熟三七配方顆粒的質量分析研究

曾恕芬，陳金東*，任楊帆，陳榮潔

(1.云南維和藥業股份有限公司，云南 玉溪 653100；2.云南省植物提取物工程研究中心，云南 玉溪 653100)

·中藥工業·

熟三七配方顆粒的質量分析研究

曾恕芬1，2，陳金東1，2*，任楊帆1，2，陳榮潔1，2

(1.云南維和藥業股份有限公司，云南 玉溪 653100；2.云南省植物提取物工程研究中心，云南 玉溪 653100)

目的：進行熟三七配方顆粒的質量標準研究，建立質量評價方法，為科學評價其質量提供依據。方法：采用薄層色譜法(TLC)對熟三七配方顆粒中人參皂苷Rh1、Rg3進行鑒別，采用高效液相色譜法(HPLC)對其三七皂苷R1，人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd進行含量檢測分析。結果：建立了熟三七配方顆粒中人參皂苷Rh1、Rg3的薄層鑒別方法；建立了檢測熟三七配方顆粒中三七皂苷R1，人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd的含量測定方法。結論：該方法簡單、準確、專屬性好，能有效對熟三七配方顆粒的質量進行評價。

熟三七配方顆粒；高效液相色譜；薄層色譜法

三七為五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根和根莖，具有散瘀止血、消腫定痛的作用。臨床上多用于治療咯血、吐血、便血、崩漏、外傷出血、胸腹刺痛、跌打腫痛[1]。三七中的主要成分是達瑪烷型四環三萜類皂苷，主要有三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd[1-2]。三七經蒸制后變成熟三七，有部分原生皂苷成分將轉化成人參皂苷20(R)-Rh1、20(S)-Rh1、20(R)-Rg3、20(S)-Rg3、Rh4、Rk3、Rg5、Rk1[3-4]。試驗研究表明，轉化后形成的次生皂苷中人參皂苷Rh1、Rg3的化學性質比較穩定。本文采用高效液相色譜法與薄層色譜鑒別方法相結合的方式，對熟三七配方顆粒的質量進行分析研究，為中藥配方顆粒的質量評價提供參考。

本文中使用的三七原料采購于文山中藥材市場，經中國科學院昆明植物研究所楊崇仁研究員鑒定為五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen 的干燥根。經檢驗各指標成分符合《中華人民共和國藥典》2010版一部中中藥材三七的質量標準。本文中使用同一批號的三七，經炮制加工，制備成不同批次的熟三七飲片，經檢驗熟三七飲片符合國家標準WS-11219(ZD-1219)-2002-2012Z的規定。再用不同批次熟三七飲片制備成不同批次的熟三七配方顆粒。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(Agilent1200型)；MILLIPORE超純水器(美國密理博公司)；美國丹佛雙量程電子天平(TB-215D)；天津恒奧超聲波清洗器(HU10260 B)；硅膠板(山東青島海洋化工)。

1.2 試藥

熟三七配方顆粒(自制，批號分別為20131105，20131109，20131111，20131010，20131021，20131030，20131204，20131216，20131229，20140110)；10%的硫酸乙醇溶液、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇、乙腈(德國默克公司)；水為超純水；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純；人參皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd、三七皂苷R1(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110745-200312，110703-200322，110703-200322，110704-200319，110704-200319)。

2 方法

2.1 薄層色譜法

試驗前，首先通過對樣品不同提取方法、純化方法、展開系統、展開劑、硅膠G板、點樣量、溫濕度、平衡時間、重復性試驗等進行系統考察，最終建立以下鑒別試驗方法。

2.1.1 供試品溶液的制備 取本品2.5 g，加水50 mL，超聲處理10 min，使之充分溶解，加入50 mL乙酸乙酯溶液進行萃取，取乙酸乙酯層濃縮至干，殘渣加入1～2 mL甲醇溶解，作為供試品溶液備用。

