P53、MDR-1基因在中老年食管癌患者中的表達及臨床運用分析

鐘亞莉,劉　超,趙治國　(河南省鄭州大學第二附屬醫院消化內科,河南 鄭州 450017)

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P53、MDR-1基因在中老年食管癌患者中的表達及臨床運用分析

鐘亞莉,劉超,趙治國(河南省鄭州大學第二附屬醫院消化內科,河南 鄭州 450017)

【摘要】目的：探究P53、MDR-1基因在中老年食管癌患者中的表達及臨床意義. 方法：選取鄭州大學第二附屬醫院與安陽腫瘤醫院共同收治的120例食管癌患者作為研究對象，對其血清P53基因，以及癌組織中P53蛋白及MDR-1基因進行檢測，并對P53基因表達與患者放化療預后的相關性進行分析. 結果：P53基因mRNA陽性45例，表達量為0.43±0.12；陰性75例，表達量為0.09±0.03. P53 mRNA表達陽性組其MDR-1基因陽性例數為41例，陰性組其MDR-1基因的表達為65例；表達陰性組其治療有效率明顯高于陽性組，差異具有統計學意義(P<0.05). 結論：P53、MDR-1基因的表達與食管癌患者治療預后有明顯的相關性.

【關鍵詞】P53基因;MDR-1基因;預后;食管癌

0引言

食管癌作為常見的消化系統腫瘤，其發生是由多階段、多因素構成的，主要涉及到多種基因的一次表達等[1]. 其分子生物學研究表明細胞增殖活動明顯異常、腫瘤基因以及抑癌基因的異常表達等在食管癌的發病過程中均發揮著重要的作用. P53基因作為參與腫瘤發生發展的基因，也參與了其他基因的轉錄，繼而達到抑制細胞增殖和對損傷的細胞進行修復等作用. P53基因的缺陷可能與人體細胞的異常增殖有關聯. 研究[2]表明，P53基因的無效突變可導致出現一種頂端短缺的相關蛋白，該蛋白無法與DNA結合，故無法發揮其修復損傷的特性，同時該無效突變可降低癌細胞對化療藥物的敏感性，繼而導致癌細胞產生對抗腫瘤藥物的抗藥性. 本研究中對老年食管癌患者的食管癌組織以及癌旁組織進行P53以及MDR-1基因檢測并探究其臨床意義，現報道如下.

1資料和方法

1.1一般資料選取鄭州大學第二附屬醫院與安陽腫瘤醫院2009-01/2013-01共同收治的食管癌患者329例作為研究對象，取其胃鏡活檢標本蠟塊進行常規石蠟包埋后行HE染色提示均為鱗癌. 患者年齡>45歲，KPS評分>70分，腫瘤病變長度<8 cm，且無鎖骨上淋巴結或其他淋巴結轉移，無食管穿孔征象，患者可進食流食，無聲帶麻痹，無胸部放療史且無其他惡性疾病. 符合以上要求患者120例，其中男76例，女44例，年齡45～76(平均67.6±12.2)歲，病變部位位于胸下段11例，胸中段89例，胸上段20例，分化程度為低分化38例，中分化45例，高分化37例. 病理類型分析，其中髓質型65例，蕈傘型31例，縮窄型4例及潰瘍型20例. 所有患者在接受治療前均進行心電圖、血常規、肝腎功能以及腹部B超、胸部X光、食管左右前斜位檢查等. 經患者及其家屬同意，醫院倫理委員會批準后進行本研究.

1.2方法

1.2.1P53基因表達的檢測患者于入院第二天空腹取靜脈血2 mL，采用Trizol液提取法對總RNA進行提取，所提取的總RNA必須在收樣后4 h內完成所有操作，然后采用RT-PCR方法對外周血白細胞中的P53基因的相關mRNA的表達情況進行分析，逆轉錄試劑盒為美國Fermentas公司產品，引物購自生工生物工程有限公司，P53 F:5’-GTTTCCGTCTGGGGTTCTTG-3’,R:5’CACAACCTGCGTCATGTGCT-3’;GAPDH:F:5’ACAGTCAGCCGGATCTTGTTT-3’,R:5’-CCATCACGGCACAGTTTCC-3’;取PCR反應產物在電泳槽中進行電泳分析，而后采用凝膠成像系統對目的條帶進行觀察并分析其灰度值，P53基因的相對表達量為P53和GAPDH的灰度比值.

