日糧中添加綠茶粉對白羽肉雞腸道菌群的影響

張嬌蕊，周裔彬，耿照玉

（安徽農業大學 動物科技學院，安徽 合肥230036）

動物腸道共生著數量龐大、結構復雜而穩定的菌群，腸道正常菌群和腸黏膜結合形成的機械屏障、免疫屏障與生物屏障不僅發揮著保持機體內環境穩定的作用，而且能有效防止致病物質的入侵［1］。腸道有益菌的增加可以增強抵抗動物對外界病原菌的感染。如乳酸桿菌和雙歧桿菌都可以增加腸表面防御能力，減少致病菌在腸道的定植［1］。增加腸道有益菌、減少致病菌能保持腸道微生態平衡，并使之更加穩固。

綠茶的主要成分包括茶多酚、咖啡堿、芳香油、氨基酸以及多種維生素等。而茶多酚具有抗氧化、殺菌解毒、提高免疫力等作用［2］。Butt等［3］研究綠茶可通過調節細胞生長和凋亡降低癌癥發病率，Francisco Gonzalez Gil［4］研究日糧中添加巴拉圭茶可抑制雞腸道沙門氏菌生長。然而目前綠茶在雞腸道方面的研究尚不廣泛，因此我們在此方向進行研究及探討。

本研究在肉雞日糧中添加不同濃度的綠茶粉，檢測雞腸道中主要微生物菌群及其濃度，分析比較回腸、盲腸內容物中雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、腸球菌的變化，探討綠茶粉對雞腸道微生物菌群的影響，為綠茶粉作為添加劑改善雞腸道菌群平衡提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及飼養

試驗用1日齡白羽肉雞495只，隨機分為5組，每組分三個重復，每個重復33只，對照組飼喂基礎日糧、組I為基礎日糧＋1%綠茶粉、組Ⅱ為基礎日糧＋2%綠茶粉、組Ⅲ基礎日糧＋4%綠茶粉、組Ⅳ為基礎日糧＋6%綠茶粉，試驗周期42d。綠茶粉由安徽農業大學茶與食品科技學院提供。綠茶粉按照每組比例與基礎日糧混勻后制粒，基礎日糧為玉米－豆粕型，配方及營養水平見表1。飼養試驗在安徽農業大學動物醫院對面家禽試驗基地雞舍進行。

表1 白羽肉雞各日齡日糧組成Table 1 Diet of broilers each period

1.2 腸內容物細菌檢測

試驗第42天，每重復隨機取肉雞2只屠宰，回腸和盲腸末端結扎。無菌條件下稱取0.5g內容物，加入5mL無菌生理鹽水充分混勻溶解稀釋，稀釋倍數為101、102、103、104和105，乳酸桿菌和雙歧桿菌在厭氧條件下培養（YQX－Ⅱ厭氧培養箱，上海恒科有限公司生產），大腸桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌和腸球菌為需氧培養（LHR－150生化培養箱，上海恒科有限公司生產）。根據各菌種在腸道內濃度差異，選擇合適的稀釋度接種三個不同梯度人工培養，細菌培養及計數參考張玲等［5］文獻。革蘭氏染色及鏡檢鑒定，計算每克內容物細菌數。

1.3 統計分析

組間腸內容物細菌總數用lgN表示，數據使用spss 19.0軟件單因素方差分析，試驗結果用平均數±標準差（±SD）表示。

2 結果分析

檢測結果表明，白羽肉雞回腸和盲腸中雙歧桿菌和乳酸桿菌數量與飼料中綠茶粉添加量呈正相關，且顯著高于對照組（p＜0.05）?；啬c和盲腸中金黃色葡萄球菌數量與飼料中綠茶粉添加量呈負相關，且添加綠茶粉各組顯著低于對照組（p＜0.05）。組I、組Ⅱ和組Ⅲ白羽雞回腸大腸桿菌數量顯著低于對照組（p＜0.05），盲腸中大腸桿菌數量僅在組Ⅱ和組Ⅲ中顯著低于對照組（p＜0.05），而組Ⅳ與對照組無顯著差異（P＞0.05）；回腸和盲腸中沙門氏菌數量僅在組Ⅳ中顯著低于對照組（p＜0.05）；回腸和盲腸中腸球菌數量各組間差異均不顯著（表2、表3）。

表2 回腸中各菌種濃度比較／lgCFU·g－1Table 2 The ileum of each bacteria concentration comparison／lgCFU ·g－1

表3 盲腸中各菌種濃度比較／lgCFU·g－1Table 3 The cecum of each bacteria concentration comparison／lgCFU ·g－1

3 討論與結論

綠茶含上百種化學成分，其主效成分為多酚類和黃酮類化合物［6］，其類黃酮茶多酚（EGCG）是茶多酚中含量最多的單體物質，姜濤［7］等研究EGCG具有抑制恥垢分枝桿菌生長的功能，并可激活腸道有益菌。證明多酚和黃酮類化合物具有調節腸道菌群的功效。這些化學成分對雞腸道菌類發揮不同作用。

隨著綠茶粉添加量的增加，雙歧桿菌和乳酸桿菌的數量不斷上升，屠幼英［8］等人研究綠茶對乳酸桿菌和雙歧桿菌的促生長試驗中發現，綠茶和綠茶酵母發酵液對這兩種菌都顯示了激活作用。本試驗中綠茶粉添加量與雙歧桿菌和乳酸桿菌數量也呈正相關。然而綠茶粉促進雙歧桿菌和乳酸桿菌生長機制尚不清楚，需要進一步研究。

徐靈龍等［9］人研究乳酸桿菌生長過程中產生有機酸、H2O2、細菌素、以及類細菌素等抑菌物質使大腸桿菌形態受到破壞甚至殺死作用。Lorca等［10］研究，腸道的乳酸桿菌能夠與致病菌競爭腸道受體及潛在結合位點，并且搶奪腸道內的營養物質，對致病菌群的生長繁殖起到了限制和消滅的作用［11］。而且乳酸桿菌和雙歧桿菌還能明顯激活巨噬細胞的吞噬作用，可形成天然自動免疫，致使致病菌減少［12］。這些大量研究不難解釋本實驗結果，有益菌增值而有害菌減少的現象。

華德興等［13］人研究綠茶中的多酚類物質可以有效的抑制金黃色葡萄球菌的增長，除此之外多酚類物質和β－內酰胺類抗生素和四環素合用時對抗葡萄球菌有增效作用。本試驗結果亦表明，綠茶粉添加可抑制金黃色葡萄球菌的生長。隨著綠茶粉添加量的增加，大腸桿菌、沙門氏菌數量顯著降低，和許靖逸等［14］、王韻陽等［15］研究體外抑菌結果相吻合。Ikigai等［16］研究證實，綠茶提取物的主要成分EGCG可與細菌細胞質膜蛋白特異性結合，影響細胞壁肽聚糖的代謝，破壞細胞膜脂質雙分子層，從而抑制細菌生長。這些研究表明綠茶中的有效成分能抑制有害菌增值，飼料中添加一定比例的綠茶可降低雞腸道常見有害菌的發病率。然而隨著綠茶粉濃度的增加，大腸桿菌的數量先減少后增加的現象可能與飼料中綠茶粉添加過多而引起飼料中能量比減少有關。

目前飼料中抗生素、激素類等藥物添加是養殖業的共性問題，探索及取代這類藥物增強動物生產性能及健康刻不容緩。本試驗結果顯示，綠茶粉可促進有益菌生長和抑制有害菌增值，增強雞腸道內菌群平衡。因此，探索綠茶粉在飼料中的應用是解決這類問題的方向之一。

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