HE4在子宮內膜癌患者血清中的表達及其與各臨床病理參數的關系

楊勝晗，王蕾香，韓春薇

近年來，子宮內膜癌的發病率逐漸上升，嚴重威脅著婦女的健康和生命。盡管大部分子宮內膜癌患者早期可通過組織活檢而被確診，但是仍有許多患者，臨床癥狀不明顯，就診時已是晚期。目前子宮內膜癌最常用的診斷方法為診斷性刮宮，但這種方法對疾病的臨床分期意義不大，難以指導治療和預測預后，腫瘤標志物的檢測可以彌補這一缺陷。人附睪蛋白4(human epididymis gene product 4，HE4)基因的cDNA 最早由Kirchhoff 等［1］從人的附睪中克隆得到，可編碼HE4 蛋白。目前有許多研究已經證明HE4 與人類卵巢腺癌的發生、發展及預后密切相關［2-5］，近來研究［6-9］表明HE4 在子宮內膜癌中高表達。本實驗應用化學發光微粒子免疫分析法(CMIA)檢測正常子宮內膜、子宮內膜不典型增生、子宮內膜癌患者血清HE4 表達情況，分析血清HE4 水平與子宮內膜癌的病理類型、臨床分期、病理學分級、肌層浸潤深度及盆腔淋巴結轉移情況的關系，探討HE4 在子宮內膜癌發生發展中的作用，為子宮內膜癌的早期診斷、指導臨床治療及預測預后尋找新的分子生物學依據。

1 資料與方法

1.1 資料 選取2010年3月－2010年12月在蚌埠醫學院第一附屬醫院婦科腫瘤科及三院婦產科住院手術治療的15例正常子宮內膜患者，10 例子宮內膜不典型增生患者，40 例子宮內膜癌患者。正常子宮內膜組:年齡32～54 歲，共15例。其中子宮肌瘤7 例、子宮內膜息肉2 例、卵巢漿液性囊腺瘤3 例、功能失調性子宮出血3 例。子宮內膜不典型增生組:年齡35～57 歲，共10 例。其中輕度子宮內膜不典型增生3例，中度及重度子宮內膜不典型增生7 例。子宮內膜癌組:年齡33～72 歲，共40 例。按國際婦產科聯盟(FIGO)手術病理－分期:Ⅰ期18 例，Ⅱ期9 例，Ⅲ期8 例，Ⅳ期5 例;組織學分級:高分化23 例，中分化10 例，低分化7 例;肌層浸潤深度≤1/2 者28 例，肌層浸潤深度＞1/2 者12 例;術后證實無淋巴結轉移者21 例，有淋巴轉移者8 例，未做淋巴結清掃者11例;子宮內膜樣腺癌32 例，透明細胞癌3 例，漿液性乳頭狀癌3 例，腺鱗癌2 例。

1.2 方法(1)主要儀器和試劑:①化學發光微粒子免疫分析儀ARCHITECT－i2000(美國雅培公司生產);②HE4 試劑盒(美國雅培公司生產);③HE4 定標液(美國雅培公司生產);④HE4 標準品(美國雅培公司生產，批號:88K00909)。(2)實驗步驟:術前抽取患者肘靜脈血3 ml，置于未加抗凝劑的試管中，無需處理，立即送檢。實驗開始前，將標本放入標記編號的玻璃試管內，3 000 轉/min，離心5 min，將吖啶酯類專利衍生物示蹤劑和HE4 抗體包被的類磁微粒子放入ARCHITECT－i2000 化學發光微粒子免疫分析儀試劑倉相應位置，將待測標本排序后放入反應倉，i2000SR 全自動免疫發光檢測儀自動檢測HE4 濃度。(3)質量控制:每批做高、中、低值質量控制。

