晚期結腸癌組織中ERCC1和BRCA1的表達與奧沙利鉑方案化療療效及預后的關系

蘇偉民

晚期結腸癌組織中ERCC1和BRCA1的表達與奧沙利鉑方案化療療效及預后的關系

蘇偉民

目的探討晚期結腸癌組織中ERCC1和BRCA1的表達與奧沙利鉑方案化療療效及預后的關系。方法選取晚期結腸癌患者68例，采用mFOLFOX6方案進行化療4個周期以上。分別檢測患者結腸癌組織中切除修復交叉互補基因1(ERCC1)蛋白和乳腺癌易感基因1(BRCA1)蛋白的表達。分析ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達的相關性;分別對比ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者的化療總有效率;對比ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者的2年生存率和中位生存期。結果ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達呈正相關(r=0.208，P＜0.05);ERCC1蛋白表達陰性患者化療總有效率為60.00%，顯著高于ERCC1蛋白表達陽性患者的總有效率(32.14%)，P＜0.05;ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均陰性患者化療總有效率為60.00%，顯著高于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均陽性患者的總有效率(29.41%)，P＜0.05;ERCC1蛋白表達陰性患者的2年生存率顯著高于ERCC1蛋白表達陽性的患者(P＜0.05);ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陰性患者的2年生存率顯著高于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陽性的患者(P＜0.05)。結論晚期結腸癌患者ERCC1蛋白和BRCA1蛋白的表達可影響奧沙利鉑方案化療療效，并可為臨床評估患者的預后提供重要的參考依據。

晚期結腸癌;ERCC1;BRCA1;奧沙利鉑;療效;預后

結腸癌是發病率和死亡率均較高的消化系統惡性腫瘤，由于腫瘤早期無特異性的臨床癥狀，多數患者在腫瘤的中晚期才獲得確診，治療難度大，預后較差［1］。早期腫瘤可通過根治性切除術清除腫瘤病灶，甚至徹底治愈疾病。對于中晚期惡性腫瘤，化療成為主要的治療措施。FOLFOX方案是結腸癌常用的化療方案，而奧沙利鉑是其中主要的組成藥物。臨床研究顯示，切除修復交叉互補基因1(ERCC1)和乳腺癌易感基因1(BRCA1)可修復奧沙利鉑所致的腫瘤細胞DNA損傷，從而導致腫瘤細胞對奧沙利鉑的抗腫瘤作用耐藥［2-3］。明確腫瘤細胞對鉑類藥物的耐藥機制可為臨床制定化療方案提供依據，同時也有助于評估患者的預后。本研究探討晚期結腸癌組織中ERCC1和BRCA1的表達與奧沙利鉑方案化療療效及預后的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取自2012年1月-2014年1月期間我院收治的晚期結腸癌患者68例。其中男42例，女26例;年齡31～80歲，平均(57.18±14.05)歲。所有患者均經活組織病理學檢查獲得確診，其中44例為腺癌，15例為粘液腺癌，7例為印戒細胞癌，1例為腺鱗癌，1例為鱗癌。體力狀態評分(PS評分)0～2分，平均PS評分為(1.37±0.24)分。

1.2 納入和排除標準

參照美國國家綜合癌癥網絡(NCCN)發布的《NCCN結腸癌臨床診療指南》［4］進行診斷。所有患者均經過電子結腸鏡檢查，結合其臨床癥狀、體征以及活組織病理檢查，明確結腸癌的臨床診斷，且均屬于腫瘤TNM分期Ⅳ期。同時排除合并其他惡性腫瘤、急性心腦血管事件、嚴重肝腎功能衰竭等嚴重疾病影響患者預后評估的患者;排除已經接受其他化療方案治療的患者;排除未能完成本研究化療方案治療的患者;排除具有手術切除指征以及預期生存時間＜3個月的患者;排除臨床資料不完整，影響本研究統計學分析的患者。

