VVC患者與健康育齡婦女的陰道微生態比較

廖 琪，岳新愛，彭 英，陳 平，吳秀麗，唐袁婷，胡正強

(四川大學華西第二醫院臨床檢驗科，四川 成都 610041)

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VVC患者與健康育齡婦女的陰道微生態比較

廖 琪，岳新愛，彭 英，陳 平，吳秀麗，唐袁婷，胡正強

(四川大學華西第二醫院臨床檢驗科，四川 成都 610041)

目的：通過陰道微生態評價指標，了解外陰陰道假絲酵母菌病(VVC)患者與健康人群的陰道微生態差異。方法：隨機選取四川大學華西第二醫院婦科門診診斷為VVC患者199例，健康育齡婦女412例。經調查病史、年齡后，取陰道分泌物進行陰道微生態檢查，包括菌群密集度、菌群多樣性、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細胞、清潔度、線索細胞、pH值等，進行分析比較。結果：VVC組與健康對照組比較，除菌群多樣性和pH值沒有顯著性差異(P>0.05)外，其余指標均有顯著性差異(P<0.05)。VVC患者平均年齡顯著低于健康婦女，菌群密集度、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細胞、清潔度和線索細胞明顯高于健康對照組。結論：VVC好發于低年齡育齡婦女；通過監測陰道微生態指標的改變，臨床醫生可根據VVC患者的具體微生態狀況而針對性用藥。

外陰陰道炎癥；陰道微生態；外陰陰道假絲酵母菌??；育齡婦女

外陰陰道假絲酵母菌病(volvovagina candidiasis,VVC)是一種由假絲酵母菌的條件致病菌引起的外陰陰道炎癥。有研究顯示，VVC是假絲酵母菌在宿主外陰、陰道以及陰道環境相互作用的結果[1]。國外顯示約75%的女性一生中患過1次VVC，45%的女性經歷過2次及以上的發作[2]。國內14所醫院對VVC患者的流行病學的研究發現，婦科門診患者以陰道炎癥最多(31.3%)，在陰道炎中VVC又居首位(11.6%)[3]。外陰陰道假絲酵母菌病治療效果好，但復發率高的問題是一直困擾廣大女性的問題。它是一種內源性的難治性疾病。VVC的發生與陰道內環境的變化有著很大的關系。陰道內乳酸桿菌的減少往往是VVC發生的基礎，當陰道生態平衡被打破，或有外源性的病原體入侵時，就會導致VVC的發生。所以我們可以通過微生態的指標以及菌群的密集度、多樣性來觀察VVC與健康人群的差異?，F報道如下。

1 材料與方法

1.1 對象 調查2014年4—7月來我院婦科門診就診并有較好依從性和易于隨訪的VVC患者199例，為VVC組。并在同時間段抽取正常健康女性412例，為健康對照組。分析比較2組現病史、既往病史、年齡、診斷等資料。

1.2 VVC和健康人群的篩選 (1)癥狀：外陰瘙癢，伴有尿痛并性交痛的癥狀，白帶增多。(2)體征：陰道分泌物呈白色豆腐渣樣，且外陰潮紅、水腫，并伴明顯抓痕。(3)實驗室檢查：陰道分泌物以及微生態由專業醫生取到后，送至檢驗科檢查(確保整個過程不受其它外界環境的污染)。記錄陰道微生態檢查結果。