2.1.2 對照品溶液的制備 分別稱取適量人參皂苷Rh1、Rg3，加甲醇配制成質量濃度為1 mg·mL-1的混合對照溶液備用。

2.1.3 鑒別方法 分別取對照品溶液和供試品溶液各5～10 μL，點于同一硅膠G板上，用不加入熟三七提取物的空白顆粒作為陰性對照，以三氯甲烷-甲醇-水(8∶2∶0.2)為展開劑展開，展距為7～8 cm，取出晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，于105 ℃下烘至斑點顯色清楚即可，薄層色譜圖見圖1。

注：1.供試品20131105；2.供試品20131109；3.供試品20131111；4.人參皂苷Rh1、Rg3；5.陰性對照。圖1 三批熟三七配方顆粒的TLC圖

2.2 高效液相色譜法

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent SB C18柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm)；檢測波長：203 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進樣體積5～10 μL，以乙腈-水為流動相梯度洗脫，見表1。

表1 流動相洗脫條件

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取三七皂苷R1，人參皂苷Re、Rd對照品適量，加甲醇制成每1 mL含三七皂苷R10.2 mg、人參皂苷Re 0.2 mg、人參皂苷Rd 0.2 mg的混合溶液，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，即得；精密稱取人參皂苷Rg1、Rb1對照品適量，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg10.5 mg、人參皂苷Rb10.5 mg的混合溶液，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品1.25 g，置25 mL量瓶中，加水溶液適量，超聲處理10 min，使之全部溶解，用水定容至刻度線，搖勻，過濾，取續濾液用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2.4 線性關系考察 分別精密吸取上述對照品溶液1.0，2.0，4.0，8.0，10.0，15.0，20.0 μL，按2.2.1色譜條件測定峰面積，以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程。見表2。結果表明，本法線性關系良好，符合含量測定要求。

表2 線性測定結果

2.2.5 精密度試驗 精密吸取2.2.2中混合對照品溶液10 μL，重復進樣6次，記錄色譜圖與峰面積，測定結果顯示，RSD值都小于2%(n=6)，表明本法精密度良好，符合含量測定要求。見表3。

表3 精密度試驗結果

2.2.6 重復性試驗 分別精密稱取6份樣品(批號：20131109)，按2.2.3項下操作，依法測定，結果三七總皂苷含量以干燥品計為6.73%，測定結果顯示RSD值都小于2%，表明本法重復性良好。見表4。

表4 重復性試驗結果(n=6)

2.2.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別在0、4、8、12、24、36 h 各進樣10 μL，以5個指標成分的峰面積計算RSD值。計算結果顯示，RSD值均小于2.0%，表明供試品溶液在36 h內穩定。見表5。

表5 穩定性試驗結果(n=6)

2.2.8 準確度試驗 取同一批供試品(批號：20131111，含三七皂苷R10.49%、人參皂苷Rg13.04%、人參皂苷Re 0.23%、人參皂苷Rb12.20%、人參皂苷Rd 0.44%)適量，各6份，精密稱定，分別置25 mL容量瓶中，分別加入干燥至恒重的三七皂苷R1約3 mg、人參皂苷Rg1約19 mg、Re約1.4 mg、Rb1約13.8 mg、Rd約2.8 mg，依含量測定項下方法處理，測定計算回收率。結果見表6。

表6 準確度試驗(n=6)

2.2.9 樣品含量測定 取10批樣品，按擬定的含量測定方法操作。結果表明，本法穩定、可行，能對產品質量進行評價。測定結果見表7，熟三七配方顆粒及對照品的HPLC圖見圖2。

表7 含量測定結果(n=10)

注：A.熟三七配方顆粒；B.對照品；C.對照品；1.三七皂苷R1；2.人參皂苷Re；3.人參皂苷Rb1；4.人參皂苷Rg1；5.人參皂苷Rb1。圖2 熟三七配方顆粒及對照品HPLC圖

由表7可知，本品10批樣品含量穩定，含量限度按測定結果平均值的80%計算。本品按干燥品計算，含人參皂苷Rg1(C42H72O14)不得少于2.50%、人參皂苷Rb1(C54H92O23)不得少于1.70%、三七皂苷R1(C47H80O18)不得少于0.40%、人參皂苷Re(C48H82O18)不得少于0.15%、人參皂苷Rd(C48H82O18)不得少于0.30%，且人參皂苷Rb1(C54H92O23)、人參皂苷Rg1(C42H72O14)、三七皂苷R1(C47H80O18)、人參皂苷Re(C48H82O18)、人參皂苷Rd(C48H82O18)的總量不得低于5.00%。

