系統性紅斑狼瘡患者血清白細胞介素-1家族及白細胞介素-34水平

鄔秀娣，湯亞微，孫曉彤，王　冰，王苗苗，李　霞

(大連醫科大學基礎醫學院免疫學系，遼寧大連 116044)

系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是體液和細胞免疫功能異常所造成的多器官受累的自身免疫性疾病，其主要特征為淋巴細胞異?；罨?，免疫調節功能紊亂及多種自身抗體產生[1]。其發病機制尚不明確，但大量研究表明，細胞因子在SLE發病過程中起著重要作用。

白細胞介素(interleukin，IL)-1家族主要包括IL-α、IL-β、IL-Ra(receptor antagonist，受體拮抗劑)、IL-18、IL-36Ra、IL-36α、IL-37、IL-36β、IL-36γ、IL-38、IL-33，其中致炎性細胞因子有IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-33、IL-36α、IL-36β、IL-36γ，抑炎性細胞因子有IL-Ra、IL-36Ra、IL-37、IL-38。IL-34是一類新發現的細胞因子，可促進破骨細胞分化，也可促進人全血細胞分泌IL- 6以及趨化因子[2]。本研究通過檢測SLE患者與正常對照者血清IL-1家族成員及IL-34水平，初步探討細胞因子異常分泌對SLE疾病的影響。

對象與方法

對象

選取2014年2月至8月大連醫科大學附屬第二醫院及寧波市第二醫院就診的SLE患者，診斷均符合1997年美國風濕病協會(American College of Rheumatology，ACR)制定的SLE分類標準[1]，排除感染、腫瘤及其他自身免疫性疾病。正常對照組均來自醫院體檢中心的健康人群，無風濕病史和風濕病家族史。

方法

所有受檢者晨起抽取靜脈血4 ml，離心后取上清，標本放置-20 ℃保存待測。采用蛋白芯片AAH-CYT G1000試劑盒(美國Raybiotech公司)檢測SLE組及正常對照組血清IL-1家族成員水平，具體操作按說明書進行。用激光掃描儀InnoScan300 Microarray Scanner(31390Carbonne-France)進行信號掃描，并采用AAH-CYT-G6，AAH-CYT-G7數據分析軟件進行數據分析。應用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清IL-34水平(美國Bio-Legend公司，試劑盒靈敏度為33.4 pg/ml)，酶標分析儀為BioTek ELX-800。具體操作按說明書進行。

統計學處理

結　　果

一般資料

選取6例女性SLE患者均為初發或復發患者，年齡23～42歲，平均年齡(31.67±6.53)歲；所有患者近3個月內使用糖皮質激素劑量均≤10 mg/d，除2例患者使用硫酸羥氯喹0.2 g/d，余均未使用其他免疫抑制類藥物(表1)。同時選取6名女性正常對照組，年齡20～38歲，平均年齡(28.25±6.23)歲，進行血清IL-1家族成員水平檢測，兩組年齡、性別比較差異均無統計學意義(均P>0.05)。選取67例SLE患者，其中女61例，男6例；年齡14～52歲，平均年齡(35.1±10.6)歲；病程1～241個月，平均42.3個月。正常對照組86名，女78名，男8名，年齡20～57歲，平均年齡(39.8±13.2)歲；進行血清IL-34水平的檢測，兩組年齡、性別比較差異均無統計學意義(均P>0.05)。本研究得到大連醫科大學附屬第二醫院及寧波市第二醫院倫理委員會支持，所有參與者均簽訂知情同意書。

SLE組血清IL-1家族成員水平

利用蛋白芯片技術檢測6例SLE患者和6名正常對照者血清IL-1家族成員水平，結果發現與正常對照組相比，SLE組血清IL-18、IL-36β水平明顯增高，IL-36Ra水平降低，兩組比較差異均有統計學意義(均P<0.05)(表2，圖1)。

SLE組血清IL-34水平

采用ELISA方法測定67例SLE患者和86名正常對照者血清IL-34水平，結果顯示SLE組血清IL-34水平明顯高于正常對照組，兩組比較差異有統計學意義[(100.36±70.38) pg/mlvs.(41.90±6.89) pg/ml，t=6.774,P<0.000 1](圖2)。

表1　6例檢測IL-1家族細胞因子的SLE患者臨床資料Table 1　Baseline characteristics of the 6SLE patients with IL-1 family deteetion

SLE:系統性紅斑狼瘡； CRP:C反應蛋白

表2　SLE組與正常對照組血清IL-1家族成員水平比較Table 2　Comparison of the serum IL-1 level between SLE group and control group　ml)

