四川部分地區鴨蛋沙門氏菌的分離鑒定及藥敏實驗

劉少文，郭春華，馬曉龍，柏　雪，張正帆，李文娟

（西南民族大學生命科學與技術學院，四川成都610041）

四川部分地區鴨蛋沙門氏菌的分離鑒定及藥敏實驗

劉少文，郭春華，馬曉龍，柏雪*，張正帆，李文娟

（西南民族大學生命科學與技術學院，四川成都610041）

為了解四川部分地區不同飼養方式的鴨蛋沙門氏菌（Salmonella spp.）污染與耐藥情況，本實驗采集了集約化養殖（50枚）和農戶散養（50枚）的100枚鴨蛋，采用國家標準GB 4789.4-2010對其蛋殼及內容物進行沙門氏菌檢測，同時進行血清型鑒定和藥物敏感實驗。結果發現散養鴨蛋的蛋殼和內容物沙門氏菌污染率分別為28%和30%；集約化養殖的蛋殼污染率為24%，蛋內容物無污染。血清凝集實驗共檢測出8種血清型，流行菌株為鼠傷寒沙門氏菌（34.1%），其次為腸炎沙門氏菌（22%）和鴨源沙門氏菌（14.6%），其余菌株檢出率較低。分離得到的41株沙門氏菌對青霉素（100%）、氨芐西林（87.80%）、阿莫西林（75.61%）、四環素（73.17%）耐藥率較高，對鏈霉素呈現中等敏感，對其余抗生素表現不同程度的耐藥。研究結果表明四川地區鴨蛋沙門氏菌污染情況和耐藥性已較為嚴重，應加強沙門氏菌流行病學監測和抗生素的使用監管。

鴨蛋，沙門氏菌，分離，鑒定，耐藥性

沙門氏菌（Salmonella spp.）是腸桿菌科中的一個大屬，屬革蘭氏陰性菌，生化特性與抗原結構相似，廣泛存在于自然界中［1］。沙門氏菌是主要的食源性致病菌之一，對人和動物危害極大?？蓪е馒唫魅拘詽{膜炎、鴨病毒性肝炎、卵巢炎、仔豬副傷寒、羊流產等多種動物疾病，人一旦攝入含大量沙門氏菌的動物源性食品后會引起腸胃炎、腹瀉等［2-3］。全世界因沙門氏菌造成的食物中毒和食源性疾病案例居高不下。同時，畜牧業長期以來大劑量不合理使用抗生素，也使沙門氏菌的耐藥性日趨增強。研究表明，各國相關部門紛紛對食源性致病菌的耐藥性進行了監測，該菌的多重耐藥率已從上世紀90年代的20%～30%增加到了本世紀初的70%［4］。目前國內有關雞蛋沙門氏菌的檢測較多，而鴨蛋沙門氏菌檢測較少。因此，本實驗對來自四川部分地區集約化養殖和農戶散養的共100枚鴨蛋蛋殼及內容物進行沙門氏菌檢測與鑒定，同時進行藥物敏感實驗。旨在了解2014年四川地區鴨蛋沙門氏菌的污染情況和耐藥情況，為該地區食品安全和沙門氏菌的耐藥性安全評價提供依據。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

鴨蛋2014年3月至2014年5月，從四川省成都市等10個地區隨機采集來自集約化養殖（50枚）和農戶散養（50枚）的100枚鴨蛋，采集的每枚樣品蛋分別放入無菌食品塑料袋內，4h內送回西南民族大學生命科學與技術學院動物營養實驗室，立即檢測蛋殼表面和蛋內容物沙門氏菌污染情況；緩沖蛋白胨水（BPW）、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂、三糖鐵瓊脂（TSI）、桿菌科生化鑒定培養基、腸桿菌科細菌生化鑒定管均由杭州微生物試劑有限公司生產；沙門氏菌屬診斷血清由寧波天潤生物藥業有限公司生產；藥敏試紙片（青霉素類：青霉素、阿莫西林、氨芐西林，氨基糖苷類：慶大霉素、卡那霉素、鏈霉素，喹諾酮類：洛美沙星、諾氟沙星、環丙氟哌酸，四環素類：四環素。） 均由杭州微生物試劑有限公司生產。

SYQ-DSX-280B手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌鍋

由上海申安醫療器械廠生產；THZ-98C恒溫振蕩培養箱由上?？茖W儀器有限公司生產；SW-CJ-2FD潔凈工作臺由蘇凈集團蘇州安泰空氣技術有限公司生產。

1.2檢測方法

參照國家標準GB 4789.4-2010《食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗》方法對100枚鴨蛋的蛋殼及內容物進行生化檢測。藥敏實驗參照WHO推薦的K-B瓊脂紙片擴散法，藥敏結果按NCCLS標準作出判斷。