1.3 儀器和試劑 革蘭染液由貝索生物技術有限公司提供；細菌性陰道病聯合檢測試劑盒由珠海麗珠生物技術有限公司提供；烤片機、染色架、顯微鏡、孵育儀。

1.4 標本采集 由專業醫師用無菌棉拭子自陰道側壁上1/3處旋轉留取陰道分泌物，裝入干凈隔離的塑料瓶中送檢。

1.5 實驗室檢查 標本運送至檢驗科后，用烤片機烘干1 min固定后，進行革蘭染色。(1)初染。將放有涂片標本的染色架放入結晶紫乙醇飽和液缸內，染色約10 s，自來水沖洗干凈。(2)媒染。將染色架吸干多余水分后，放入堿性碘液缸內，染色約15 s,自來水沖洗。(3)脫色。將染色架吸干多余水分后，放入30%丙酮酒精缸內，脫色5～20 s，自來水沖洗。(4)復染。將染色架吸干多余水分后，放入堿性復紅乙醇飽和液缸內，染色約40 s，自來水沖洗干凈。5)烤干。VVC組和健康對照組均行陰道微生態檢查。陰道微生態檢查方法：先用細菌性陰道病聯合檢測試劑盒檢測pH值、唾液酸酶、過氧化氫和白細胞酯酶；涂片革蘭染色后，由顯微鏡觀察VVC組和健康對照組陰道分泌物鏡下的形態，包括假絲酵母菌孢子、假菌絲、芽生孢子、細菌群密度、菌群多樣性、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、Nugent評分、白細胞、清潔度、線索細胞等并記錄。微生態指標如唾液酸酶、pH值同時記錄。由于過氧化氫受外界因素影響，白細胞酯酶為破壞白細胞釋放的酯酶，僅反映既往炎癥狀況，均排除本研究。

1.6 陰道微生態判斷標準 陰道微生態正常的標準是正常菌群密度和菌群多樣性為Ⅱ～Ⅲ級、優勢菌為乳酸桿菌、清潔度Ⅰ～Ⅱ度、過氧化氫(乳酸桿菌功能)陰性、白細胞酯酶以及唾液酸酶(厭氧菌指標)陰性、陰道pH<4.5。

1.7 微生態指標的判斷標準 乳酸桿菌分級是根據與其他菌群的消長關系進行分級。Ⅰ級：許多多形乳桿菌，無其他細菌。Ⅱa級：混合菌群，主要為乳桿菌。Ⅱb級：混合菌群，但乳桿菌比例明顯減少。Ⅲ級：乳酸菌嚴重減少或缺失，其它菌群過度生長。Nugent評分為BV診斷的實驗室金標準[4]，其診斷方法為：0～3分為正常，4～6分為臨界范圍，7～10分可診斷BV。菌群密集度是指在油鏡下觀察每視野平均細菌數，Ⅰ級(+)1～9個，Ⅱ級()10～99個，Ⅲ級()100～999個，Ⅳ級()細菌聚集成團。菌群多樣性表示在油鏡下觀察辨別每視野細菌種類，Ⅰ級(+)1～3種細菌，Ⅱ級()4～6種細菌，Ⅲ級()7～10種細菌，Ⅳ級()11種及以上細菌。

1.8 數據的處理 本實驗選取菌群密集度、菌群多樣性、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細胞、清潔度、線索細胞、pH值、年齡這11個指標，以此對比VVC組和正常健康人群的微生態結果差異。將結果進行量化，以便進行統計學的分析。將所有項目結果中的未見和陰性均量化為0，查見和陽性以及弱陽量化為1；線索細胞：未見量化為0，1%～20%為1，>20%為2；白細胞：0～5個為量化0，5～15個為1，15～30為2，>30個為3；乳酸桿菌：<1個量化為0，1～5個/油鏡量化為1，6～30個/油鏡為2，>30個/油鏡為3；菌群密集度和菌群多樣性：Ⅰ級量化為1，Ⅱ級為2，Ⅲ級為3，Ⅳ級為4；乳酸桿菌分級：Ⅰ級量化為1，Ⅱa級為2，Ⅱb級為3，Ⅲ級為4，“無”為0；清潔度：Ⅰ度為1，Ⅱ度為2，Ⅲ度為3，Ⅳ度為4。

1.9 統計學分析 采用SPSS17.0統計軟件分析，計算2組數據的均數、標準差。2組間比較用成組資料比較的t檢驗。

2 結 果

2組患者年齡和各微生態指標的比較結果詳見表1。

表1 2組年齡和各微生態指標的比較

注：1)與對照組比較P<0.05；2)與對照組比較P<0.01

VVC組和對照組比較，在年齡、菌群密集度、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細胞、清潔度、線索細胞方面比較差異有統計學意義(P<0.05 或P<0.01)，而pH值、菌群多樣性方面比較無顯著性差異(P>0.05)。