3 討論

3.1中藥配方顆粒突破了傳統中藥飲片需要煎煮的服用模式，具有免煎易服、易儲存、攜帶方便等優點[5-6]。但中藥配方顆粒已不具備中藥飲片的外形、性狀及顯微鑒別，因此，建立切實可行的中藥配方顆粒質量分析標準是保證產品質量的關鍵環節。

3.2本文所述熟三七配方顆粒為由符合炮制規范的熟三七飲片經提取、濃縮、干燥、制粒等工序制成的新型飲片。云南省地方標準YPBZ-0193-2013、國家標準WS-11219(ZD-1219)-2002-2012Z分別收載有熟三七粉(蒸制)、熟三七散質量標準，兩份標準中都有其功能性成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb13個成分的總量不得低于4.5%的限定。目前，熟三七配方顆粒并無相關法定標準。本研究對熟三七配方顆粒的質量標準研究具有一定的參考價值。

3.3三七經蒸制后，部分原生皂苷成分將會轉化成次生皂苷[4]。云南省地方標準YPBZ-0193-2013、國家標準WS-11219(ZD-1219)-2002-2012Z質量標準項下并未對降解皂苷進行定性或定量分析，本文引入薄層色譜法對人參皂苷Rh1和Rg3進行鑒別，方法準確簡便，可有效控制制劑質量，彌補上述標準之不足。

3.4由方法學考察結果可見，本方法線性關系良好，重復性良好?；厥章式Y果表明，此方法可靠性良好，穩定性滿足測定時間的要求。該方法簡單、準確、專屬性好，能有效對熟三七配方顆粒的質量進行評價。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2] 楊崇仁，崔占和，周俊，等.生三七和熟三七皂苷成分的分離和鑒定[J].中藥通報，1985，10(9)：417-418.

[3] 余河水，張麗娟，宋新波，等.三七炮制品化學成分研究[J].中國中藥雜志，2013，38(22)：3910-3917.

[4] Liao P Y，Wang D，Zhang Y J，et al.Dammarane-type glycosides from the steamed notoginseng[J].Journal of Agricultural & Food Chemistry，2008，56(5)：1751-1756.

[5] 張建眷，王少臣，胡浩，等.中藥顆粒劑研究概況[J].中國現代醫學與臨床，2005，3(2)：30-31.

[6] 李松林，宋景政，徐宏喜.中藥配方顆粒研究淺析[J].中草藥，2009，40(增刊)：1-7.

StudyonQualityStandardofSteamedNotoginsengFormulaGranules

ZENGShufen1，2，CHENJindong1，2*，RENYangfan1，2，CHENRongjie1，2

Objective：To establish the quality standard for steamed Notoginseng formula granules，and provide a basis for scientific evaluation of its quality.Methods：Ginsenosides Rh1and ginsenoside Rg3in steamed Notoginseng formula granules were identified by TLC，and the contents of notoginsenoside R1，ginsenosides Rg1，Re，Rb1，Rd in steamed Notoginseng formula granules were determined by HPLC.Results：To established a method to identify Panax ginseng saponin Rh1and ginsenoside Rg3in Steamed Notoginseng Formula Granules by TLC；to establish a method to detect the content of Panax notoginsenoside R1，ginsenosides Rg1，Re，Rb1，Rd in Steamed Formula Notoginseng Granules.Conclusion：The established method is simple，accurate，reproducible，and it can be used as a quality control method for steamed Notoginseng formula granules.

Steamed Notoginseng formula granules；HPLC；TLC

(1.YunnanWeihePharmaceuticalsco.，Ltd，YuxiYunnan，653100，China；2.YunnanEngineeringResearchCenterofPlantExtracts，YuxiYunnan，653100，China)

2014-07-02)

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陳金東，工程師，研究方向：天然藥物分析研究；Tel：(0877)2666733-2101，E-mail：chenjindong_2005@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.7.018