艱難梭菌毒素A&B測定在醫院腹瀉患者中的應用價值研究

黎華　陸國標　王穗雯

【摘要】 目的 研究艱難梭菌毒素 A&B（CDAB）測定在醫院腹瀉患者中的應用價值。方法 54例住院后出現腹瀉的患者， 均采取 CDAB檢測試劑與 VIDAS分析儀進行糞便標本的毒素檢測， 結合患者的臨床資料、治療情況及細菌常規培養結果進行綜合性分析。結果 54例患者經檢測后， 有 9例患者檢測出艱難菌毒素陽性， 并且檢測結果均與患者的臨床診治相符。9例 CDAB陽性患者中， 2例為神經外科患者、2例為風濕科患者、2例為腫瘤科患者、2例為脊柱外科患者、1例為兒科患兒， 其年齡10～64歲， TV值為 0.53～3.98。結論 對腹瀉患者進行艱難梭菌毒素A&B測定具有重要的臨床價值， CDAB檢測試劑與 VIDAS分析儀檢測操作簡單便捷、檢測結果準確且快速， 值得臨床推廣。

【關鍵詞】 艱難梭菌毒素 A&B；腹瀉；醫院感染

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.16.084

艱難梭菌屬于條件致病菌， 是存在于人體腸道中的一種厭氧革蘭陽性芽孢桿菌[1]。如果腸道內的環境受到破壞， 被抑制的艱難梭菌會大量繁殖， 從而造成腹瀉癥狀及假膜性結腸炎等[2]。對艱難梭菌毒素進行快速有效的檢測， 是艱難菌素相關腹瀉癥狀早期診斷、控制與預防醫院感染傳播的重要條件。本文對艱難梭菌毒素 A&B測定在腹瀉患者中的應用價值進行探討， 現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取 2015年 2～7月本院 54例住院后出現腹瀉的患者， 均在住院 3 d后發生腹瀉、24 h內糞便形狀不成形 >3次、在近 1個月內使用過喹諾酮類、克林霉素及頭孢菌素等廣譜抗菌藥物。

1. 2 方法

1. 2. 1 儀器與試劑 CDAB檢測試劑與 VIDAS分析儀 （法國生物梅里埃公司）；大便常規培養基成分 （上海天和微生物試劑公司）。

1. 2. 2 檢測方法 將所有患者的糞便標本及時接種于 SS及Mac培養基， 進行 48 h的常規培養， 觀察標本中有沒有腸道致病菌生長。將充分混合的液體糞便 200 μl或者半固體糞便200 mg利用移液器加入至干凈離心管中， 在離心管中滴入樣品稀釋液 1000 μl， 采用渦輪旋轉混合器對樣品進行混合， 直至樣品完全均勻。在2～25℃下， 離心12000 g、5 min， 取上清液 300 μl， 用于艱難梭菌毒素 A&B試驗， 嚴格按照試劑說明書進行操作。

1. 2. 3 原理及程序 將酶聯熒光分析法 （ELFA）結合最后熒光檢測；固相容器 （SPR）在分析中具有固相作用， 同時也具有移液裝置的作用；上述步驟均由儀器自動進行。反應介質需將 SPR多次移出移入。在每個步驟完成之后均需進行清洗， 將未結合的組分去除。先將樣品中毒素A、毒素 B分別結合涂抹于 SPR內部的兔多克隆 （毒素 A抗體）、鼠單克隆 （毒素 B抗體 ）， 并均和生物素共軛。其中生物素經與堿性磷酸酶共軛的鏈霉素培養進行檢測， 檢測孔內對堿性磷酸酶催化底物進行水解， 使其水解成為熒光產物， 并在 459 nm下對熒光進行測量， 熒光的強度和樣品中毒素A、毒素 B的數量為正相關性。所有分析過程均在儀器上自動完成， 其檢測的結果是被測樣品的熒光強度， 并采用 TV值表示。

