鹿瓜多肽注射液對脊柱椎體骨折康復過程中骨密度及血管內皮生長因子表達的影響

馮艷琴　姚忠紅　秦雪琴（湖北省十堰市太和醫院湖北醫藥學院附屬醫院，湖北　十堰　442000）

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鹿瓜多肽注射液對脊柱椎體骨折康復過程中骨密度及血管內皮生長因子表達的影響

馮艷琴姚忠紅△秦雪琴
（湖北省十堰市太和醫院湖北醫藥學院附屬醫院，湖北十堰442000）

【摘要】目的觀察鹿瓜多肽注射液對脊柱椎體骨折愈合過程中骨折椎體骨密度及血管內皮生長因子（VEGF）表達的影響。方法將204例患者按隨機數字表法分為對照組及治療組，每組102例，對照組電針夾脊穴，配合血海、足三里、陽陵泉三穴電針刺激20 min，治療組在此基礎上穴位注射鹿瓜多肽注射液。采用圖像分析法測定患者治療前后骨折椎體骨密度，采用免疫組化染色測定患者血清VEGF、VEGF mRNA陽性表達，比較總有效率，評價穴位注射鹿瓜多肽注射液對脊柱椎體骨折臨床療效。結果與對照組比較，圖像分析顯示治療組患者骨密度明顯提高，血清VEGF及VEGF mRNA陽性表達均明顯增強，總有效率90.19%明顯高于對照組的73.52%（均P＜0.05）。結論鹿瓜多肽注射液對增加骨鈣沉積、促進骨折椎體骨痂形成及椎體骨折愈合過程中VEGF的合成分泌，促使骨折椎體局部組織血管內皮新生，增加局部骨折組織血液供應，調節椎間盤組織細胞代謝并維持平衡等具有明顯的作用。

【關鍵詞】鹿瓜多肽注射液脊柱椎體骨折骨密度血管內皮生長因子總有效率

脊柱壓縮骨折（OVCF）是以骨質疏松為病理基礎，患者成骨、破骨細胞分解與合成代謝平衡失調，以成骨細胞合成增殖減少，破骨細胞合成增殖提高，尤其以脊柱椎體骨格鈣、磷代謝紊亂而造成骨質疏松，在外力的作用下，易導致脊柱壓縮骨折，且以L1～5腰椎椎體壓縮骨折多見，嚴重可造成癱瘓而影響患者生活質量［1］。流行病學調查顯示脊柱椎體壓縮骨折以50歲以上的絕經老年婦女多見，發生率在15%左右［2］。近年來研究發現血管內皮生長因子（VEGF）具有增加微、小靜脈血管的通透性、促使血管內皮細胞分裂增殖及誘導血管再生等作用［3］。受此啟發，在治療脊柱壓縮骨折上取得不少新成果，如利用中醫促進骨折局部血液循環，增加局部組織VEGF合成。VEGF與最先發現的血管通透性因子（VPF）的結構功能一致［4］，具有促進多種血管活性物質合成、血管內皮細胞增殖遷移及再生、參與骨折部位動脈側支循環形成的調節［5］，是一種高度特異性的促血管生長因子，故VEGF在臨床上常作為血管內皮生長功能的重要指標?，F代醫學證實，維持正常骨鈣代謝、正常的骨密度對穩定脊柱椎體結構起到至關重要的作用。故本研究以VEGF的分泌及骨密度等指標來觀察分析穴位注射鹿瓜多肽注射液對椎體壓縮性骨折的影響?，F報告如下。

