猴耳環消炎膠囊質量標準研究

彭亮，李詒光，陳杰，饒毅，魏惠珍，眭榮春

(江西中醫藥大學，江西 南昌 330006)

·中藥工業·

猴耳環消炎膠囊質量標準研究

彭亮，李詒光*，陳杰*，饒毅，魏惠珍，眭榮春

(江西中醫藥大學，江西 南昌 330006)

目的：研究建立猴耳環消炎膠囊的質量標準。方法：采用薄層鑒制法(TLC)為對猴耳環消炎膠囊中沒食子酸進行定性鑒別；采用高效液相色譜法同時對猴耳環消炎膠囊中沒食子酸和槲皮素進行定量測定。色譜柱為Odyssil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)；流動相為乙腈-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；檢測波長為254 nm；進樣量為5 μL。結果：薄層斑點清晰，分離效果好。沒食子酸在0.602～18.1 μg線性關系良好(r=0.999 5)，平均回收率為98.9%，RSD值為1.8%；槲皮素在0.016 9～0.507 μg線性關系良好(r=0.999 6)，平均回收率為99.5%，RSD值為1.5%。結論：建立的方法簡便可行、準確，可為猴耳環消炎膠囊的質量控制提供參考。

猴耳環消炎膠囊；質量標準；薄層鑒別；高效液相色譜法；沒食子酸；槲皮素

猴耳環為豆科植物猴耳環Archidendronclypearia(Jack)Nielsen.干燥略帶小枝的葉，又名蛟龍木、洗頭木等，屬多年生喬木，是一種能治療多種熱毒癥候，珍稀且獨特的南方藥材[1]。民間傳統以猴耳環枝葉煮水來洗瘡、化膿性傷口及濕疹等，其去腐生新功能獨特。猴耳環消炎膠囊為猴耳環藥材單方制劑，收載于《衛生部藥品標準·中藥成方制劑》第6冊(WS3-B-1249-92)，具有清熱解毒、涼血消腫、收濕斂瘡、止瀉等作用[2]，用于上呼吸道感染、急性咽喉炎、急性扁桃體炎、急性胃腸炎等，亦可用于細菌性痢疾?，F代研究表明，猴耳環主要含有黃酮類、酚酸類等成分，如沒食子酸、槲皮素等[3-4]。其中，沒食子酸具有抗炎、抑菌、抗病毒等功能；槲皮素具有抗氧化、清除自由基、增強免疫功能等作用[5-6]，與猴耳環消炎膠囊的藥理作用相同，是其主要有效成分[7]。目前，尚沒有對猴耳環消炎膠囊進行質量標準研究的文獻報道。為有效控制猴耳環消炎膠囊的質量，本文首次建立了該膠囊中沒食子酸的薄層鑒別方法，并建立了同時測定沒食子酸和槲皮素的高效液相色譜法，為猴耳環消炎膠囊質量標準的制定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀(包括Agilent ChemStation B.03.01軟件、G1379A在線真空脫氣機、G1311A四元泵、G1367A自動進樣器、G1316A柱溫箱、G1315B DAD檢測器)；SK5200LH超聲波清洗器(上?？茖С晝x器有限公司)；AB204-N型精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)；HH-4數顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)。

1.2 試藥

猴耳環消炎膠囊由貴州良濟藥業有限公司、廣州萊泰制藥有限公司、廣州市花城制藥廠提供，規格：0.4g/粒；猴耳環藥材由安徽省亳州市中信中藥飲片廠提供，經鑒定為豆科植物猴耳環Archidendronclypearia(Jack)Nielsen.；沒食子酸對照品、槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110831-201204，100081-200907)；薄層色譜用硅膠G(青島海洋化工廠)；乙腈為色譜純(山東禹王實業有限公司化工分公司)；水為娃哈哈飲用純凈水；甲醇等其他試劑均為分析純。

