益氣養陰通絡法對兔腹主動脈內膜剝脫術后內皮功能的影響*

王奎英　劉彤　楊鶯△（1.遼寧中醫藥大學，遼寧　沈陽　11002；2.遼寧省沈陽市中醫院，遼寧　沈陽　11004；.遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧　沈陽　11002）

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益氣養陰通絡法對兔腹主動脈內膜剝脫術后內皮功能的影響*

王奎英1，2劉彤3楊鶯3△
（1.遼寧中醫藥大學，遼寧沈陽110032；2.遼寧省沈陽市中醫院，遼寧沈陽110034；3.遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧沈陽110032）

【摘要】目的探討具有益氣養陰通絡功效的通脈顆粒防治經皮冠狀動脈介入治療（PCI）術后再狹窄的可行性。方法將48只新西蘭大耳兔按照隨機數字表法分為正常組、模型組、通脈顆粒組（中藥組）、阿托伐他汀組（西藥組），各12只。正常組未經手術及用藥，模型組、中藥組、西藥組用球囊導管剝脫兔腹主動脈內膜行手術造模。模型組術前及術后未用藥；中藥組于術前1 d開始給予通脈顆粒灌胃給藥，連續用藥3周；西藥組于術前1 d開始給予阿托伐他汀口服，連續用藥3周。3周后采血檢測內皮素（ET-1），一氧化氮（NO）；Western方法檢測兔腹主動脈血管內皮生長因子（VEGF）、成纖維細胞生長因子（bFGF）、轉化生長因子（TGF）-β1蛋白表達。結果中藥組和西藥組可明顯增加血漿NO，降低ET-1；中藥組、西藥組可增加VEGF蛋白表達，減少bFGF、TGF-β1蛋白表達（均P＜0.05）。結論通脈顆粒能夠促進損傷血管內皮細胞生長及內膜修復，其機制可能與降低血漿ET-1，升高血漿NO，增加VEGF，減少bFGF、TGF-β1蛋白表達有關，初步具有防治PIC術后再狹窄的作用。

【關鍵詞】通脈顆粒PCI內皮素一氧化氮VEGF bFGF TGF-β1內膜修復

當今冠心病已嚴重威脅人類健康，經皮腔內冠狀動脈介入術（PCI）成為冠心病的主要治療方法之一，但術后再狹窄問題嚴重影響遠期療效［1］，經皮冠狀動脈腔內成形術（PTCA）治療后約30%患者發生再狹窄［2］。金屬裸支架（BMS）植入術后再狹窄率較高，雖然藥物支架（DES）能夠降低患者再狹窄率［2-3］，但是仍然不能徹底解決PCI術后再狹窄的發生。防治支架內再狹窄（ISR）是目前醫學界亟待解決的棘手問題和熱點問題。冠心病PCI術后再狹窄屬于中醫學“胸痹心痛”的范疇，“氣陰兩虛、心血瘀阻”為其病機之一［4］，中醫防治冠心病PCI術后再狹窄多以益氣活血化瘀中藥為主，臨床觀察亦證明療效顯著，因此中醫藥在預防和治療PCI術后再狹窄方面前景廣闊［5-6］。本研究通過觀察具有益氣養陰、活血通絡功效的中藥通脈顆粒對兔腹主動脈球囊損傷術后血清內皮素（ET-1）、一氧化氮（NO）水平變化及血管內皮生長因子（VEGF）、成纖維細胞生長因子（bFGF）、轉化生長因子（TGF）-β1蛋白表達的影響，探討中藥通脈顆粒在預防和治療冠脈介入術后再狹窄是否有較好的療效及應用前景?，F報告如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物新西蘭大耳白兔48只，體質量（2.5± 0.5）kg，由遼寧中醫藥大學實驗動物中心提供。

1.2實驗藥物1）通脈顆粒由丹參、當歸、人參、黃芪、川芎、麥冬組成，由遼寧中醫藥大學附屬醫院制劑室提供。2）阿托伐他?。⑵胀?，輝瑞制藥有限公司，批準文號國藥準字H95837003）。

1.3分組與造模將48只新西蘭大耳兔按照隨機數字表法分為正常組、模型組、通脈顆粒組（中藥組）、阿托伐他汀組（西藥組），每組各12只。模型組、中藥組、西藥組行手術造模。用20%烏拉坦溶液以5 mL/kg腹腔麻醉，取右股動脈區為手術區，備皮，消毒。切開皮膚鈍性分離肌肉，分離右股動脈，穿刺右股動脈，逆行導入直徑2.5或3.0 mm的球囊導管至腹主動脈，球囊加壓充盈后（壓力為4～6 kPa），緩慢回拉導管至切口處，拉傷長度約3 cm。重復上述過程反復3次，達到剝脫動脈內皮的目的，然后球囊減壓撤出導管，結扎股動脈，縫合皮膚，連續肌肉注射青霉素40萬單位3 d。

