(圖1①)。導入GSRb1后，穴位區皮內的微血管血流灌注量明顯增大(圖1②)。導藥后波動的振幅明顯高于導藥前波動的振幅(P<0.01)(圖1B)，其振幅變化為導藥前的2倍，而導入生理鹽水后振幅的變化不顯著。

2.2 細胞培養及探針裝載

細胞在倒置顯微鏡下可見成“鋪路石”樣生長(圖2A)，細胞膜和細胞漿內的因子被FITC標記的抗體標記呈現清晰的綠色熒光，而細胞核因缺少CD31因子呈現暗色(圖2B)。因此，由形態學和CD31免疫熒光鑒定表明所培養的細胞為RMMECs。經5μmol·mL-1的Fluo-3AM裝載細胞15min后，可見Fluo-3均勻分布在細胞內(圖2D)。

①,②分別表示導入NS和GSRb1，A表示導入之前，B表示導入之后；③為經統計學方法處理的數據，**表示P<0.01①,② represent the introduction of NS and GSRb1。A is before the introduction，B is after the introduction；③ is statistics data ,** P<0.01圖1 GSRb1對微血管自律性舒縮活動振幅的影響Fig.1 Effect of GSRb1 on the microvascular vasomotion amplitude of self-discipline

A.倒置顯微鏡下細胞；B.倒置熒光顯微鏡下抗體標記后的細胞；C.陰性為對照；D.5 μmol·mL-1的Fluo-3AM負載細胞15 minA.Cells under inverted microscope photos；B.Antibody marker under inverted fluorescence microscope cell images；C.As negative as control；D.The image of the 5 μmol·mL-1 Fluo-3AM load cell for 15 min 圖2 RMMECs的鑒定及探針負載Fig.2 Identification and probe of RMMECs load

2.3 GSRb1對RMMECs內鈣的影響

2.3.1 刺激RMMECs細胞內鈣瞬時變化的ATP和GSRb1最小劑量 0.3 μg·mL-1的ATP不能夠刺激RMMECs內游離鈣離子瞬時升高(圖3 A)。0.5、0.6 μg·mL-1的ATP剛好能夠引起RMMECs胞內出現鈣離子峰(圖3B、C)。當質量濃度升高到0.7 μg·mL-1時，ATP會誘導細胞內鈣離子顯著升高(圖3E)。Hepes緩沖液對照組結果表明Hepes緩沖液不能誘導RMMECs內游離鈣離子瞬時變化(圖未展示)。因此，能夠誘導RMMECs胞內鈣離子瞬時升高ATP的最低劑量為0.5 μg·mL-1，瞬時升高差異顯著的劑量是0.7 μg·mL-1。5 μg·mL-1的GSRb1對細胞內鈣離子沒有影響(圖4A)，6、7 μg·mL-1的GSRb1剛好能夠引起RMMECs內鈣降低(圖3E)。當質量濃度升高到8 μg·mL-1，GSRb1能夠顯著降低RMMECs內鈣離子(圖3 E)。結果表明，能夠降低RMMECs內鈣離子的GSRb1劑量為8 μg·mL-1。

A、B、C、D分別為0.3、0.5、0.6、0.7 μg·mL-1的ATP刺激RMMECs后，細胞內鈣離子的變化。開始記錄30 s加ATP。E為經統計學方法處理的數據柱狀圖,**表示P<0.01A，B，C，D are Figures that show the change of intracellular calcium by 0.3，0.5，0.6，0.7 μg·mL-1ATP after RMMECs stimulation，respectively.To start recording 30 s plus ATP.E show the statistics data，** was that P<0.01 圖3 不同劑量ATP對RMMECs內鈣的影響Fig.3 Effect of different doses of ATP on the RMMECs of intracellular calcium