2 沒食子酸的薄層鑒別

取猴耳環消炎膠囊內容物及缺猴耳環陰性樣品各2 g，分別加水100 mL，回流提取30 min，濾過，濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30 mL。合并乙酸乙酯液，減壓回收至干，殘渣加甲醇1 mL使其溶解，作為供試品溶液和陰性對照溶液。取猴耳環藥材1 g，加水100 mL，同法制成猴耳環對照藥材溶液。另取沒食子酸對照品，加甲醇制成質量濃度為5 mg·mL-1沒食子酸對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(5∶5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁溶液，于105 ℃烘約5 min，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品和藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無此斑點，見圖1。

注：1.沒食子酸對照品；2.猴耳環對照藥材；3.陰性供試品；4～6.猴耳環消炎膠囊供試品(廣州萊泰制藥，批號分別為140101，140601，140702)圖1 猴耳環消炎膠囊薄層鑒別色譜圖

3 沒食子酸和槲皮素定量測定

3.1 對照品溶液的制備

取沒食子酸、槲皮素對照品適量，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成混合對照品溶液(每mL中分別含沒食子酸0.602 0 mg、槲皮素0.016 9 mg)。

3.2 供試品溶液的制備

取本品內容物約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL，稱定重量，回流提取1.5 h，取出，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取濾液，即得。

3.3 色譜條件與系統適應性試驗

色譜柱Odyssil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)；流動相為乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)，梯度洗脫(0～7 min，8% A；7～17 min，8%～24% A；17～27 min，24%～27% A)；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；檢測波長為254 nm；進樣量為5 μL。結果表明，混合對照品溶液和供試品溶液的色譜圖中沒食子酸、槲皮素色譜峰無拖尾，分離度良好，見圖2～3。

圖2 混合對照品色譜圖

圖3 供試品色譜圖

3.4 線性關系考察

精密吸取3.1項下制備的混合對照品溶液1、5、10、20、30 μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖。以對照品進樣量(μg)為橫坐標X，以峰面積為縱坐標Y，繪制標準曲線，并進行線性回歸。得回歸方程，沒食子酸：Y=620.26X+747.48(r=0.999 5)；槲皮素：Y=755.66X+4.467 5(r=0.999 6)。結果表明：沒食子酸對照品進樣量在0.602～18.1 μg與峰面積有良好線性關系；槲皮素對照品進樣量在0.016 9～0.507 μg與峰面積有良好線性關系。

3.5 精密度試驗

取3.1項下的混合對照品溶液，連續進樣6次，每次5 μL，按3.3項下色譜條件測定峰面積，沒食子酸的平均峰面積為294.6，RSD為0.75%；槲皮素的平均峰面積為79.9，RSD為1.1%，表明儀器精密度良好。

3.6 穩定性試驗

取猴耳環消炎膠囊(貴州良濟藥業有限公司，批號：20121008)，按3.2項下方法制備供試品溶液，分別在供試品溶液制備后0、2、4、8、12、24 h，按3.3項下色譜條件測定。結果沒食子酸的平均峰面積的RSD為0.59%；槲皮素的平均峰面積的RSD為1.6%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

3.7 重復性試驗

取猴耳環消炎膠囊(貴州良濟藥業有限公司，批號：20121008)6份，按3.2項下方法制備供試品溶液，按3.3項下色譜條件進樣測定。結果沒食子酸的平均質量分數為121.7 mg·g-1，RSD為0.31%；槲皮素的平均質量分數為2.63 mg·g-1，RSD為2.3%，表明該方法重復性良好。

3.8 加樣回收試驗

取已知含量猴耳環消炎膠囊(廣州花城制藥廠，批號：20140501)約0.5 g，共6份，精密稱定。分別精密加入一定量的沒食子酸對照品和槲皮素對照品，按3.2項下方法制備供試品溶液，按3.3項下色譜條件測定，計算回收率，見表1。沒食子酸平均回收率為98.9%，RSD為1.8%；槲皮素平均回收率99.5%，RSD為1.5%，表明該方法的準確度良好。