1.3數據統計與分析

實驗數據采用SPSS18.0軟件進行卡方檢驗。p＜0.05為差異顯著，p＜0.01為差異極顯著。

2　結果與分析

2.1鴨蛋沙門氏菌污染情況

表1　鴨蛋沙門氏菌污染情況Table 1　The duck eggs，contamination of Salmonella

不同檢測部位的鴨蛋沙門氏菌檢出結果見表1，由表1可知，來自集約化養殖的鴨蛋內容物未檢出沙門氏菌，蛋殼檢出率為24%；來自農戶散養的鴨蛋蛋殼及內容物檢出率均高于集約化養殖的鴨蛋，分別為28%和30%，且二者無顯著差異（p=1.00）。

趙磊等［5］檢測發現北京市售集約化雞蛋的蛋殼表面沙門氏菌平均污染率為15%，內容物為3.3%。本實驗研究結果與其一致。這可能是因為禽蛋從泄殖腔產出，被糞便污染，沙門氏菌可能主要寄生在蛋殼表面，故使得禽蛋表面帶菌率較高。但同時本研究發現來自農戶散養型鴨蛋蛋殼與內容物沙門氏菌污染率均較高。游洋等［6］對某地區來自農貿市場和超市的市售鮮鴨蛋進行沙門氏菌檢測，結果顯示在該地區抽樣的15批次鮮鴨蛋中，內容物未檢測出沙門氏菌，蛋殼污染率為13.3%。本研究結果與其相比，差異較大。分析原因可能是市售鮮鴨蛋經過某些消毒處理，而本研究采集的散養型鴨蛋全部來自農戶，樣品采集時發現農戶儲存的鴨蛋大多表面不清潔，污漬較多，部分鴨蛋可能儲存時間較長，加之未經過任何消毒處理。因此，這類鴨蛋極易受沙門氏菌的污染，且污染率較高。趙瑞宏等［7］對皖南山區散養土雞蛋蛋殼及內容物進行了沙門氏菌檢測，結果表明蛋殼檢出率為27.5%，內容物蛋黃檢出率2.5%，蛋清為5.0%。雞蛋內容物沙門氏菌污染率較低可能是因為雞蛋蛋清中的溶菌酶含量較多，具有較好的殺菌作用［8］。而本實驗中造成散養型鴨蛋內容物沙門氏菌污染率較高的可能原因除散養型鴨蛋未經任何消毒處理，沙門氏菌可通過氣孔進入內容物外，還可能是由于鴨蛋內容物含溶菌酶較雞蛋少或鴨蛋儲存時間較長而使溶菌酶含量下降所致［9］。因此，禽蛋在銷售和食用前應保持蛋殼表面清潔，作合理的消毒處理，同時注意保質期。

2.2不同飼養方式對鴨蛋沙門氏菌污染的影響

蛋殼或蛋內容物任一部位檢出沙門氏菌均視為陽性樣品。不同飼養方式對鴨蛋沙門氏菌污染的影響見表2。由表2可知，集約化養殖與農戶散養的鴨蛋沙門氏菌檢出率分別為24%和48%，農戶散養檢出率顯著高于集約化養殖（p=0.021）。

表2　不同飼養方式的鴨蛋沙門氏菌污染情況Table 2　The duck eggs，contamination of Salmonella with different rearingmethods

尹曉楠等［10］對北京地區散養雞蛋進行沙門氏菌檢測，結果表明該地區散養雞蛋污染率為40%。陳飛等［11］對江蘇省不同地區的集約化雞蛋進行沙門氏菌檢測，結果顯示該地區雞蛋沙門氏菌污染率為18.24%。以上研究表明農戶散養型禽蛋更易受到沙門氏菌侵染。除上述可能原因外，還可能與禽蛋保存條件較差、散養母鴨產蛋環境不清潔易于沙門氏菌的滋生，從而導致垂直傳播等因素有關［12］。本研究采集的集約化鴨蛋均來自農貿市場和超市，部分農貿市場環境潮濕，貨物流通量較大，鴨蛋在銷售過程中不可避免地感染沙門氏菌。此外，集約化鴨蛋蛋殼表面可能經過某些消毒處理，但大多數鴨蛋仍然不清潔，表面污垢清晰可見。故這類鴨蛋內容物受到沙門氏菌的污染可能性較大。因此，在飼養家禽時，應該保證飼養環境以及孵化、產蛋環境的干凈清潔，定期消毒。除此之外，潔凈、通風和有序的銷售市場也至關重要。

2.3血清型鑒定

100枚鴨蛋蛋殼及內容物共檢測出41株沙門氏菌，8種血清型，流行菌株為鼠傷寒沙門氏菌，占分離菌株總數的34.1%。此外，腸炎沙門氏菌、鴨沙門氏菌比例較高，分別為22.0%和14.6%。其余結果見表3。

表3　100枚鴨蛋蛋殼及內容物沙門氏菌血清型鑒定結果Table 3　The results of identification of the Salmonella serotype from 100 duck eggshells and its contents

鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、鴨沙門氏菌、白痢沙門氏菌（SalmonellaPullorum）等具有廣泛的宿主性，能夠引起人畜共患，是鴨沙門氏菌病的主要病原菌。余曉龍等［13］在2012年對四川省7個地區規?；唸鲋幸伤粕抽T氏菌病的患病鴨中展開了血清型調查，結果共分離出6種血清型，流行菌株為鼠傷寒沙門氏菌，占分離菌株的37.5%，腸炎沙門氏菌占14.6%，本研究結果與其一致。而程平等［14］在2013年對四川、重慶地區部分鴨場的死胚、弱雛進行沙門氏菌檢測，結果發現鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌檢出率較低，均不超過3%，本研究的其他血清型未檢出。這說明時間、地點、實驗材料等因素可能對沙門氏菌血清型影響較大。但值得注意的是雷丁沙門氏菌很少在禽蛋中檢測出來，而本研究在集約化鴨蛋中檢測出該菌屬，說明目前畜牧業養殖環境與以前相比有所改變，可能有利于一些不常見的血清型生長。這提示沙門氏菌的流行病學發生了變化，應加強跟蹤監管。

2.4耐藥性

采用肉湯微量稀釋法對上述檢出的沙門氏菌進行抗生素藥敏實驗，結果見表4。由表4可知，41株鴨源性沙門氏菌對青霉素、氨芐西林、阿莫西林、四環素耐藥率較高，分別為100%、87.80%、75.61%、73.17%；鏈霉素的中等敏感率較高，為75.61%。對其余抗生素的耐藥率在10%以下。

周佳等［15］對四川省動物性食品源沙門氏菌的耐藥性監測與分析中顯示，分離到的沙門氏菌對青霉素類、氨芐西林（60.53%）和阿莫西林（56.58%）耐藥率較高，本研究結果與其相比，耐藥率相對偏高。趙愛華等［16］在2010～2011年江蘇泰州周邊地區分離的腸炎沙門氏菌對氨芐西林和四環素的耐藥率分別為74.2%和64.5%。但與廖成水等［17］報道的61.22%和19.39%相比差異較大。除上述幾種抗生素外，本研究中分離到的沙門氏菌對其余抗生素也表現不同程度耐藥性。沙門氏菌耐藥性增加可能與細菌耐藥性存在地區差異、抗菌藥物廣泛使用、菌體本身因素（產生耐藥質?；蛲蛔儯┑纫蛩赜嘘P。

表4　鴨源性沙門氏菌耐藥性實驗結果Table 4　The results of drug resistance of the Salmonella from duck eggs

3　結論

本研究對四川地區動物源性沙門氏菌的污染情況和血清型作了較為系統的調查，并對沙門氏菌耐藥性進行了抗生素敏感性實驗。結果發現該地區集約化養殖的鴨蛋內容物未檢測出沙門氏菌，蛋殼污染率顯著（p=0.01）高于內容物；農戶散養型鴨蛋蛋殼與內容物沙門氏菌污染率均較高，且二者無顯著差異。同時，農戶散養型鴨蛋沙門氏菌污染率明顯高于集約化鴨蛋。本研究共分離出8種沙門氏菌血清型，流行菌株為鼠傷寒沙門氏菌，其次為腸炎沙門氏菌、鴨沙門氏菌。分離得到的沙門氏菌對一些抗生素如青霉素類、四環素類等耐藥性較嚴重，對其余抗生素存在不同程度的耐藥性。

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Isolation，identification and drug susceptibility experimentof Salmonella from duck eggs in some parts of Sichuan

LIU Shao-wen，GUO Chun-hua，MA Xiao-long，BAIXue*，ZHANG Zheng-fan，LIW en-juan
（College of life Science and Technology，Southwest University for Nationalities，Chengdu 610041，China）

In order to understand the Salmonella spp.contam ination and d rug resistance from duck eggs w ith different rearing methods in some parts of Sichuan，the experiment detected Salmonella in eggshell and its contents w ith the national standard GB 4789.4-2010 detection method after collecting 100 duck eggs from intensive farm s（50）and farmers backyard（50），while doing serotype identification and d rug suscep tibility testing.The results showed that the contam ination rates of free-range egg shellwere 28%and contents were 30%.Meanwhile，the contam ination rates of intensive farm ing eggshellwere 24%and w ith no Salmonella in the contents of intensive farm ing egg.Serum agg lutination test detected outof 8 serotypes，S.typhimurium（34.1%）was most p revalent.Besides，S.enteritid is（22%）and S.anatum（14.6%）were higher than other strains.The 41 isolated Salmonella had high d rug resistance to Penicillin（100%），Amp icillin（87.80%），Amoxicillin（75.61%），Tetracyc line（73.17%），showed moderate sensitivity to strep tom ycin and suggested that the Salmonella had different deg rees of resistance to the rest of the antibiotics.These find ings ind icated that the Salmonella from duck eggs contam ination and d rug resistance had become more serious in Sichuan region，therefore，the ep idem iological surveillance of salmonella should be strengthened and the use of antibiotics should be regulated，too.

duck eggs；Salmonella；isolation；identification；d rug resistance

TS201.1

A

1002-0306（2015）06-0072-04

10.13386/j.issn1002-0306.2015.06.007

2014-06-23

劉少文（1990-），男，碩士研究生，研究方向：動物營養與飼料科學。

柏雪（1985-），女，在讀博士，實驗師，主要從事動物營養研究。

西南民族大學研究生創新型科研項目（CX2014SZ79）。