1.3 化療方案

采用mFOLFOX6方案進行化療。第1天采用注射用奧沙利鉑(恒瑞醫藥股份有限公司生產，國藥準字 H20040817)靜脈滴注2 h，使用劑量為85mg/m2;注射用亞葉酸鈣(揚子江藥業集團海瑞藥業有限公司生產，國藥準字H20073593)靜脈滴注2 h，使用劑量為400mg/m2;注射用5-氟尿嘧啶(海欣制藥有限公司生產，國藥準字H20050511)靜脈推注，然后再持續靜脈滴注，劑量為2400mg/m2，維持46 h。14 d后在重復上述方案。所有患者均接受4個周期以上的化療，完成化療后進行相關指標的觀察。

1.4 ERCC1蛋白、BRCA1蛋白的檢測

所有患者均留取腫瘤組織標本檢測ERCC1蛋白、BRCA1蛋白的水平。先用4%的甲醛固定腫瘤組織標本，隨后經脫水、石蠟包埋后，制成厚度為4μm的石蠟組織切片。切片制作完成后，經脫蠟、水化和抗原修復后，在室溫下以3%的過氧化氫溶液孵育后，以磷酸鹽緩沖液沖洗。將鼠抗人ERCC1或者BRCA1單克隆抗體稀釋100倍后，滴入標本中。然后在室溫下培育，采用磷酸鹽緩沖液沖洗，二氨基聯苯胺顯色以及蘇木精對比染色。最后以梯度酒精脫水，二甲苯透明和中性樹脂封片。完成后在顯微鏡下觀察獲得結果。陰性對照為磷酸鹽緩沖液代替一抗。顯微鏡下觀察到細胞核中有棕黃色著色的顆粒為陽性細胞。檢測結果根據標本的染色強度以及陽性細胞所占的百分比進行評分。0分:腫瘤細胞無著色，1分:腫瘤細胞有淡黃色著色;2分:腫瘤細胞有棕黃色著色;3分:腫瘤細胞有深棕色著色。0分:陽性細胞的構成比＜5%;1分:陽性細胞的構成比≥5%而＜25%;2分:陽性細胞的構成比≥25%而＜50%;3分:陽性細胞的構成比≥50%而＜75%;4分:陽性細胞的構成比≥75%。兩個評分結果的乘積為最終的評分結果，評分結果≥2判定為蛋白表達陽性，否則為陰性。

1.5 療效評價標準

參照實體瘤療效評價標準［5］，完全緩解(CR):經過治療后，所有病灶被清除，且腫瘤標志物正常;部分緩解(PR):經過治療后，病灶長徑總和較治療前縮小≥30%;疾病穩定(SD):經過治療后，病灶長徑總和較治療前縮?。?0%或增加＜20%，腫瘤標志物異常;疾病進展(PD):經過治療后，病灶長徑總和較治療前增加≥20%或出現新病灶?？傆行蕿镃R、PR的構成比例之和。

1.6 觀察指標

分析ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達的相關性;分別對比ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者的化療總有效率;對比ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者的2年生存率和中位生存期。

1.7 統計學分析

采用統計學軟件SPSS17.0進行統計學處理。ERCC1和BRCA1表達的相關性采用Spearmen秩相關分析;采用Kaplan-Meier生存曲線進行生存分析，組間差異采用Logrank法檢驗，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 研究結果

2.1 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達的相關性分析

ERCC1蛋白表達陽性的有28例，陽性率為22.76%;BRCA1蛋白表達陽性的有32例，陽性率為26.02%;ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均陽性的有17例，陽性率為13.82%。Spearmen秩相關分析結果顯示，ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達呈正相關(r=0.208，P＜0.05)，見表1。

表1 ERCC1和BRCA1表達的相關性分析

2.2 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者總有效率的對比

ERCC1蛋白表達陰性患者化療總有效率為60.00%，顯著高于ERCC1蛋白表達陽性患者的總有效率(32.14%)，P＜0.05;BRCA1蛋白表達陰性患者化療總有效率為58.33%，高于BRCA1蛋白表達陽性患者的總有效率(37.50%)，但差異沒有統計學意義(P＞0.05);ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均陰性患者化療總有效率為60.00%，顯著高于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均陽性患者的總有效率(29.41%)，P＜0.05，見表2。

