凝膠色譜-氣相色譜法測定11種動植物油脂中角鯊烯的含量

王李平，林　晨，方　軍，蔡大川，林澤鵬，方　麗，吳凌濤，李雪瑩

（中國廣州分析測試中心，廣東省分析測試技術公共實驗室，廣東廣州510070）

凝膠色譜-氣相色譜法測定11種動植物油脂中角鯊烯的含量

王李平，林晨*，方軍，蔡大川，林澤鵬，方麗，吳凌濤，李雪瑩

（中國廣州分析測試中心，廣東省分析測試技術公共實驗室，廣東廣州510070）

動植物食用油經環己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）萃取后，用凝膠色譜法對油樣品進行凈化處理，去除樣品中大分子的油脂，再采用氣相色譜法對動植物食用油中角鯊烯進行測定，以建立多種動植物油中角鯊烯的凝膠色譜-氣相色譜（GPC-GC-FID）測定方法。在一定的實驗條件下，角鯊烯在9.40～940μg·mL-1范圍內呈現良好線性關系，相關系數R2為0.9999，方法回收率為95.7%，RSD為3.0%。該方法處理后的食用油樣品中干擾基質少，靈敏度高，可有效避免檢測過程中儀器的污染，廣泛應用于動植物食用油中角鯊烯的檢測，為評判動植物食用油標準提供依據。

凝膠色譜，氣相色譜法，動植物食用油，角鯊烯

角鯊烯（Squalene）又名鯊烯、鯊萜，分子式為C30H50，是一種高度不飽和的直鏈三萜烯類化合物。在常溫下呈無色油狀液體，具有令人愉快的氣味［1］。Tsujimoto最早在黑鯊魚肝油中發現了角鯊烯［2-3］，其為生物體內自然合成產生的一種活性物質，具有調節多種生理功能的作用，如提高超氧化物歧化酶（SOD）活性、增強機體免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤、滲透、擴散和殺菌等［4-5］，現已被廣泛應用于保健食品、化妝品及醫藥等相關領域。

角鯊烯普遍存在于動植物體內，深海鯊魚肝臟含量最高，其次為植物油，如橄欖油和棕櫚油含量較高，米糠油、油茶籽油次之。目前對食用油中角鯊烯的分析方法主要有高效液相色譜法（HPLC）［6-8］、氣相色譜法［9-13］和氣質聯用法［14-18］。液相色譜主要是以反相液相色譜配紫外檢測器應用為主，其流動相主要為甲醇/乙醇-水體系，但由于角鯊烯的極性較小，難溶解于此體系中，并且其紫外吸收較弱，故限制了其在液相色譜檢測中的應用。氣質聯用法雖檢出限較低，但其對儀器要求比較嚴格，現還不能普及到大多的實驗室中，故本文采用氣相色譜法對動植物油脂中的角鯊烯進行分析。實驗中發現油脂中成分較復雜，富含油脂類和色素類物質，凈化困難，易造成對色譜系統的污染，故選用多孔凝膠為固定相的凝膠色譜凈化系統對油脂進行凈化處理，去除色素和油脂，再結合氣相色譜對動植物油脂中的角鯊烯進行定量分析。本文旨在建立GPC-GC-FID色譜法測定動植物油脂中角鯊烯的檢測方法，以期將其廣泛的應用于動植物油脂中角鯊烯含量測定分析中。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

角鯊烯純度99.5%；乙酸乙酯、環己烷色譜純；其他試劑均為分析純；11種食用油均來自市售食用油。

凝膠色譜儀、Bio Beads S-X3凈化柱（300mm× 25mm，38～75μm）美國J2 Scientific公司；Agilent 7890A氣相色譜儀（配氫火焰離子化檢測器）美國安捷倫公司；氮吹儀美國Organomation Associates Jnc；BSA224Sx型分析天平賽多利斯科學儀器有限公司。