3 討 論

VVC是婦科常見病，容易治療，但是復發率特別高，也較易轉變成復發性外陰陰道假絲酵母菌病(recurrent vulvovaginalcandidiasis，RVVC)。其機理不明確，有學者認為可能VVC的發生與陰道局部微生態環境異常有直接關系[5]。而陰道微生態體系是由陰道內正常菌群、機體內分泌調節和解剖生理結構共同組成，在受到內源性和外源性因素的共同影響時，容易發生改變[6]。正常情況下乳酸桿菌為優勢菌，可以黏附與競爭性地排斥假絲酵母菌，分解陰道上皮細胞的糖原產生乳酸降低陰道pH值[7]，產生過氧化氫[8]、細菌素、類菌素、表面活性物質[9]，抑制其他細菌的過度繁殖。乳酸桿菌的減少可致菌群失調，給了其他細菌生長的機會，就會引起相應的陰道炎癥，從而使pH值、菌群密集度、過氧化氫、乳酸桿菌等一系列微生態指標發生改變。從而對臨床上的診斷有很大的幫助。

本次研究發現，2組菌群密集度、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細胞、清潔度、線索細胞有顯著性差異，說明在VVC患者微生態中菌群密集度、乳酸桿菌、乳酸桿菌分級、唾液酸酶、Nugent評分、白細胞、清潔度、線索細胞存在顯著改變。在VVC組與健康對照組的年齡對比中，VVC組顯著低于健康對照組，表明低年齡育齡婦女容易感染VVC。而對于VVC患者來說，pH值、菌群多樣性與健康婦女無顯著性差異，這可能與下列有關：(1)樣本量較少，還可以擴大樣本量；(2)乳酸桿菌還存留一些功能正常能產酸的桿菌，使其pH值變化不大；(3)乳酸桿菌與假絲酵母菌在一定程度上達到了平衡，從而使陰道內的菌群種類控制在正常范圍，沒有引起其他細菌的過度生長。(4)由于假絲酵母菌的大量繁殖，控制了陰道內的營養來源，而抑制了其他細菌的生長繁殖。

綜上所述，VVC患者可以通過陰道微生態檢查反映臨床上是否治愈或者好轉，使陰道微生態成為指導臨床醫生合理用藥的一個重要指標。臨床治愈時，有約40%的患者微生態處于紊亂狀態，通過積極的恢復陰道微生態環境，復發率可下降2.3%[10]。在VVC患者的治療過程中通過動態監測微生態的指標變化，臨床醫生可以根據患者的具體微生態狀況而針對性用藥，這樣既可減輕醫生的治療麻煩又可減輕患者在治療過程中的痛苦。而對于正常健康育齡婦女，應注重個人衛生，保持陰道微生態平衡，避免VVC的發生。

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The Vaginal Micro Ecological Differences between Patients with VVC and Healthy Women of Reproductive Age

LIAO Qi,YUE Xinai,PENG Ying,CHEN Ping,WU Xiuli, TANG Yuanting, HU Zhengqiang

(Department of Laboratory Medicine,West China Second University Hospital,Sichuan University,Sichuan Chengdu 610041,China)

Objective:To investigate the vaginal micro ecological differences between patients with VVC (case group) and healthy women of reproductive age (control group) through the evaluation of vaginal micro ecological indicators.Methods:199 patients who were diagnosed as VVC in gynecological outpatient department of West China Second University Hospital,Sichuan University and 412 women of control group were enrolled in our study randomly.Their mrdical history and ages were investigated,and the vaginal micro ecosystem of vaginal discharge were evaluated,which were bacteria density,flora diversity,Lactobacillus, Lactobacillus classification,sialidase,Nugent scores,white blood cells,vaginal depuratory degree,clue cells,pH value and so on.The differences between the two study groups were calculated with statistical methods.Results:There were significant differences between the case group and the control group inmicro ecological indicators(P<0.05) except flora diversity and pH value(P>0.05).The average age of patients with VVC was lower than that of healthy women.The bacteria density,Lactobacillus,Lactobacillus classification,sialidase,Nugent score, white blood cells,vaginal depuratory degree and clue cells of patients with VVC were significantly higher than that of healthy women.Conclusion:VVC often occurs in women of low reproductive age.By monitoring the changes of vaginal micro-ecosystem,clinicians can use targeted drugs in treatment of patients with VVC according to the specific micro ecological status.

vulva vaginitis;vaginal micro-ecosystem; vulvovaginal candidiasis; women of childbearing age

四川省衛生廳科研項目(編號：120266)

胡正強，hufly747@163.com

R711.31

A

10.11851/j.issn.1673-1557.2015.06.007

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1688.R.20151113.1236.016.html

2015-01-04)