1.4給藥方法正常組未經手術及用藥；模型組術前、術后未用藥；中藥組于術前1 d開始給予通脈顆粒15.9 g/（kg·d），灌胃給藥，連續用藥21 d；西藥組于術前1 d開始給予阿托伐他汀片1 mg/（kg·d）口服，連續用藥21 d。

1.5標本采取1）血清的制備。造模3周，動物腹腔麻醉后，腹主動脈取血，分離血清，-70℃冰箱保存備用。使用時于37℃下溶化后，過0.22 μm濾膜過濾除菌。2）Western blot標本。造模3周，實驗動物麻醉后，小心并迅速分離出腹主動脈，每只截取長約10 mm腹主動脈兩段，分別用于RT-PCR和Western blot檢測，0.9%氯化鈉注射液沖洗后，立即置液氮內凍存。

1.6檢測指標硝基還原酶法測定血清NO水平，放免法測定血清ET-1水平。Western法檢測兔腹主動脈VEGF、bFGF、TGFβ-1蛋白表達。

1.7統計學處理應用SPSS16.0統計軟件分析。計量數據以（±s）表示，先進行組間方差齊性檢驗，在方差齊的基礎上作方差分析，組間兩兩比較。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1各組血NO及ET-1水平比較見表1。腹主動脈球囊損傷3周后，與正常組比較血漿NO水平明顯降低（P＜0.01）；中藥組、西藥組與模型組比較可明顯升高血漿NO水平（P＜0.01），與正常組比較血漿ET-1明顯升高（P＜0.01）；中藥組、西藥組與模型組比較可明顯降低血漿ET-1水平（P＜0.01）。

表1　各組兔血漿NO及ET-1含量比較（±s）

表1　各組兔血漿NO及ET-1含量比較（±s）

與正常組比較，*P＜0.01；與模型對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別　n　NO（μmol/L）　ET-1（Pg/mL）西藥組　12　12.7183±1.13483*△△38.8642±2.89005*△△正常組　12　18.5590±1.65050　27.6566±2.58870模型組　12　8.7991±0.71526*　85.1741±10.28795*中藥組　12　12.3472±0.90273*△△42.1247±3.59299*△△

2.2各組VEGF、bFGF、TGF-β1蛋白結果比較見表2。腹主動脈球囊損傷3周后，與正常組比較腹主動脈VEGF、bFGF、TGF-β1蛋白表達均明顯升高（P＜0.01）。中藥組、西藥組與模型組比較可明顯增加VEGF蛋白表達（P＜0.05），降低bFGF、TGF-β1蛋白表達（P＜0.01）。

表2　各組VEGF、bFGF、TGF-β1蛋白結果比較（±s）

表2　各組VEGF、bFGF、TGF-β1蛋白結果比較（±s）

組別n　TGF-β1西藥組　12　0.3310±0.03631*△△正常組　12　0.2257±0.03491模型組　12　0.4325±0.04592*中藥組　12　0.3380±0.03681*△△VEGF　bFGF 0.3924±0.05634*△0.3218±0.02928*△△0.2373±0.02880　0.2057±0.02615 0.3291±0.06645*0.4632±0.04498*0.3932±0.05026*△0.3263±0.03004*△△