1　資料與方法

1.1病例選擇診斷標準：參照1999年《中國人原發性骨質疏松癥診斷標準（試行）》［6］有以下之一者可確診為骨質疏松脊柱壓縮骨折病。1）患者年齡大于6歲，有明顯的全身乏力、骨痛及腰背痛等臨床表現，嚴重患者出現駝背體癥，自述或家屬證實有輕微外傷史，CT片顯示1～2個胸椎和/或腰椎壓縮性骨折，確定為輕微外傷導致的脊柱骨折。2）X線骨密度儀（型號為DEXA，OSTEOCORE-3，法國）檢查骨密度低于＜M-2SD，即骨密度檢測為陽性患者。3）CT片顯示壓縮性骨折不超過椎體的1/4的患者，或嚴重脊柱后突畸形的患者。排除標準［7］：1）患者檢查合并有嚴重心、肝、腎、內分泌系統疾病者；2）CT片顯示椎體有3個以上的壓縮性骨折；3）患者既往臨床資料不全等影響療效者，或未按規定治療方案導致無法判斷療效；4）X線骨密度儀檢測骨密度示骨質疏松，但CT又無壓縮性骨患者；5）患者CT片顯示壓縮性骨折超過椎體的1/4的。

1.2臨床資料湖北醫藥學院附屬十堰市太和醫院脊柱外科2013年11月至2015年6月收治的骨質疏松脊柱壓縮骨折住院患者204例，按隨機數字表法分為對照組與治療組各102例。對照組中男性33例，女性69例；平均年齡（69.31±7.84）歲；平均病程（37.50± 3.25）d。治療組中男性35例，女性67例；平均年齡（71.17±8.94）歲；平均病程（36.97±3.52）d。兩組病例在年齡、性別比例、病程等方面比較差異無統計學意義（P＞0.05），且無病例脫落。

1.3治療方法對照組男性患者靜滴降鈣素7 d。女性患者采用激素代替療法7周，靜滴降鈣素等常規治療7 d。參照高樹中著《針灸治療學》［9］，根據不同病情痛點循經選穴電針治療。選脊柱兩側夾脊穴，針刺入2～4 cm，行導氣手法，旁開2～3 cm配穴，以夾脊穴齊刺點為正極，配穴為負極，配合胃俞、脾俞、氣海俞、腎俞，接G6805-2A型電針治療儀，連續波，頻率10 Hz，電針刺激20 min，刺激強度以患者可以耐受為度，治療期間減少活動量，疼痛部位加用超短波理療30 min，TDP照射骨折局部皮膚20 min。電針刺激治療每日1次，每周治療6次休息1 d，7 d為1療程，治療8個療程。治療組在對照組治療基礎上，根據病情循經選穴，也可選擇痛點阿是穴2～3個部位，定點后注射鹿瓜多肽注射液（黑龍江江世藥業有限公司，規格2 mL/4 mg，批號H20061211）1 mL，每周注射5次，間歇2 d，7 d為1療程，治療8個療程。

1.4療效標準參照2002年《中藥新藥臨床研究指導原則（試行）標準》［8］評分標準，統計患者臨床治愈、顯效、有效、無效病例數，計算總有效率，總有效率=（治愈例數+顯效例數）/總病例數×100%。臨床治愈：疼痛消失，駝背等被動體位基本消失，骨質密度明顯增加。顯效：疼痛基本消失，駝背等被動體位略有好轉，骨密度檢查骨質密度有一定的增強。有效：疼痛略有好轉，駝背及骨質密度無明顯好轉和增加。無效：治療前后體癥及骨密度檢查無變化。

1.5檢測方法參照文獻［10］。CT影像檢查骨折椎體骨密度采用免疫組化染色及圖像分析法測定骨折椎體VEGF、VEGF mRNA陽性表達。采用免疫組織化學法檢測兩組患者血清VEGF、VEGF-mRNA蛋白等表達。采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定VEGF蛋白表達的光密度（OD）值。分別抽取患者治療前后靜脈血并分別編號置于-20℃冰凍待查。檢測時將標本3000 r/min轉離心30 min，取上清液（待測樣本），將標準品、待測樣本加入到預先包被的VEGF單克隆抗體透明酶標包被板中，37℃溫育30 min，洗滌后再加入酶標工作液，再于37℃下溫育30 min后洗滌除去未結合的成分，依次加入底物A、B，底物在辣根過氧化物酶催化下轉化為藍色產物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品VEGF濃度呈正比，用SP-Max 3500FL型多功能熒光酶標儀于450 nm波長下測定VEGF的OD值。VEGF mRNA測定方法參照文獻［11］，標本進行RNA提取，采用反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）測定VEGF mRNA表達水平。