A、B、C、D分別為5、6、7、8 μg·mL-1的GSRb1對細胞內鈣的影響。開始記錄30 s后加GSRb1。E為經統計學方法處理的數據柱狀圖,**表示P<0.01A，B，C，D are the Figures that show the effects of 5，6，7，8 μg·mL-1 GSRb1 on intracellular calcium，respectively.To start recording 30 s plus GSRb1.E show the statistics data，** was that P<0.01圖4 不同劑量GSRb1對RMMECs內鈣的影響Fig.4 Effect of different doses of GSRb1 on the RMMECs of intracellular calcium

2.3.2 GSRb1對ATP誘導RMMECs細胞內鈣變化的影響 經8 μg·mL-1GSRb1孵育細胞20 min后，相對于圖3(未經GSRb1孵育，0.5 μg·mL-1的ATP對細胞內鈣的影響)0.5 μg·mL-1的ATP不能夠誘導RMMECs內鈣瞬時升高(圖5A)。當ATP質量濃度提高到1.5 μg·mL-1時，才能誘導細胞內鈣離子顯著升高(圖5C)。經相同摩爾濃度的組胺(舒張血管物質)孵育20 min后，用0.5 μg·mL-1的ATP刺激仍會出現明顯的鈣離子峰(圖5D)。

A、B、C分別為8 μg·mL-1 GSRb1孵育20 min后0.5、1、1.5 μg·mL-1 ATP刺激RMMECs內游離鈣離子的變化；D為相同摩爾濃度組胺孵育20 min后0.5 μg·mL-1的ATP刺激RMMECs內游離鈣離子濃度的變化。開始記錄后30 s加ATP。E為經統計學方法處理的數據，**表示P<0.01A，B，C are the Figures that show the effects of 0.5，1，1.5 μg·mL-1 ATP on intracellular calcium after incubation 20 min by 8 μg·mL-1 GSRb1，respectively.D was 0.5 μg·mL-1 ATP on intracellular calcium after incubation 20 min by the same molarity histamine.E show the statistics data，** was that P<0.01圖5 GSRb1孵育RMMECs后不同劑量ATP對細胞內鈣的作用Fig.5 The effect of different doses of ATP on intracellular calcium after incubation of RMMECs with GSRb1

3 討 論

微血管自律性的舒縮活動參與多種生理、病理過程的應激反應，對許多生理、病理過程及疾病的發生、發展和轉歸具有重要意義，故對其檢測及研究顯得尤為重要。有研究顯示提高穴位區微血管自律運動振幅能有效減輕原發性痛經導致的疼痛[16]。因此，提高微血管自律性舒縮活動的振幅具有潛在的治療疾病的意義。微血管舒縮活動的研究方法主要包括體外分離微動脈、體內顯微觀察和體表多普勒血流信號采集[17]等。體外分離出微動脈可直接測量微動脈管徑的周期性變化[18]，但是，該方法不能完全真實反映出體內的變化規律，因而在研究中受到限制。而本試驗采用的激光多普勒血流監測儀可以在體表檢測到皮膚0.5～1 mm范圍內下微血管網血流量的變化，因此在無損傷狀態下可反映出微血管舒縮活動，并且利用離子導入儀，將藥物在無損傷性的微小電流作用下，導入皮下組織，選用生理鹽水配制所用中藥有效成分，保證導入后能夠反映藥物作用的真實性。另外試驗中所選用的中藥成分均來自天然植物，用量極微，只作用于局部皮膚，對組織不造成損傷。采用激光多普勒血流監測儀結合離子導入儀的方法可準確有效地研究生理條件下中藥有效成分對微血管舒縮活動的影響。使用這一研究方法發現，導入GSRb1能夠顯著增加穴位區皮內微血管血流灌注量最大值與最小值之差(PUmax-PUmin)，即提高了微血管自律性舒縮活動的振幅。