SLE:系統性紅斑狼瘡； *與正常對照組相比，P<0.05

圖2SLE組與正常對照組血清IL-34水平分析

Fig2Compavsion of the serum IL-34 level betwrrn SLE group and control group

SLE：系統性紅斑狼瘡;IL-34：白細胞介素-34

討　　論

細胞因子具有多種免疫調節功能，當其分泌異常時，導致機體免疫功能失調，誘發自身免疫性疾病。近年來大量研究表明，SLE發病過程中可能有復雜的細胞因子網絡參與其中，很多細胞因子促進自身反應性T、B細胞活化、產生大量的自身抗體，使免疫穩態遭到破壞，最終導致細胞和組織損傷[1]。

IL-1家族包括IL-1、IL-18和IL-36三個亞家族，IL-1α、IL-1β、IL-Ra是IL-1家族中最早發現的細胞因子。IL-1α、IL-1β主要由活化的單核-巨噬細胞分泌，對炎性部位的持續性細胞浸潤和誘導組織破壞起著直接的作用，是骨質吸收和骨質破壞的主要細胞因子[3]。IL-Ra是IL-1受體拮抗劑，主要由單核細胞產生，通過競爭性與IL-1受體結合抑制IL-1功能[4]。IL-18是IL-1家族另一細胞因子，主要由巨噬細胞、T、B淋巴細胞及樹突狀細胞產生?？烧T導IFN-γ分泌，選擇性刺激Th1細胞的分化[5]。Novick等[6]發現，SLE患者血清結合IL-18和游離IL-18水平均升高；與本研究結果相一致。然而本研究沒有檢測到SLE患者血清IL-1α、IL-1β、IL-Ra水平變化。

IL-36是IL-1家族新發現的細胞因子，包括IL-36α、IL-36β、IL-36γ，可由單核細胞、T淋巴細胞、角質細胞等多種細胞產生。IL-36通過與其受體相互結合，促進樹突狀細胞與輔助性T細胞的活化及促炎因子的分泌等。Debets等[7]研究顯示，在銀屑病受損的皮膚中，IL-36α、IL-36β、IL-36γ mRNA表達增加；類風濕關節炎(rheumatoid arthritis，RA)滑膜成纖維細胞和軟骨細胞均表達IL-36受體，IL-36β通過與IL-36受體結合誘導炎性分子產生，參與類風濕關節炎發病[8]。本研究，發現SLE組血清IL-36β水平明顯增加，進一步證實IL-36在自身免疫性疾病中發揮重要作用。IL-36Ra是IL-36受體拮抗劑，可由單核細胞、B淋巴細胞、樹突狀細胞等產生，能夠與IL-36受體結合，抑制IL-36功能[9]。本試驗檢測到SLE組血清IL-36Ra水平下降，提示其在SLE中可能發揮抑炎作用。

IL-33、IL-37、IL-38是IL-1家族中另外三個細胞因子。IL-33表達于上皮細胞、內皮細胞和嗜酸粒細胞，在炎癥因子刺激下表達增多[10]。有研究發現，IL-33能使肥大細胞表達IL-1、IL- 6、IL-11等炎性因子，促進膠原誘導性關節炎小鼠的滑膜炎癥[11]。IL-37主要由中性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等表達，是一種具有抑制炎癥作用的細胞因子[12]。研究表明，SLE患者血清IL-37水平升高，IL-37作為炎癥反應的抑制劑，可能通過負反饋機制抑制SLE患者炎癥的過度表達[13]。IL-38主要表達于B細胞，與IL-36Ra相似，通過特異性結合細胞表面特定的IL-36受體而抑制IL-17和IL-22的產生，從而在炎癥反應過程中發揮抑制性作用[9]。然而，本試驗結果未顯示SLE患者血清IL-33、IL-37、IL-38這三種細胞因子水平的變化。

IL-34是2008年發現的細胞因子，主要表達于單核巨噬細胞、成纖維細胞、小神經膠質細胞[14]。IL-34能促進單核-巨噬細胞增殖與分化，誘導多種細胞因子和趨化因子表達，具有促炎、促進破骨細胞形成以及神經保護的作用[15-16]。有研究表明，RA患者滑膜成纖維細胞可表達IL-34，并與滑膜炎的嚴重程度相關，而TNF-α和IL-1β可通過NF-κB和JNK通路進一步上調IL-34基因表達水平，提示IL-34在RA發病中起到一定的作用，并與免疫炎癥反應相關[17]。本研究發現，SLE組血清IL-34水平明顯升高，進一步提示與免疫炎癥反應有關。

綜上，本研究初步分析了SLE患者血清IL-1家族成員和IL-34的水平變化，但本研究存在不足：(1)由于用于IL-1家族細胞因子檢測的標本數量較少，試驗數據有限，部分結果未測出差異或者與文獻不一致，今后需要大樣本數據的驗證。(2)用于檢測IL-34的SLE患者并非都是初發患者，患者病情變化和用藥情況可能會影響試驗結果，在后續研究中，應詳細分析SLE血清IL-34水平與臨床和實驗室指標的關系。另外，對這些細胞因子在SLE發病中的具體作用機制仍需更深入的研究與探討。

(本文圖1見插頁Ⅱ)

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