1.6統計學處理應用SPSS19.0統計軟件分析。實驗數據均以（±s）表示，兩組間的均數檢驗采用多因素方差分析，組間構成比差異檢驗采用Χ2檢驗，兩兩比較采用LSD-t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩組臨床療效比較見表1。治療組總有效率明顯高于對照組（P＜0.05）。

表1　兩組臨床療效比較（n）

2.2兩組治療前后VEGF、VEGF mRNA表達及骨密度比較如表2。對照組VEGF、VEGF mRNA治療后有一定的增強，但治療前后比較差異無統計學意義（P＞0.05）；治療后治療組VEGF、VEGF mRNA表達明顯增強，與對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。X線骨密度儀示對照組骨密度在治療后增大（P＜0.05）。治療組骨密度顯著升高，與治療前及對照組比較差異有統計學意義（P＜0．05）。

表2　兩組治療前后VEGF、VEGF mRNA表達及骨密度比較（±s）

表2　兩組治療前后VEGF、VEGF mRNA表達及骨密度比較（±s）

與本組治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療后比較，△P＜0.05。

組別　時間　骨密度（g/cm2）（n＝102）　治療后　2.91±0.15*治療組　治療前　1.83±0.11 （n＝102）　治療后　3.89±0.19*△對照組　治療前　1.87±0.12 VEGF（Pg/mL）VEGF mRNA 23.57±2.89　0.75±0.09 19．24±1．87　0.68±0.05 44．02±4.14*△　1.75±0.11*△21．50±2．03　0.67±0.05

2．3不良事件治療組所有患者穴位注射鹿瓜多肽注射液治療無嚴重并發癥發生。

3　討論

鹿瓜多肽注射液是從鹿科動物梅花鹿的骨骼和葫蘆科植物甜瓜的干燥成熟種子中提取的多肽注射液類生物活性因子合成的一種復方滅菌注射液，富含骨形態發生蛋白（BMP）、成纖維細胞生長因子（FGF）等多種骨誘導多肽類因子。鹿瓜多肽注射液中含有的骨誘導多肽類生物因子具有調節骨代謝，刺激成骨細胞增殖，促進新骨形成，能有效刺激軟骨和成骨細胞的分化及增長、促進骨痂形成及骨折修復愈合［12］。鹿瓜多肽注射液中的甜瓜籽提取物中有多種游離氨基酸和有機鈣、磷，并具降低骨折局部毛細血管通透性，減少炎性浸潤及滲出，調節鈣磷代謝，增加骨鈣沉積；防止骨質疏松以及抗炎鎮痛抗風濕等作用［13］。近年來鹿瓜多肽用于治療脊柱椎體骨折、強直性脊柱炎、各種類型骨折、創傷修復及腰腿疼痛等取得了一定成效［14］，本文采用穴位注射鹿瓜多肽注射液治療脊柱椎體骨折，旨在挖掘中醫藥治療脊柱椎體骨折優勢，探討其作用機制，以期研究聯合治療的鎮痛消炎作用機制，為臨床提供安全可靠的治療方案。