1. 3 評判標準 陰性：測試值的解釋 <0.13；中介：測試值的解釋 0.13～0.37；陽性：測試值的解釋>0.37。

2 結果

54例腹瀉患者經艱難梭菌毒素 A&B檢測后， 9例患者檢測出艱難菌毒素陽性， 陽性率為 16.67%， 并且檢測結果均與患者的臨床診治相符。54例患者的大便常規培養結果為：36例患者無致病菌生長， 7例腸球菌屬， 6例腸肝菌科， 3例白假絲酵母素， 其余 2例為其他致病菌。9例 CDAB陽性患者中， 2例為神經外科患者、2例為風濕科患者、2例為腫瘤科患者、2例為脊柱外科患者、1例為兒科患兒， 其年齡10～64歲， TV值為 0.53～3.98， 所有患者均伴有不同程度的腹痛、腹脹， 且大便為糊狀或稀水樣；大部分患者具有發熱癥狀， 嚴重者甚至出現心跳加速、電解質紊亂及神志淡漠等全身中毒癥狀；患者在腹瀉前使用過的抗菌藥物種類有氨芐西林、左氧氟沙星及頭孢吡肟等；9例患者外周血檢查顯示白細胞增多， 且大便常規檢查顯示可見膿細胞。

3 討論

目前， 大多數學者均認為艱難梭菌是引起抗菌藥物相關腹瀉癥狀 （AAD）的主要原因。AAD患者中有 15%～25%及絕大部分假膜性結腸炎 （PMC）患者是因艱難梭菌導致的[3]。發生艱難梭菌相關性腹瀉 （CDAD）通常與抗菌藥物的使用相關， 其是一種菌群失調的結果。而如果長時間使用頭孢菌素類、

青霉素類、加替沙星及克林霉素等廣譜抗菌藥物， 易造成菌群失調， 使耐藥的艱難梭菌可能在被藥物選擇過后進行大量繁殖導致發病[4]。本研究中顯示， 9例 CDAB陽性患者主要使用過氨芐西林、左氧氟沙星及頭孢吡肟等抗菌藥物， 大多為廣譜抗菌藥， 并且多為聯用， 而 9例患者中僅 1例患兒為10歲， 其余患者均 >42歲， 并均有較嚴重的基礎疾病。

在本研究中， 9例 CDAB陽性患者的臨床表現與實驗室檢查結果等均與 CDAD患者相符， 且其中 3例患者經檢測適宜艱難梭菌感染治療后， 采用甲硝唑治療， 病情均得到明顯改善， 再進行 CDAB檢測顯示為陰性。因此， 艱難梭菌毒素A&B測定對醫院腹瀉患者具有重要的應用價值[5]。而本研究顯示， CDAB陽性患者在大多數科室均不止 1例， 其可能是由于艱難梭菌具有小流行的原因。因此， 在每個科室應制訂系統規范的預防 CDAD體系， 嚴格對感染患者實施隔離措施， 進行消毒處理， 并且醫護人員需注意手部衛生， 加強醫院環境的消毒， 維持環境清潔等。

參考文獻

[1] 朱宇， 王力， 馮莎娜， 等. 惡性腫瘤患者艱難梭菌相關性腹瀉的臨床危險因素分析.中華腫瘤雜志， 2014， 36（10）：773-777.

[2] 李文麗， 簡子娟， 劉文恩， 等. 艱難梭菌毒素A&B測定在醫院腹瀉患者中的應用.中國感染控制雜志， 2010， 9（4）：261-263.

[3] 劉元元， 劉文恩， 簡子娟， 等. 住院腹瀉患者艱難梭菌檢測與分析.中國感染控制雜志， 2012， 11（4）：293-296.

[4] 宋文斌， 岳云雷， 郎海波， 等. 蘭州地區腹瀉患者艱難梭菌的感染狀況調查.中國微生態學雜志， 2014， 26（10）：1138-1139.

[5] 張艷， 董嗣慶. 228例急性腹瀉患者臨床治療體會.中國現代藥物應用， 2009， 3（24）：113-114.

[收稿日期：2016-03-17]