3　討論

PCI術后再狹窄的機制十分復雜，目前認為各種原因引起的血管平滑肌細胞（SMC）增生，向內膜下遷移及合成大量細胞外基質從而引起內皮細胞增生是公認的再狹窄形成的主要機制［7］。目前的研究顯示，NO 和ET-1是內皮細胞分泌的兩種重要血管活性因子。NO可激活血管平滑肌細胞內的可溶性鳥苷酸環化酶，使環磷酸鳥苷含量升高，導致平滑肌細胞內鈣減少，從而介導血管平滑肌的舒張［8-9］，并且能夠抗血小板黏附和聚集，抑制血管平滑肌細胞增殖，抑制白細胞黏附、浸潤等作用，從而發揮對抗PCI術后再狹窄的作用。ET-1能有效地收縮血管、促進血管平滑肌細胞增殖、遷移和促進細胞外基質積聚、加速生長因子和黏附分子等合成與釋放［10］，增加新生內膜與中膜的比例，促使再狹窄形成。在PCI術過程中因機械牽拉、壓迫血管內皮，使內皮細胞分泌ET-1增加，而分泌NO水平明顯降低。VEGF能夠促進內皮生長和新生血管生成，還能夠促進纖溶酶活性、防止血栓形成、增加毛細血管通透性和舒張血管的作用［11］，因此在血管損傷修復和防止再狹窄中具有十分積極的意義。bFGF可以促進內膜增厚，球囊損傷后bFGF的釋放增加，造成新生血管狹窄。多項研究表明［12］，在血管損傷后，TGF-β1蛋白增加。TGF-β對VSMC增殖具有雙重效應，既可以促進VSMC由收縮型向合成型轉化，引起VSMC增殖；又可以抑制VSMC的增殖［13］。本實驗中，腹主動脈球囊損傷后，腹主動脈bFGF、TGF-β1表達升高，可能參與再狹窄的發生，VEGF可能通過促進血管內皮修復，防止再狹窄的發展。因此在PCI術后如何降低ET-1水平，而提高NO水平，促進內皮修復是預防PCI術后再狹窄新策略［14］。中醫學對于PCI術后再狹窄做了大量的研究，也取得了一定成果。冠心病PCI術后再狹窄屬于中醫學“胸痹心痛”的范疇，“氣陰兩虛、心血瘀阻”為其病機之一［15］?！端貑枴づe痛論》載“百病生于氣也”。心主血脈，以氣為用，故心氣的盛衰和運行與血液循環有直接關系。冠心病行PCI術者多為中老年人，久病體虛臟腑功能減退，心氣亦逐漸虧虛，加之久病傷津耗氣。氣虛則無以生血、行血，陰血虧虛則脈絡不通［16］，二者均可致血液運行不暢，脈絡不通，瘀血阻滯，以致發生狹窄。PCI術作為有創手術，雖可開通血絡，但氣陰虧虛之本依然存在，未從根本上祛除血瘀的原因，而中藥通脈顆粒正是以益氣養陰、活血通絡為治療原則。該藥由丹參、當歸、人參、黃芪、川芎、麥冬組成。方中人參大補元氣，與黃芪共奏益氣固本之效，麥冬滋陰益胃、養陰潤肺三者合用起到益氣養陰治本的效果。當歸養血、活血、通經，丹參活血、化瘀、止痛，川芎活血、行氣、止痛，三者起到活血通絡治標的效果。全方散中有補，諸藥配合，標本兼治，能夠促進損傷血管內膜修復，減輕內皮細胞增生，防止再狹窄的發生。

本實驗表明具有益氣養陰、活血通絡功效的通脈顆粒能夠能夠減輕血管內膜增生，促進內皮細胞生長及內膜修復，具有防治PIC術后再狹窄的作用，對我國防治PCI術后再狹窄中藥藥物的研發提供新的思路，亦對臨床用藥有指導作用。

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·研究報告·

The Effect of Yiqi Yangyin Tongluo Method on Endothelial Function after Endarterectomy of Abdominal Aorta in Rabbits

WANG Kuiying，LIU Tong，YANG Ying.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Liaoning，Shenyang 110032，China.

【Abstract】Objective：To investigate the feasibility of Yiqi Yangyin Tongluo of Tongmai particles in Prevention efficacy of restenosis after Percutaneous coronary intervention（PCI）.Methods：48 New Zealand rabbits were randomly divided into four groups，the normal group，the model group，Tongmai Particles group（TCM group），and atorvastatin group（western medicine group），12 in each.The normal group received no surgery and medicine，while the other groups were modeled with balloon catheter denudation rabbit abdominal aorta surgery.The model group remained untreated before and after surgery；a day before surgery，TCM group were administered with Tongmai Particles，continuous medication for 3 weeks，while western medicine group took atorvastatin orally，continuous medication for 3 weeks，too.After three weeks，blood was taken to test endothelin（ET-1）and nitric oxide（NO）.Protein expression of VEGF，bFGF TGFβ-1 of abdominal aorta in rabbit was detected with Western method.Results：NO rose and ET-1 reduced in plasma in both TCM group and western medicine group；in Chinese medicine group and western medicine group，the protein expression of VEGF could increase and the protein expression of bFGF and TGFβ-1 could reduce（P＜0.05）.Conclusion：Tongmai Particles can promote growth and endometrial repair of vascular endothelial cell，which may be associated with the decrease of plasma ET-1，rise of plasma NO，increase of VEGF and reduce of protein expression of bFGF and TGFβ-1，initially play a role in Prevention of surgery PIC restenosis.

【Key words】Tongmai particles；PCI；Endothelin；Nitric oxide；VEGF；bFGF；TGFβ-1；Endometrial repair

中圖分類號：R285.5

文獻標志碼：A

文章編號：1004-745X（2016）04-0609-03

doi：10.3969/j.issn.1004-745X.2016.04.013

*基金項目：遼寧省教育廳科研課題（L2012347）

通信作者△（電子郵箱：174813674@qq.com）

收稿日期（2015-10-02）