表1 沒食子酸和槲皮素加樣回收率試驗結果(n=6)

3.9 樣品測定

取10批猴耳環消炎膠囊，按3.2項下方法制備供試品溶液，按3.3項下色譜條件測定，將測得的沒食子酸和槲皮素的峰面積值各自代入線性回歸方程中，計算各樣品中沒食子酸和槲皮素的含量，結果見表2。

表2 猴耳環消炎膠囊中沒食子酸和槲皮素含量(n=3) mg/粒

4 討論

4.1文獻報道，沒食子酸與槲皮素在254、360 nm處均有較強吸收[8-9]，但本品在360 nm處槲皮素峰面積較小，故選擇檢測波長為254 nm，可與其他雜質峰完全分離。

4.2由于沒食子酸與槲皮素極性差別較大，必須采用梯度洗脫。同時，在流動相中加入磷酸可明顯改善沒食子酸和槲皮素色譜峰的峰形。

4.3猴耳環消炎膠囊中的槲皮素含量較低，不同廠家的有效成分波動較大，提示成品的工藝還有待完善，成品質量有待提高。

[1] 《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編[M].北京：人民衛生出版社，1986：613-615.

[2] 廣東省食品藥品監督管理局.廣東省中藥材標準：第一冊[S].廣州：廣東科學技術出版社，2004：197-199.

[3] 蘇妙賢，唐之岳，黃偉歡，等.猴耳環化學成分研究[J].中藥材，2009，32(5)：705-707.

[4] 李鏡友，羅巧紅，張曼，等.HPLC法測定不同采收期猴耳環中沒食子酸的含量[J].中藥材，2009，32(6)915-916.

[5] 柯發敏，張開蓮.沒食子酸的研究進展[J].瀘州醫學院學報，2011，34(4)：440-442

[6] 宋玉喬，姚凌云，曹蔚，等.槲皮素藥理作用研究近況[J].西北藥學雜志，2002，2(17)：40-42.

[7] 劉永剛，王曉東，張小兵.猴耳環質量標準研究[J].中國藥師，2008，11(1)：29-31.

[8] 李艷芳，夏泉，許風清，等.HPLC法同時測定熱淋清制劑中沒食子酸和槲皮素的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2008，14(12)：15-17.

[9] 梁泰剛，劉偉，趙承孝，等.HPLC法同時測定養心草中沒食子酸、槲皮素和山柰酚的含量[J].光譜實驗室，2009，26(4)：881-884.

QualityStandardofHouerhuanAnti-inflammatoryCapsules

PENGLiang，LIYiguang*，CHENJie*，SUIRongchun

(JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang330006，China)

Objective：To establish the quality standards for Houerhuan anti-inflammatory capsules.Methods：The gallic acid was identified by TLC，the contents of gallic acid and quercetin were determined by HPLC.The chromatographic separation was performed on Odyssil C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)，the mobile phase was acetonitrile-0.2% H3PO4in gradient elution.The flow rate was 1.0 mL·min-1，and the column temperature maintained at 30℃.The detection wavelength was 254 nm，and the injection volume was 5 μL.Results：TLC spots were clear，and good separated.The linearity of gallic acid was good in the range of 0.602-18.1 μg(r=0.999 5)，and the average recovery was 98.9%(RSD=1.8%).The linearity of quercetin was good in the range of 0.016 9-0.507 μg(r=0.999 6)，and the average recovery of 99.5%(RSD=1.5%).Conclusion：The established method is simple，accurate and can provide reference for quality control of Houerhuan anti-inflammatory capsules.

Houerhuan anti-inflammatory capsules；quality standard；TLC；HPLC；gallic acid；quercetin

2014-12-10)

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李詒光，主任中藥師，研究方向：中藥質量評價與開發；E-mail：lyg@jzjt.com 陳 杰，副教授，研究方向：中藥質量評價與開發；E-mail：813680107@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.7.015