研究表明，激光掃描共焦顯微鏡和Fluo-3AM常用于檢測ATP誘導的細胞內游離鈣離子的變化[19,20]。本研究中，作者使用激光掃描共焦顯微鏡及Fluo-3AM檢測RMMECs內鈣離子的變化。內皮細胞膜表面存在一種受體門控性陽離子通道(purinergic ligand-gated receptor channel，P2X)，ATP是該通道配體[21]，在細胞外液中有鈣和無鈣時，ATP均能誘導細胞內出現鈣離子峰[22]，因此選擇ATP作為刺激物?？梢詫⒋碳MMECs內鈣產生變化的ATP最低劑量作為細胞對ATP的最低耐受值。能夠誘導RMMECs內鈣離子瞬時升高的ATP最低劑量為0.5 μg·mL-1，瞬時升高差異顯著的劑量是0.7 μg·mL-1，GSRb1能夠降低RMMECs內游離鈣離子的濃度，最低劑量為8 μg·mL-1。經8 μg·mL-1GSRb1孵育RMMECs后，0.5 μg·mL-1ATP刺激細胞，細胞內鈣離子沒有任何變化，1.0 μg·mL-1ATP刺激細胞內鈣離子雖然有升高，但是沒有差異顯著，1.5 μg·mL-1ATP刺激細胞內鈣離子升高有顯著差異。表明GSRb1對胞外ATP誘導的RMMECs內游離鈣離子瞬時升高有明顯的抑制作用。研究顯示，GSRb1對心肌細胞膜Ca2+電流有明顯的阻滯作用，是一種鈣通道阻滯劑[22]，人參總提取物對大鼠感覺神經元高電壓激活的鈣離子通道具有抑制作用，能抑制高電壓激活鈣離子通道的電流[23]，對大鼠皮層神經元上的L-型鈣離子通道也有抑制作用[24]。而將ATP的劑量提高至1.5 μg·mL-1時，才能誘導細胞內鈣離子瞬時升高。使用只具有血管舒張作用組胺孵育RMMECs后，0.5 μg·mL-1ATP仍然能使RMMECs內鈣離子瞬時變化，說明GSRb1不是單純的通過提高血管舒縮幅度，還有可能夠通過抑制RMMECs上鈣離子通道降低細胞對ATP的敏感度。

采用激光多普勒血流監測儀結合離子導入儀，檢測出GSRb1能夠顯著提高微血管舒縮活動振幅；使用激光掃描共焦顯微鏡和Fluo-3AM檢測出GSRb1能提高RMMECs對ATP的耐受能力。推測提高微血管內皮細胞對胞外刺激的耐受能力可能是具有提高微血管自律性舒縮活動振幅的中藥成分防治疾病的機制。

[1] 修瑞娟.微血管自律運動的研究Ⅱ.骨骼肌的微血管自律運動及其與血流速度及血流量的關系(簡報) [J].中國醫學科學院學報,1985,7(2):116. XIU R J.Study on microvascular vasomotion Ⅱ.Vasomotion in skeletal muscle and the relationship between it with blood flow and velocity of blood flow [J].ActaAcademiaeMedicinaeSinicae，1985，7(2):116.(in Chinese)

[2] SCHINDLER T H，NITZSCHE E U，OLSCHEWSKI M，et al.Chronic inflammation and impaired coronary vasoreactivity in patients with coronary risk factors [J].Circulation，2004，110(9):1069-1075.

[3] SIMMONS G H，PADILLA J，JENKINS N T，et al.Exercise training and vascular cell phenotype in a swine model of familial hypercholesterolaemia：conduit arteries and veins[J].ExpPhysiol，2014，99(2)：454-465.

[4] TIGNO X T,HANSEN B C,ALBANO A M.Vasomotion spectra and principal components of pooled measures predict diabetes in monkeys[J].IntJBifurcatChaos，2009，19(7):2439-2446.

[5] HUNG M W，KRAVTSOV G M，LAU C F，et al.Melatonin ameliorates endothelial dysfunction，vascular inflammation，and systemic hypertension in rats with chronic intermittent hypoxia[J].JPinealRes，2013，55(3)：247-256.

[6] DE JONGH R T，SERNé E H，IJZERMAN R G，et al.Impaired local microvascular vasodilatory effects of insulin and reduced skin microvascular vasomotion in obese women[J].MicrovascRes，2008，75(2)：256-262.