表2 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者總有效率的對比 n(%)

2.3 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性和陰性患者的生存分析

ERCC1蛋白表達陽性患者的中位生存期為13個月(95%CI為10.518～15.506)，2年生存率為20.3%，ERCC1蛋白表達陰性患者的中位生存期為19個月(95%CI為12.529～25.458)，2年生存率為41.9%。ERCC1蛋白表達陰性患者的2年生存率顯著高于ERCC1蛋白表達陰性的患者(P＜0.05); BRCA1蛋白表達陽性患者的中位生存期為14個月(95%CI為11.508～16.512)，2年生存率為28.1%，BRCA1蛋白表達陰性患者的中位生存期為18個月(95%CI為12.754～23.235)，2年生存率為37.5%。ERCC1蛋白表達陰性和陽性患者的2年生存率對比，差異沒有統計學意義(P＞0.05);ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陽性患者的中位生存期為12個月(95%CI為9.591～14.396)，2年生存率為16.9%，ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陰性患者的中位生存期為19個月(95%CI為9.732～28.268)，2年生存率為43.1%。ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陰性患者的2年生存率顯著高于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陽性的患者(P＜0.05)。

3 討論

奧沙利鉑是結腸癌化療方案中的常用藥物，其抗腫瘤機制主要是通過與細胞 DNA結合，抑制DNA的生成而發生細胞毒性和抗腫瘤作用［6］。然而，近年來的研究顯示，腫瘤細胞對鉑類藥物的抗腫瘤作用產生耐藥現象，其中ERCC1和BRCA1表達的情況與腫瘤細胞對鉑類藥物的耐藥現象有關［7］。因此，進一步研究ERCC1和BRCA1的表達與奧沙利鉑方案化療療效和預后的關系對晚期結腸癌的臨床治療有重要的指導意義。

臨床研究已經證實，對于非小細胞肺癌、卵巢癌等患者，BRCA1表達水平的下調可增加腫瘤細胞對鉑類藥物的敏感性，進而提高化療效果，改善患者的預后［8-9］。但是關于結腸癌患者ERCC1和BRCA1的表達對化療療效和患者預后的影響，目前的臨床研究較少，也尚未獲得一致的結論。本研究的結果顯示，晚期結腸癌組織中ERCC1蛋白和BRCA1蛋白的表達呈正相關關系，且ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陰性患者的化療療效顯著優于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表達陽性的患者。這一結論提示了ERCC1和BRCA1的表達可影響奧沙利鉑方案的化療療效。奧沙利鉑可與細胞DNA結合成鉑DNA加合物，引起鏈內或鏈間交聯而損傷DNA，進而引起腫瘤細胞的凋亡［10］。因此，DNA損傷是奧沙利鉑發揮抗腫瘤作用的核心。ERCC1、BRCA1是機體核苷酸切除修復系統的關鍵基因。ERCC1蛋白通過與DNA修復酶缺乏互補基因F結合，可識別鉑類化合物并將其切除，從而修復DNA損傷。因此ERCC1表達的上調可增強DNA損傷修復能力，削弱奧沙利鉑的抗腫瘤作用［11］。BRCA1蛋白同樣具有修復DNA雙鏈斷裂損傷的作用［12］。在本研究中，ERCC1蛋白表達陽性患者的2年生存率顯著低于ERCC1蛋白表達陰性的患者，同時 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陽性患者的2年生存率也顯著低于ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陰性的患者。這說明ERCC1蛋白和BRCA1蛋白均表達陽性可影響患者的預后。田丹等［13］的研究也觀察到，ERCC1蛋白表達陰性的結腸癌患者無病生存時間更長，使用奧沙利鉑方案的化療效果更好。

綜上所述，晚期結腸癌患者 ERCC1蛋白和BRCA1蛋白的表達可影響奧沙利鉑方案化療療效，并可為臨床評估患者的預后提供重要的參考依據。

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R735.3+5;R730.53

:Adoi:10.3969/j.issn.1671-332X.2016.08.005

蘇偉民:普寧市人民醫院 廣東普寧 515300