1.2實驗方法

1.2.1標準工作溶液的配制精確稱取角鯊烯標準品25.0mg，用環己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）定容至25m L，配制成1000μg/m L角鯊烯標準儲備液，置于冰箱4℃避光保存。分別精密移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0m L標準溶液（濃度為940μg·m L-1）于10m L容量瓶，將儲備液稀釋為9.40～940μg·m L-1濃度梯度，供繪制標準曲線用。

1.2.2樣品處理精密稱取食用油2.0g，用環己烷-乙酸乙酯混合溶液（體積比1∶1）定容至10m L；取定容溶液于10m L凝膠色譜（GPC）進樣瓶中，注入5m L于GPC色譜儀，用環己烷-乙酸乙酯混合溶液（體積比1∶1）對樣品進行凈化處理，流速為4.7m L/min，收集時間段為13～19min的洗脫液，將此洗脫液揮至近干，用正己烷定容至10m L，進行氣相色譜測定。

1.2.3色譜條件色譜柱：DB1701（30m×0.32mm× 0.25μm）；柱溫：150℃維持2m in，再以10℃/m in升至250℃，維持18m in；汽化室溫度270℃；檢測器溫度300℃；分流比為10∶1，進樣量：1μL；載氣：氮氣流量：恒流3.0m L·m in-1，氫氣流量：40m L·m in-1，空氣流量：450m L·m in-1，尾吹流量：45m L·m in-1。

2　結果與討論

2.1GPC色譜條件考察

凝膠滲透色譜是利用被分離物質本身與雜質間相對分子質量的大小，能夠有效除去大分子油脂的雜質，從而達到凈化食用油樣品的目的。由于角鯊烯無大共軛體系，紫外吸收較弱，不能單純的從凝膠色譜工作站判定角鯊烯的洗脫曲線，故采用手動收集代替自動收集。每隔0.5m in收集一次洗脫液，每次收集1.0m L，并對洗脫液進行檢測；以時間為橫坐標，響應峰面積為縱坐標，得到角鯊烯標準品與茶油樣品中角鯊烯的洗脫曲線，結果見圖1，在此GPC條件下，角鯊烯出峰時間為13～19min，角鯊烯的回收率為86.6%，能滿足檢測要求。

2.2色譜行為

2.2.1色譜條件本文采用DB1701毛細管色譜柱和FID檢測器測定食用油中角鯊烯，由于毛細管柱柱效高，角鯊烯峰形以及分離效果良好，能夠滿足分析的要求。依照本實驗方法得到角鯊烯標準品和茶油樣品色譜圖見圖2。

圖1　角鯊烯（a）和茶油（b）的凝膠色譜流出曲線Fig.1　The GPC chromatography curves of squalene（a）and camellia oil（b）

圖2　角鯊烯標準品（a）及茶油樣品（b）色譜圖Fig.2　The GC chromatograms of squalene standard solution（a）and camellia oil（b）

2.2.2線性范圍及檢出限本方法采用外標法定量，角鯊烯在9.40～940μg·m L-1濃度范圍內呈現良好的線性關系，其線性方程為y=2.0273c+5.0887，線性相關系數R2為0.9999。對于角鯊烯含量較高的樣品，如經凈化處理后，濃度超出線性范圍，則可稀釋后再測定。

再將角鯊烯標準溶液進行不斷稀釋，按信噪比S/N=3，直至峰高為噪音3倍時的濃度為檢出限，此時角鯊烯的濃度為0.5μg·m L-1；以樣品稱樣量為2.0g計，角鯊烯的檢出限為5μg·g-1，除高于氣質聯用法外，均低于文獻報道氣相色譜法的檢出限［11-15］。

2.2.3精密度實驗精密取經凝膠色譜凈化后的茶油樣品，注入氣相色譜儀，連續進樣6次，其平均峰面積為22.38，RSD為3.6%，可知本方法的精密度可靠。

2.2.4穩定性實驗取茶油樣品溶液，在室溫下放置，每小時進樣一次，連續進樣12h，按“1.2.3”項下色譜條件進行測定，以峰面積的相對標準偏差考察穩定性，其平均峰面積為22.72，RSD為4.1%，表明茶油樣品溶液在12h內穩定。