1.3 統計學方法 所有數據采用SPSS17.0 軟件處理，計量資料用±s 的形式表示，因組間方差不齊，組間均數比較采用秩和檢驗。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HE4 在正常子宮內膜、子宮內膜不典型增生、子宮內膜癌患者血清中表達情況 正常子宮內膜組血清HE4 范圍為(27.7～84.0)pmol/L，均值為(40.3 ±16.2)pmol/L;子宮內膜不典型增生組血清HE4 范圍為(41～83)pmol/L，均值為(54.7 ±18.5)pmol/L;子宮內膜癌組血清HE4 范圍為(33.9～1040.9)pmol/L，均值為(120.2 ±195.6)pmol/L。子宮內膜癌組HE4 水平較正常子宮內膜組高，差異具有顯著性(Z=－3.444，P=0.01);子宮內膜癌組血清HE4 水平較子宮內膜不典型增生組高，差異無統計學意義(Z =－0.845，P =0.398);子宮內膜不典型增生組血清HE4 水平較正常子宮內膜組高，差異無統計學意義(Z=－1.859，P=0.063)。見表1。

2.2 血清HE4 水平與子宮內膜癌患者各臨床病理參數的關系 血清HE4 水平與子宮內膜癌的年齡，組織分級及病理類型無關(Z =－1.671，P =0.095＞0.05;Z =－1.569，P =0.117＞0.05;Z=－1.155，P =0.248＞0.05)，而與手術－病理分期，肌層浸潤深度及淋巴結轉移密切相關(P＜0.05)。Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 的均值為(67.76 ±57.37)pmol/L，Ⅲ－Ⅳ期患者血清HE4 的均值為(310.14 ±362.06)pmol/L，Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 水平明顯低于Ⅲ－ Ⅳ期患者(Z =－2.583，P=0.01＜0.05);深肌層浸潤的患者血清HE4 的均值為(335.35 ±355.15)pmol/L，淺肌層浸潤的患者血清HE4 的均值為(62.09 ±30.02)pmol/L，深肌層浸潤的患者血清HE4水平明顯高于淺肌層浸潤的患者(Z =－2.500，P =0.012＜0.05)。有淋巴結轉移的患者血清HE4 的均值為(437.36 ±413.90)pmol/L，無淋巴結轉移的患者血清HE4 的均值為(74.36 ±63.94)pmol/L，有淋巴結轉移的患者血清HE4 水平明顯高于無淋巴結轉移的患者(Z =－3.088，P =0.002＜0.05)。見表2。

表1 3 組患者血清HE4 水平(pmol/L，±s)

表1 3 組患者血清HE4 水平(pmol/L，±s)

組別例數HE4HE4范圍正常子宮內膜組1540.32 ±16.1627.7～84.0子宮內膜不典型增生組 1054.73 ±18.4941.1～83.2子宮內膜癌組40120.16 ±195.6633.9～1040.9

表2 血清HE4 水平與子宮內膜癌患者各臨床病理參數的關系(pmol/L，±s)

表2 血清HE4 水平與子宮內膜癌患者各臨床病理參數的關系(pmol/L，±s)

臨床病理參數例數HE4 水平Z 值P值年齡(歲):≤501156.57 ±26.43－1.671 0.095＞5029150.69 ±232.61手術－病理分期:Ⅰ－Ⅱ2767.76 ±57.37－2.583 0.010Ⅲ－Ⅳ13310.14 ±362.06組織學分級:高23118.75 ±162.29－1.569 0.117中低17125.46 ±230.00肌層浸潤:≤1/22862.09 ±30.02－2.500 0.012＞1/212335.35 ±355.15淋巴轉移:有8437.36 ±413.90－3.088 0.002無2174.36 ±63.94病理類型:子宮內膜樣腺癌32113.17 ±187.99－1.155 0.248其他類型8150.16 ±239.97

