石榴花色素中黃酮類化合物的分離及初步鑒定

米麗班·霍加艾合買提， 迪麗努爾·馬里克，毛居代·亞爾買買， 熱合滿·艾拉

（1.新疆師范大學科研處，新疆烏魯木齊830054；2.新疆師范大學生命科學學院，新疆烏魯木齊830054；3.新疆農業大學食品科學與藥學學院，新疆烏魯木齊830052；4.新疆師范大學化學化工學院，新疆烏魯木齊830054）

石榴花色素中黃酮類化合物的分離及初步鑒定

米麗班·霍加艾合買提1，4， 迪麗努爾·馬里克1，毛居代·亞爾買買2， 熱合滿·艾拉3

（1.新疆師范大學科研處，新疆烏魯木齊830054；2.新疆師范大學生命科學學院，新疆烏魯木齊830054；3.新疆農業大學食品科學與藥學學院，新疆烏魯木齊830052；4.新疆師范大學化學化工學院，新疆烏魯木齊830054）

文章對新疆石榴花色素中黃酮類化合物進行初步分離及鑒定。以石榴花為原料，用65%乙醇溶液進行提取，提取液經乙酸乙酯萃取得到石榴花中的色素類物質，紫外光譜鑒定后再用薄層層析進一步分離純化。通過顯色反應和紫外光譜初步鑒定其為黃酮類化合物。結論：通過與沼澤向日葵紫外波譜掃描特征的對比，初步判斷為沼澤向日葵素黃酮苷類化合物。

石榴花色素；黃酮類物質；薄層層析；波譜掃描

色素是一種重要的添加劑，廣泛應用于食品、日用化工產品、化妝品、醫藥衛生以及印染工業等領域［1］。隨著人類健康認識的提高，逐漸認識到人工色素雖然品種齊全、顏色鮮艷、著色好、具有較好的穩定性、易于溶解制備、成本低、使用方便等優點，但是，人工色素對人體有不同程度的危害，甚至致癌，因此食用合成色素的使用范圍、使用量不斷受到限制［2，3］。因此，尋找安全，具有一定的療效和保健功能的天然色素資源，是當今社會科技發展的新趨勢［4］。

隨著新疆特色林果業的大力發展，石榴種植面積日益擴大。據前人研究報道［5-6］，石榴花中含有豐富的黃酮類化合物，這類化合物易溶于水，水溶液色澤鮮艷，具有一定的保健功能，可作為食品添加劑，是一類值得開發的天然色素，但這些資源還沒有被開發利用。目前，有關石榴花的藥用功能方面研究較多，但對石榴花黃酮類化合物的分離鑒定方面的研究較少。文章對石榴花黃酮類化合物的分離、鑒定進行了初步探討，為石榴花資源的開發利用提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

電子恒溫水浴鍋（北京市永光明醫療儀器廠）；KQ-100VDE型雙頻數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；TU-1810紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；電吹風機。

1.2 材料

石榴花（購于新疆和田市）；鹽酸；無水乙醇；乙酸乙脂；甲醇；甲酸；冰乙酸；濃硫酸；碳酸鈉；三氯化鋁；中性醋酸鉛；正丁醇；二氯甲烷；三氯甲烷；甲苯；石油醚；丙酮；三氯化鐵（以上試劑均為分析純）；鎂粉；金屬鈉；硅膠薄層板。

2 試驗方法

2.1 樣品的預處理

自然風干的石榴花瓣經水清洗，去除夾雜物，陰干，粉碎，過40目篩儲存于陰涼處備用。

2.2 色素的提取

取石榴花粉末5.0克，用65%乙醇溶液浸提，料液比均為1：10（此結果為前期實驗所得），在60℃水浴下浸提24小時，待石榴花粉末顏色褪去，過濾除去殘渣的乙醇提取液呈橙紅色，酸性乙醇提取液呈石榴紅色。

3 色素的鑒定

3.1 色素的特殊顯色反應

3.1.1 鹽酸—鎂粉反應

取稀釋4倍后色素提取液5.0ml，加入少許鎂粉，振蕩，再加入幾滴稀鹽酸，色素提取液產生氣泡，顏色變深。如果不加鎂粉，而直接加入鹽酸，則沒有氣泡產生。說明該色素在鹽酸—鎂粉作用下，被氧化還原，因此，該色素屬黃酮類化合物［7］。

3.1.2 三氯化鋁顯色反應

隨著三氯化鋁的加入，稀釋至無色的石榴花色素提取液變為灰黃色，這與黃酮類化合物的顯色反應現象一致［8］。

3.1.3 碳酸鈉顯色反應

在稀釋至接近無色的石榴花色素提取液中加入碳酸鈉，充分搖勻后，溶液的顏色變為亮黃色，與黃酮類化合物的碳酸鈉顯色反應現象相吻合［8］。

3.1.4 濃硫酸的顯色反應

在稀釋至接近無色的石榴花色素提取液中逐滴加入濃硫酸溶液，溶液會立即由原來的深黃色變為橙色，顏色變化現象符合黃酮類化合物與濃硫酸反應后的顏色變化規律［8］。

3.1.5 中性醋酸鉛沉淀反應

隨著滴加飽和中性醋酸鉛溶液的增多，色素提取溶液由淡橙紅色變成淡黃色，且產生黃色沉淀，沉淀隨醋酸鉛溶液滴加而增多，表明該色素中含有酚基，而酚基是黃酮類化合物分子結構官能團之一［7］。