2.2.5重復性實驗取茶油（同一批）6份，按“1.2.2”項下方法處理，測定角鯊烯含量并計算其相對標準偏差，茶油樣品中角鯊烯平均含量為112.7μg·g-1，RSD為3.1%，結果表明該方法重復性良好。

2.2.6加樣回收實驗精密稱取6份茶油（同一批），每份1.0g，加入120μL角鯊烯標準品溶液（濃度為940μg·m L-1），再按“1.2.2”項下方法處理，具體結果見表1。

表1　加樣回收率實驗結果Table 1　The resultof recovery experiments

2.2.7樣品測定為了解市售動植物食用油中角鯊烯的含量狀況，購買了11種食用油樣品進行了實驗，對購買的動植物食用油樣品按“1.2.2”項下方法提取制備，在擬定的色譜條件下測定，結果見表2。

表2　動植物食用油中角鯊烯含量測定的結果Table 2　The result of squalene in edible oils of plant and animal

由表2可知，11種動植物食用油中均含有角鯊烯成分，其中橄欖油含量最高，其含量為4927μg·g-1，其次為魚油1115μg·g-1，除葵花籽油、小磨香油和芝麻油小于50μg·g-1，大部分食用油中角鯊烯的含量在50～300μg·g-1之間。針對目前國標制定時間較早，其未把動植物食用油中的角鯊烯含量指標納入食用油等級和真假的判定中，故本文建議結合食用油國標中各項指標與角鯊烯的含量對動植物食用油整體質量進行評估，有利于鑒別動植物食用油的優、劣及真、假。

3　結論

本文建立了凝膠色譜-氣相色譜（GPC-GC-FID）測定多種動植物食用油中角鯊烯含量的方法，油樣經環己烷-乙酸乙酯（1∶1，V/V）萃取后，用凝膠色譜除去大分子的油脂，再采用氣相色譜法對其進行定量分析，平均回收率為95.7%，RSD為3.0%，最低檢出限為5μg·g-1。該方法具有樣品前處理簡單、快速、靈敏、準確等特點，可應用于食用油中的角鯊烯含量測定。

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Determ ination of squalene in edible oils of p lant and animalby gel permeation chromatography-gas chromatography method

WANG Li-ping，LIN Chen*，FANG Jun，CAIDa-chuan，LIN Ze-peng，FANG Li，WU Ling-tao，LIXue-ying
（Guangdong Provincial Public Laboratory of Analysis and Testing Technology，China National Analytical Center Guangzhou，Guangzhou 510070，China）

To estab lished the gel chromatog raphy-gas chromatog raphy（GPC-GC-FID）method for the assay of squalene in severaledib le oils of p lant and animal，the oils were extracted by cyc lohexane-ethyl acetate（1∶1，V/V），then purified by GPC to remove macromolecule grease，and then squalene was determ ined by gas chromatog raphy.Under the experimental cond ition，squalene showed a good linear relationship in the range of 9.40～940μg·m L-1，R2was 0.9999.The recovery was 95.7%，RSD was 3.0%.The method had the advantage in small sam p le matrix interference，high sensitivity，avoid ing contam ination instrument，could be w idely used in the analysis of squalene in ed ib le oils of p lant and animal samp le，which p rovided the basis for judging criteria of ed ib le oils of p lant and animalsam p le.

gel chromatography；gas chromatog raphy；edib le oils of p lantand animal；squalene

TS201.1

A

1002-0306（2015）06-0069-03

10.13386/j.issn1002-0306.2015.06.006

2014-06-05

王李平（1985-），碩士研究生，主要從事食品及藥品的安全質量方面的研究。

林晨（1979-），碩士研究生，助理研究員，主要從事食品及保健品的安全質量方面研究。

廣東省專業鎮中小微企業服務平臺建設項目（2013B091604003）。