[7] 宣穎超，張 濤，郭 洋，等.白頭翁湯中主要成分導入合谷穴對皮膚微血管舒縮振幅的作用[J].微循環學雜志，2011，21(2):1-3. XUAN Y C，ZHANG T，GUO Y，et al.Effect of components of pulsatilla decoction on amplitude of cutaneous microvasomotion at Hegu Acupoint[J].ChineseJournalofMicrocircUlation，2011，21(2):1-3.(in Chinese)

[8] 趙平平，洪儷鳳.針灸對微血管自律運動(微循環)影響的研究概況[J].甘肅中醫，1999，12(2)：45-48. ZHAO P P，HONG L F.Effect of acupuncture on microvascular vasomotion(microcirculation)[J].GansuJournalofTraditionalChineseMedicine，1999，12(2)：45-48.(in Chinese)

[9] 趙 雪，侯 爽，黃 群，等.半導體激光照射對穴位區微血管功能的影響[J].激光雜志，2011，32(6)：64-66. ZHAO X，HOU S，HUANG Q，et al.Effect of semiconductor laser radiation on point area microsvascular function[J].LaserJournal，2011，32(6)：64-66.(in Chinese)

[10] ROSSI M，CARPI A，GALETTA F，et al.Skin vasomotion investigation：A useful tool for clinical evaluation of microvascular endothelial function?[J].BiomedPharmacother，2008，62(8):541-545.

[11] 彭黎明，鄧承祺.現代血栓與止血的實驗室檢測及其應用[M].北京：人民衛生出版社，2004：277-284. PENG L M，DENG C Q.Modern laboratory technology and its application in thrombosis and hemostasis[M].Beijing:People’s Medical Publishing House,2004:277-284.(in Chinese)

[12] 秦任甲.臨床血液流變學(修訂版)[M].北京：北京大學醫學出版社，2006. QIN R J.Clinical hemorheology (Revision)[M].Beijing:Peking University Medical Press,2006.(in Chinese)

[13] 賈 杰，周 瑛，韋中奎.中藥治療心血管疾病研究概況[J].北方藥學，2014(2)：63-64. JIA J，ZHOU Y，WEI Z K.The study of traditional Chinese medicine for cardiocerebrovascular disease[J].JournalofNorthPharmacy，2014(2)：63-64.(in Chinese)

[14] 王梓寧.中醫藥治療心血管病的文獻計量分析[D].北京：中國中醫科學院，2013. WANG Z N.The biblometric study on traditional Chinese medicine treatment of cardiovascular diseases[D].Beijing:China Academy of Chinese Medicial Sciences,2013.(in Chinese)

[15] 金 戈，明海霞，董曉麗.益氣活血中藥對家兔心氣虛證NO、ET及血液流變學的影響[J].中國老年學雜志，2011，31(15)：2916-2918. JIN G，MING H X，DONG X L.The effect of Chinese medicinal with supplementing qi and activating blood circulation in rabbit with syndrome of deficiency of qi in heart to NO,ET and hemorheology[J].ChineseJournalofGerontology，2011，31(15)：2916-2918.(in Chinese)

[16] HUANG T，LI Y，JIA S，et al.Capillary blood flow in patients with dysmenorrhea treated with acupuncture[J].JTraditChinMed，2013，33(6)：757-760.

[17] 曾昭煒，謝忠明，唐榮福，等.觀察動物微循環的實驗方法[J].微循環學雜志，2011，21(3)：26-32. ZENG Z W，XIE Z M，TANG R F，et al.The experimental technologies of obversing microcirculation in animals[J].ChineseJournalofMicrocirculation，2011，21(3)：26-32.(in Chinese)

[18] DESOUZA M D，BOUSKELA E.Arteriolar diameter and spontaneous vasomotion：Importance of potassium channels and nitric oxide[J].MicrovascRes，2013，90：121-127.