3.1.6 三氯化鐵顯色反應

在5.0ml稀釋4倍的色素提取液中加入少量1%FeCl3溶液，混合均勻后，溶液顏色由淡橙紅色變成靛藍色，這是由于色素分子中含有酚羥基的緣故，這與黃酮類化合物性質相似［7］。

3.2 色素的分離與純化

3.2.1 色素的分離

將色素提取液用蒸餾水稀釋至原濃度的40%，加入提取液1／3體積的乙酸乙酯，混合液倒入分液漏斗，充分振蕩，靜置24小時，取上層液備用。

3.2.2 色素的純化

3.2.2.1 最佳展開劑的選擇

用硅膠G板進行薄層層析，分別在表1中各種溶劑系統中展開［9］，待展開完成后，測定其Rf值，判斷分離效果，選出分離石榴花色素合適的展開劑系統，不同的溶劑系統展開效果如下，見表1。

表1 不同展開劑的展開效果

由表1可以看出，只有二氯甲烷：冰乙酸：水（2：1：1）可以使色素分離，但分離效果不佳，調整展開系統的極性，將三者的比例調整為（1：1：1），展開效果較好，以NaOH顯色劑，對光可清晰的看到橙紅色斑點，確定二氯甲烷：冰乙酸：水（1：1：1）為較理想的展開劑。

3.3 色素的光譜分析

將展開后的單一黃色譜帶取下加入適量乙醇，超聲波處理，過濾，揮干溶劑，用甲醇溶解，在200nm-600nm的波長范圍下進行紫外光譜掃描，得到清晰的波譜掃描圖如下，見圖1。

圖1 石榴花色素的光譜圖

從圖1可以看出，石榴花色素在紫外光譜210nm-290nm附近有一吸收峰，在310nm-370nm附近也有一吸收峰。大多數黃酮類化合物在甲醇中的紫外吸收光譜由兩個主要吸收帶組成，出現在300nm-400nm之間的吸收帶稱為帶Ⅰ，是由于B環桂皮?；到y的電子躍遷引起的吸收，出現在220nm-300nm之間的吸收帶稱為帶Ⅱ，是由于A環苯甲?；到y的電子躍遷引起的吸收。圖1表明，該色素的紫外吸收光譜與黃酮類化合物相似［10］，為黃酮類色素。

4 結論

新疆石榴花中含有豐富的黃酮類色素，純化分離后經紫外波譜在200nm-600nm波長范圍內掃描，可在280nm和308nm兩處見有兩個顯著的特征吸收峰，此特征與沼澤向日葵素在相同條件下的紫外波譜圖基本一致，由此將石榴花色素中的黃酮類化合物初步判斷為沼澤向日葵素的黃酮苷類化合物。

參考文獻：

［1］李巧玲，李琳，鄭必勝，等.天然食用色素及其在食品工業中的應用［J］.食品工業科技，2000，（6）：85-86.

［2］謝運昌.食用天然色素研究概況［J］.四川食品工業科技，1997，（2）：7-12.

［3］謝碧霞.杜紅巖.綠色食品開發利用［M］.北京：中國中醫藥出版社，2002，497-498.

［4］劉成梅，游海.天然產物有效成分的分離與應用［M］.北京：化學工業出版社，2003.

［5］茹克婭木·沙德克.維吾爾常用藥材學［M］.新疆科技衛生出版社，1993.128-129.

［6］迪莉拜爾·蘇里坦，馬木提·庫爾班.新疆石榴花中紅色素理化性質的研究［J］.食品科技，2000（2）：40-41.

［7］戴玉錦，葉琴，丁梅等.橙皮色素的鑒定及其穩定性研究［J］.江蘇農業科學，2005，（1）：105-108.

［8］陳亞高，呂瑜平，丁中濤，等，植物化學成分［M］.北京：化學工業出版社，2004.3，230.

［9］匡海學，董小萍，石任兵.中藥化學［M］.北京：中國中醫藥出版社，2003.1，149.

［10］中國科學院上海藥物研究所植物化學研究室編譯.黃酮體化合物鑒定手冊［M］北京：科學出版社，1981，461.

Isolation and Preliminary Identification of Flavonoids from Pomegranate Flower Pigment

Mihriban·HOJAHMAT1，4， Dilnur·MALIK1， Maojuda·YARMANMAT2， Rahman·ALA3
（1．Scientific Reasearch Department，Xinjiang Normal University，Urumqi，Xinjiang，830054，China；2．Department of Life，College of Life Science，Xinjiang Normal University，Urumqi，Xinjiang，830054，China；3．College of Food and Pharmacy，Xinjiang Agricultural University，Urumqi，Xinjiang，830052，China；4．College of Chemistry and Chemical Engineering，Xinjiang Normal University，Urumqi，Xinjiang，830054，China）

The paper studys the flavonoids of pomegranate flower pigments in Xinjiang.The extration from the folwer of Xinjiang pomegranate with 65%EtOH are extracted by EtOAc，then the pigments obtained were identified via UV and separated by TLC.The pigments of Xinjiang pomegranate flower belong to flavonoid glycoside com?pounds.Conclusion：The flavonoids collection were preliminarily identificated as that of marsh sunflower pigments by comparing the characteristic of UV spectrum scanning.

Pomegranate flower pigment；Flavonoids；TLC；Spectrum scanning

O652.6

A

1008?9659（2015）03?029?06

2015-06-25

新疆維吾爾自治區自然科學基金項目（2015211A036）。

米麗班·霍加艾合買提（1965-），女，新疆烏魯木齊人，副研究員，主要從事天然產物方向研究。