1.2.2P53蛋白的檢測對所有檢測蛋白均采用免疫組化ABC法進行檢測，其中試劑盒均采用Maxim Biotech的相關產品，如免疫組化單克隆抗體、免疫組化SP試劑盒等，并采用PBS代替一抗進行陰性對照試驗. 根據P53的著色強度進行評價：強陽性：組織細胞染色深或陽性細胞達到50%以上；中度陽性：組織細胞染色適中或陽性細胞達到20%～50%；弱陽性：組織細胞染色淺或陽性細胞低于20%；陰性：組織細胞無染色，或未見陽性細胞.

1.2.3MDR-1基因的檢測總RNA提取運用異硫氰酸胍一步法，其下游引物為5’-GTTCAACTTCTGCTCCTGA-3’，上游引物為5’-CCCATCATTGCAATAGCGG-3’,采用RT-PCR進行逆轉錄，而后進行電泳，并在紫外透射儀下進行電泳帶的檢測.

1.2.4治療方案對患者進行三維適形放療，采用6MV-X線，每次放療劑量為1.8～2.0 Gy，每周5次，放療總劑量為60～70 Gy. 在放療過程中，將食管原發病灶、縱膈、食管旁、鎖骨上區淋巴結以及淋巴結預防放射區作為放射野，對于有遠處轉移的患者，如骨轉移或腦轉移的患者，則給予轉移病灶劑量30 Gy/10次. 放療中給予患者同步的氟尿嘧啶聯合順鉑化療方案進行治療，每4周重復一次.

1.3療效判斷標準根據WHO腫瘤治療評價標準進行療效評價，分為完全緩解、部分緩解、穩定及進展，其中完全緩解和部分緩解代表治療有效.

1.4統計學處理采用SPSS14.0統計學軟件對數據進行分析，計數資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，P<0.05表示差異具有統計學意義.

2結果

2.1患者外周血白細胞中P53基因mRNA的表達情況外周血白細胞P53 mRNA陽性組45例，其中P53 mRNA的表達量為0.43±0.12；P53 mRNA陰性組75例，P53 mRNA表達量為0.09±0.03，兩組比較,差異具有統計學意義(P<0.05).

2.2P53 mRNA表達陽性組及陰性組其P53蛋白在食管癌組織中的表達情況陽性組其P53蛋白在食管癌組織中表達陽性率明顯高于陰性組,差異具有統計學意義(P<0.05,表1).

表1P53 mRNA表達情況與食管癌組織中P53蛋白表達的相關性分析

組別n強陽性中度陽性弱陽性陰性陽性率(%)陽性組4534920100a陰性組751576217.3

aP<0.05vs陰性組.

2.3P53 mRNA表達陽性組及陰性組其MDR-1基因的表達情況P53 mRNA表達陽性組其MDR-1基因陽性41例，陰性組其MDR-1基因的表達65例，P53 mRNA表達與MDR-1基因的表達有明顯的正相關性(P<0.05).

2.4 P53 mRNA表達與患者預后的相關性分析P53 mRNA表達陽性組其治療有效率明顯低于陰性組，差異具有統計學意義(P<0.05,表2).

表2兩組患者治療預后比較

組別n完全緩解部分緩解穩定進展治療有效率(%)陽性組45311191231.1a陰性組75134515277.3

aP<0.05vs陰性組.

3討論

現階段食管癌的發病率出現明顯上升的趨勢，臨床發現時多為晚期患者，這類患者由于缺乏手術治療的機會，故主要進行放化療治療[3]. 隨著腫瘤分子生物學的發展，關于腫瘤基因的表達對預后影響的相關性的研究越來越受到關注. 現階段已發現部分腫瘤抑制基因以及癌基因的異?？赡軐δ[瘤細胞的凋亡以及放療的敏感性產生影響. 張培龍等[4]研究發現細胞周期的變化可能與腫瘤放療的敏感性有明顯的相關性，大部分細胞在G期對放療具有較強的抵抗作用，最敏感時期則為G/S交界期，其DNA切除修復細胞的能力在適當劑量的放療后出現明顯的降低，繼而表現出細胞的凋亡. 而在細胞進入S期后，放化療的敏感性又開始降低，敏感性最低為S晚期，而當進入G/M期時腫瘤細胞對放療的敏感性又開始增加，故參加細胞調節的基因產物均可能與腫瘤細胞的放療敏感性有一定的相關性[5].

