ELISA法和膠體金免疫層析法檢測乙肝表面抗原結果分析

李小云

【摘要】目的：分別采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法和膠體金免疫層析（GICA）法檢測乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），對比結果，探討兩種方法檢測乙肝表面抗原的應用價值。方法：分別采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法和膠體金免疫層析（GICA）法檢測768份18～65歲人群血清標本，對比乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）檢測結果。結果：膠體金免疫層析法檢測出HBsAg陽性標本42份，陽性率5.47%。ELISA法檢測出HBsAg陽性標本46份，陽性率為5.98%，兩種方法陽性檢出率差異無統計學意義（P>0.05）。兩種方法檢測的符合率為97.39%。膠體金免疫層析法的靈敏度為69.57%，特異度為98.61%。結論：膠體金免疫層析法操作簡便、快速，檢測的特異度較高，但其靈敏度有限，有待提高。

【關鍵詞】酶聯免疫吸附試驗法；膠體金免疫層析法；乙肝表面抗原

【中圖分類號】R722.12 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）03-0225-01

乙型病毒性肝炎，簡稱乙肝，是一種由乙型肝炎病毒（HBV）感染機體后所引起的疾病，是當前嚴重危害人類身體健康的傳染病。乙型病毒肝炎表面抗原（HBsAg）陽性是感染乙肝病毒的重要指標。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法是目前我國檢測乙肝HBsAg最為普及的方法，應用時間較早，而膠體金免疫層析法是近年來采用的免疫學檢測方法。本組研究資料采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法和膠體金免疫層析（GICA）法對768份18～65歲人群血清進行HBsAg檢測，并對比檢測結果?，F報告如下：

1材料與方法

1.1標本來源

抽取18～65歲人群血清768份，采集無溶血、無脂濁的靜脈血標本3～5ml，室溫靜置30min后，4000r∕min離心5min，充分分離血清待檢。

1.2儀器與試劑

乙肝五項膠體金快速檢測板由上?？迫A生物科技有限公司提供，HBsAg試紙條由藍十字生物藥業有限公司提供；ELISA檢測試劑由珠海麗珠生物科技有限公司公司提供；TDL-42A低速離心機；Unto-FLiudo全自動酶標洗板機；Unto-2010酶標儀。

1.3方法

1.3.1膠體金免疫層析法 將GICA試紙條浸入待測標本，標本不可浸沒標志線，浸入時間約為10分鐘，根據對照線位置出現的紅線條數判定結果。如對照線與檢測線間位置出現1條紅線為陰性，對照線與檢測線間位置出現2條紅線為陽性。

1.3.2酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法 于相應孔中用加樣器分別加入質控品、待檢標本及陽性、陰性對照血清，并做好標記，然后往每個孔中加入酶標抗體，混勻，置于37°C條件下1h，嚴格按照說明書經洗版、添加底物，并在37°C條件下避光15min，加終止液停止反應。使用酶標儀檢測OD值，并計算S∕CO值。若S∕CO≥1.0則表示實驗結果為陽性，若S∕CO<1.0則表示實驗結果為陰性。

1.4統計學方法

采用SPSS 17.0統計軟件分析，計數資料采用百分率表示，行χ2 檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

兩組方法檢測HBsAg的陽性率比較：共檢測768份血清標本， 兩種方法檢測HBsAg均陰性的712份，均陽性的32份，兩種方法檢測的符合率為97.39%。膠體金免疫層析法檢測出HBsAg陽性標本42份，HBsAg陽性率5.47%（42∕768）。ELISA 法檢測出HBsAg陽性標本46份，HBsAg陽性率為5.98%（46∕768），兩種方法陽性檢出率差異無統計學意義（P>0.05）。根據特異度、靈敏度計算公式，靈敏度= A / （ A + C ）×100%；特異度= D/ （ B + D）×100%。A-真陽性數，B-假陽性數，C-假陰性數，D-真陰性數。得出：膠體金免疫層析法的靈敏度為69.57%，特異度為98.61%。

ELISA法和膠體金免疫層析法檢測結果

膠體金免疫層析法 ELISA法 合計 陽性+ 陰性﹣ 陽性+ 32 10 42陰性﹣ 14 712 726合計 46 722 7683討論

乙肝病毒性肝炎是嚴重危害人體健康的一種病毒性肝炎，由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起，血液、性接觸、日常生活接觸和母-嬰垂直傳播是HBV傳播的主要方式。1965年Biumberg等首次發現乙型肝炎病毒（HBV）的表面抗原（HBsAg），其現已成為HBV感染的重要標志，可作為乙肝病毒性肝炎的重要診斷依據。目前實驗室檢測乙肝HBsAg的方法有很多，如化學發光微粒子免疫分析法（CMIA）、熒光定量聚合酶鏈反應法（FQ-PCR）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、膠體金免疫層析（GICA）法等。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法是目前我國檢測乙肝HBsAg最為普及的方法，其主要是在液相中經擴散作用，逐漸與固相表面的抗體結合，同時標記抗體也需要此過程形成抗體-抗原-標記抗體復合物，此外還需要洗滌過程和顯色反應[1]。其靈敏性和特異性較高，結果可靠，但其操作程序較繁瑣復雜，檢測所需要的時間較長。膠體金免疫層析法是近年來出現的一種免疫學標記物檢測新技術，這種檢測技術不需要儀器，高濃度的抗體集中固定在纖維素的微孔中，待測抗原流經微孔與固定的抗原接觸很快完成反應，檢測所需要的時間較短，操作簡單便捷，有較高的特異度，尤其適用于基層醫療衛生單位。但由于反應時間短，會造成弱陽性的漏檢。本組研究資料分別采用酶聯免疫吸附試驗法和膠體金免疫層析法檢測乙肝表面抗原，兩種方法檢測出的HBsAg陽性率分別為5.98%、5.47%，差異無統計學意義（P>0.05）。膠體金免疫層析法的靈敏度和特異度分別為69.57%、98.61%。綜上所述，膠體金免疫層析法檢測乙肝表面抗原操作簡便快捷，檢測的特異度高，但其靈敏度還有待提高。

參考文獻

[1]高麗，付鴻，李慧，等.膠體金試紙法與酶聯免疫吸附試驗檢測乙型肝炎病毒表面抗原的比較[J].中國計劃免疫.2007，13（1）：51-53