3 討論

子宮內膜癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，目前有關子宮內膜癌確切病因及發病機制尚不清楚，多數學者認為是遺傳信息的改變，在內分泌因素及外界環境因素的共同作用下逐漸演變的結果。盡管早期子宮內膜樣腺癌(Ⅰ型)預后較好，但晚期及特殊類型的子宮內膜癌(Ⅱ型)預后很差。晚期及復發性子宮內膜癌的平均生存時間僅12 個月，即使給予輔助治療，仍不能提高中位生存時間［10］。目前診斷性刮宮是婦科一項常用的、重要的輔助診斷方法，也是目前子宮內膜癌最有價值的診斷手段，但是無法準確評估病變范圍，因此不能有效的指導治療。而且由于它是盲目性操作，對一些小的或位于宮角的病灶，可能會出現漏診或診斷過度［11］，不適用于大批量患者的篩查。經濟可靠無創的血清腫瘤標志物的檢測不僅用于疾病篩查、早期診斷、鑒別診斷、療效判定、預測預后，而且還是隨診的重要指標，人附睪蛋白4(human epididymis gene product 4，HE4)是一種新型的腫瘤標志物，屬于乳清酸性4－二硫化中心(WFDC)蛋白家族，具有疑似胰蛋白酶抑制劑的特性［12-13］。HE4 位于染色體20q12－13.1，基因全長為12 kD 左右，基因編碼一段長度為13 kD 的蛋白，但在其成熟的糖基化形式時，此蛋白大概為20～25 kb，并且包括含有兩個WFDC 結構域的一條單鏈［14］。但近來研究表明HE4 在部分惡性腫瘤的早期診斷及病情監測方面具有重要的臨床價值，所以成為當今腫瘤分子生物學的研究熱點之一。本研究中HE4 在正常子宮內膜、子宮內膜不典型增生、子宮內膜癌患者血清中均有不同程度的表達，表明HE4 蛋白并非腫瘤特異性蛋白。Li J 等［15］研究證明HE4 在子宮內膜異位癥患者和健康人血清中均有不同程度的表達，張海榮等［16］報道HE4 在子宮腺肌癥患者和子宮肌瘤患者血清中表達有所不同。盡管HE4 蛋白并非腫瘤特異性蛋白，但是本研究中HE4 水平在正常子宮內膜、子宮內膜不典型增生、子宮內膜癌患者血清中表達逐漸升高，且子宮內膜癌組HE4 水平明顯高于正常子宮內膜組(Z=－3.444，P =0.01＜0.05)，因此提示HE4 與子宮內膜癌的發生有關。先前研究已經證實子宮內膜不典型增生是子宮內膜癌的癌前期病變，其癌變率為33%［17］，HE4 表達增高是否能促進不典型增生的子宮內膜向內膜癌轉化，或者說是子宮內膜癌的高危因素?我們認為是值得深入探討的問題。

本實驗中血清HE4 水平與子宮內膜癌的手術－病理分期，肌層浸潤深度及淋巴結轉移密切相關(P＜0.05)。子宮內膜癌的期別越晚，血清HE4 水平越高，Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 水平明顯低于Ⅲ－Ⅳ期患者(Z =－2.583，P =0.010＜0.05);深肌層浸潤的患者血清HE4 水平明顯高于淺肌層浸潤的患者(Z=－2.500，P =0.012＜0.05);有淋巴結轉移的患者血清HE4 水平明顯高于無淋巴結轉移的患者(Z =－3.088，P=0.002＜0.05)，即隨著臨床病期進展、組織浸潤和淋巴結轉移，HE4 基因表達水平升高，因此我們可以推測HE4與子宮內膜癌的發展密切相關。關于HE4 在子宮內膜癌患者血清中高表達的原因至今仍不明了。趙瑩珺等［18］在HE4基因轉錄水平進行了研究，闡明了HE4 基因的轉錄活性主要是由轉錄因子Sp1 與位于－71 和－48 的Egr－1 位點結合所介導。先前研究已證實Sp1 是一個普遍存在的轉錄因子［19］，可以受到某些組織特異性因子的調控，這些因子可以通過與Sp1 形成復合物的形式，促進或阻礙Sp1 與其識別位點的結合，從而實現啟動子調控的組織特異性［20］。本實驗中HE4 在子宮內膜癌患者血清中高表達，我們可以推測Sp1 可能受到子宮內膜癌組織特異性因子的影響，引起了HE4 基因轉錄活性的異常，使得其在子宮內膜癌患者血清中高表達。

總之，HE4 蛋白作為一種新型的腫瘤標志物正引起越來越多研究者的關注，其在腫瘤發生、發展及預后方面的作用正不斷被發現。但是有關HE4 蛋白的作用機制，作用細節及受調節的因素等研究甚少，還有很多功能仍然沒有被發現，HE4與子宮內膜癌的發生、發展、浸潤、轉移、復發的關系，尚需要進一步探討。

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