[19] WANG H，ZHOU G，GAI H，et al.A fluorescein-based probe with high selectivity to cysteine over homocysteine and glutathione[J].ChemCommun(Camb)，2012，48(67):8341-8343.

[20] MASHINO K，SADANAGA N，YAMAGUCHI H，et al.Expression of chemokine receptor CCR7 is associated with lymph node metastasis of gastric carcinoma [J].CancerRes，2002，62(10)：2937-2941.

[21] KAHLENBERG J M，LUNDBERG K C，KERTESY S B，et al.Potentiation of caspase-1 activation by the P2X7 receptor is dependent on TLR signals and requires NF-kappaB-driven protein synthesis [J].JImmunol，2005，175(11)：7611-7622.

[22] 張 斌，金士翱，況 銑.三七皂甙單體Rb1對心肌細胞膜鈣離子通道的影響[J].中國藥理學通報，1998，14(1):33-35. ZHANG B,JIN S A,KUANG X.Effect of Rb1 on calcium channel in guinea pig ventricular myocytes[J].ChinesePharmacologicalBulletin,1998，14(1):33-35.(in Chinese)

[23] KIM S，NAH S Y，RHIM H.Neuroprotective effects of ginseng saponins against L- type Ca2+channel-mediated cell death in rat cortical neurons[J].BiochemBiophysResCommun，2008，365(3):399-405.

[24] LOUGHREY C M，MACEACHERN K E，COOPER J，et al.Measurement of the dissociation constant of Fluo-3 for Ca2+in isolated rabbit cardiomyocytes using Ca2+wave characteristics[J].CellCalcium，2003，34(1):1-9.

(編輯 白永平)

Effect of Ginsenoside Rb1 Induce Microvascular Vasomotion and the Effect on Sensitive Threshold of Rat Myocardial Microvascular Endothelial Cells

WANG Xin1，FENG Bo2，SUN Xiang-wan1，LI Ping-li1，DONG Hong1*，MU Xiang1*

(1.BeijingKeyLaboratoryofTraditionalChineseVeterinaryMedicine，BeijingUniversityofAgriculture，Beijing102206，China; 2.CollegeofVeterinaryMedicine，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100193，China)

The aim of this study was to investigate the effects of Ginsenoside Rb1(GSRb1) induce Hegu acupoint microvascular vasomotion and the effect on sensitive threshold of Rat myocardial microvascular endothelial cells(RMMECs).Microvascular vasomotion was detected by laser doppler blood flow monitor combined with iontophoresis device.The changes of calcium in the RMMECs were measured by laser scanning confocal microscopy combined with calcium fluorescent probe (Fluo-3AM).The results were as follows：The minimum amount of ATP could induce calcium transient increase in RMMECs was 0.5 μg·mL-1，the dose of significant difference was 0.7 μg·mL-1and the minimum amounts of GSRb1 inducing calcium changes in RMMECs was 8 μg·mL-1.After incubation 8 μg·mL-1of GSRb1，the minimum amount of ATP could induce calcium transient increase in RMMECs was 1.5 μg·mL-1.Eight μg·mL-1of GSRb1 can inhibit the ATP-induced intracellular calcium transient rise，that meant，GSRb1 increased the sensitive threshold of RMMECs to ATP.

microvascular vasomotion; GSRb1；ATP；Ca2+；RMMECs

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.01.020

2014-10-28

國家自然科學基金(31101850)；北京市教委科技發展計劃重點項目(KZ201110020021)；北京市教委科技面上項目(KM201210020008)；北京市自然基金(6132007)；北京市科技新星(Z141105001814041)；2014年北京農學院學位與研究生教育改革與發展項目(2014YJS057)

王 鑫(1992-)，男，江西靖安人，碩士生，主要從事中獸醫藥及疾病防控方面研究，E-mail：williamxin0217@163.com

*通信作者：董 虹，副教授，Tel：010-80799480，E-mail：donghong523@163.com; 穆 祥，教授，Tel：010-80789515，E-mail：muxiang1109@sina.com

R285.5；R331.3

A

0366-6964(2015)01-0156-07