觀察發現，治療組患者骨密度明顯提高，血清VEGF及VEGF mRNA陽性表達均明顯增強，總有效率明顯高于對照組，療效明顯優于對照組。分析認為，在本臨床研究中，對照組在治療后，骨密度提高，說明男性患者靜滴降鈣素7 d及女性患者采用激素代替療法7周的治療方案對促進骨鈣沉積、骨痂形成及骨折修復愈合有一定的作用，其VEGF蛋白質及VEGF mRNA陽性表達有不同程度提高，說明椎體椎體骨折創傷可在一定程度上刺激機體VEGF的分泌，但針灸及其他常規治療不能有效提高VEGF蛋白質及VEGF mRNA陽性表達。而治療組在肌肉注射鹿瓜多肽注射液治療21 d后，VEGF蛋白質及mRNA陽性表達明顯增強，提示鹿瓜多肽注射液具有促進椎體損傷時VEGF的分秘的作用，這與彭昊研究鹿瓜多肽注射液誘導缺骨折愈合過程中血管內皮生長因子表達，促進骨折局部組織血管再生，促進受損血管內皮修復的功能一致［15］。治療組骨密度明顯增強，這是由于鹿瓜多肽注射液具有多種生物活性，其骨誘導多肽類生物因子促進了機體內影響骨形成和吸收的骨源性生長因子的合成，包括骨形態發生蛋白（BMPs）及FGF等，這些成分可促進骨折部位細胞有絲分裂、分化及趨化作用。BMPs可誘導骨折局部組織血管周圍游動的間充質細胞轉化為不可逆性的骨系細胞，增加軟骨細胞和成骨細胞的活動力，降低破骨細胞分化從而誘導新骨及骨痂形成，進而達到促進骨折修復的目的。FGF可刺激成骨的細胞增值和分化，促進骨膠原蛋白及非膠原蛋白的趨向移動、增加骨鈣素的合成，BMPs還可通過與TGF-β和FGF相互之間的協調作用調節細胞外基質而誘導新骨形成，故治療組患者骨密度較對照組明顯增強。有研究表明，在促進骨折早期愈合過程中，甜瓜籽提取物與BMPs、FGF等骨誘導多肽生物因子可促進骨原性生長因子合成，為骨細胞合成BMPs、FGF等骨源性生物因子提供原料，具有明顯的協同作用［16］，可促進骨源性生物因子的合成及鈣磷代謝，維持骨容量，增加骨鈣含量，增強骨密度。

綜上所述，鹿瓜多肽注射液可促進椎體骨折愈合過程中VEGF及VEGFmRNA的表達，促使骨折椎體血管內皮新生，增加局部骨折組織血液供應，降低骨折局部毛細血管通透性，減少炎性浸潤及滲出，降低破骨細胞分化從而誘導新骨及骨痂形成而達到促進骨折修復的作用。穴位注射鹿瓜多肽治療脊柱壓縮骨折療效顯著，充分發揮中西醫結合治療優勢，有一定的臨床推廣價值。

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The Effect of Deer Melon Polypeptide Injection on Bone mineral Density and Expression of Vascular Endothelial Growth Factor During Rehabilitation of Vertebral Fracture

FENG Yanqin，YAO Zhonghong，QIN Xueqin.Shiyan Taihe Hospital of Hubei province，Hubei Medical College，Hubei，Shiyan 442000，China.

【Abstract】Objective：To observe the effect of Deer melon polypeptide Injection on bone mineral density and expression of vascular endothelial growth factor during rehabilitation of vertebral fracture.Methods：204 patients were randomly divided into the control group and treatment group，each group of 102 cases.Control group were treated with electric acupuncture.Treatment group were treated with point injection of Deer melon polypeptide Injection on the basis of control group.The bone density of patients with bone density was measured by image analysis method.The expression of VEGFmRNA and VEGF was detected by immunohistochemical staining，and the total effective rate was compared.Results：The bone mineral density in treatment group was significantly were higher than that in the treatment group.Compared with control group，the positive expression of serum VEGF and VEGFmRNA were significantly enhanced.And the total effective rate of treatment group was 90.19%，which was higher than that of control group（P＜0.05）.Conclusion：Deer melon polypeptide Injection has a a good effect on Increasing bone calcium precipitation，promoting the formation of bone callus，promoting VEGF secretion during rehabilitation of vertebral fracture，increasing the blood supply of local bone tissue，adjusting the cell metabolism and maintain balance.

【Key words】Deer melon polypeptide injection；Vertebral fracture；Bone mineral density；Vascular endothelial growth factor

中圖分類號：R274.15

文獻標志碼：B

文章編號：1004-745X（2016）04-0699-04

doi：10.3969/j.issn.1004-745X.2016.04.044

*基金項目：湖北省科技廳項目（B20122418）

通信作者△（電子郵箱：FengYanqin163163@126.com）

收稿日期（2015-11-03）