P53基因和人類腫瘤的發生發展有明顯的相關性. 作為一種重要的抑癌基因，其編碼的53KD蛋白在細胞周期過程中發揮著重要的作用，正常情況下具有抑制腫瘤生長的作用，但當該基因發生缺失或突變時反而會促進腫瘤的發生發展[6]. P53基因的缺失可導致如乳腺癌、骨癌、惡性肉瘤等腫瘤的發生. 腫瘤對放療的敏感性與P53基因有一定的相關性. P53作為細胞周期調控的負向因子，參與了腫瘤細胞的發生和發展過程，由于P53基因的表達蛋白可將腫瘤細胞停滯在C/G期，從而抑制腫瘤細胞的生長發展，當P53發生缺失或突變時，則會導致惡性腫瘤的增殖和生長[7]. 現階段圍繞P53基因與惡性腫瘤放療的相關性展開的研究較少，有研究[8-9]表明，當惡性腫瘤發生P53缺失或突變時，會使CDK4的活性不能得到有效抑制，從而不能有效的將細胞周期由G期進展到S期進行抑制，繼而導致腫瘤細胞的增殖. MDR-1基因作為現階段研究最為廣泛的多藥耐藥性基因，其編碼的P-gP作為腫瘤細胞的耐藥膜蛋白，其高表達與腫瘤的耐藥性有明顯的相關性[10]. 通過對P53、MDR-1基因在食管癌患者中的表達的研究，分析P53表達與食管癌患者放化療之間的相關性，繼而為非手術食管癌患者的臨床治療提供參考. 結果顯示，對于失去手術機會的中晚期食管癌患者，其外周血中存在P53 mRNA表達，且MDR-1基因與P53 mRNA的表達有明顯的相關性，故我們認為P53基因與食管癌的發生發展有一定的相關性. 在對食管癌患者放化療治療預后的分析發現，P53 mRNA表達性組對放化療的預后明顯優于P53 mRNA表達陽性組. 本研究提示MDR-1基因與P53 mRNA在外周血及癌組織中均表現出高表達水平，且P53 mRNA的突變早于腫瘤組織中形態的改變. 我們進一步認為食管癌放化療的敏感性與P53 mRNA是否過度表達有明顯的相關性，故對食管癌患者進行P53及MDR-1基因的檢測有助于指導臨床治療方案的制定.

綜上所述，對于外周血P53基因高表達的患者，應當給予結合P53相關基因的放化療方案進行治療，以提高患者的臨床預后. 但由于本研究的樣本量較少，可能導致研究具有一定的偏倚，故需進一步加大樣本量多中心的進行探究.

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Expression and clinical application analysis of P53, MDR-1 gene in elderly patients with esophageal cancer

ZHONGYa-Li,LIUChao,ZHAOZhi-Guo

Department of Gastroenterology, Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450017,China

【Abstract】AIM: To explore the expression and clinical significance of P53, MDR-1 gene in elderly patients with esophageal cancer. METHODS: A total of 120 patients with esophageal cancer were selected as research objects. Their serum P53 gene were detected as well as the P53 protein and MDR-1 gene in cancer tissue. The correlation between P53 gene expression and prognosis after chemoradiotherapy in patients were analyzed. RESULTS: P53 gene mRNA-positive in 45 cases, with the expression level of 0.43 ± 0.12; 75 cases of negative expression, with the expression level of 0.09±0.03; 41 MDR-1 gene positive cases in P53mRNA-positive group, 65 MDR-1 expression positive cases in P53mRNA-negative group. Negative expression group had significantly higher efficiency of treatment (P<0.05). CONCLUSION: There is a significant interaction between expression of P53 and MDR-1 gene and prognosis of esophageal cancer patients.

【Keywords】P53 gene;MDR-1 gene;prognosis;esophageal cancer

【中圖分類號】R735.1

【文獻標識碼】A

作者簡介：鐘亞莉. 碩士,主治醫師. 研究方向:消化道腫瘤. E-mail: 2639554951@qq.com

收稿日期：2015-11-29；接受日期：2015-12-16

文章編號：2095-6894(2016)01-12-03

·基礎與轉化醫學·