黔東南州產絞股藍蘆丁含量的研究

譚　霖，楊　鑫，龍　瀅，徐秋萍

(黔東南州食品藥品檢驗檢測中心，貴州　凱里　556000)

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黔東南州產絞股藍蘆丁含量的研究

譚霖，楊鑫，龍瀅，徐秋萍

(黔東南州食品藥品檢驗檢測中心，貴州凱里556000)

摘要：采用高效液相色譜法測定黔東南州不同產地絞股藍中蘆丁的含量。色譜柱(Diamonsil C18，5 μl，150×4.6 mm迪馬公司生產)，流動相：甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)，檢測波長：257 nm，柱溫：30 ℃，流速：1.0 ml / min；以蘆丁為含測指標測定絞股藍中蘆丁含量。絞股藍中蘆丁在0.204 892 μg～1.229 352 μg范圍內呈良好的線性關系，回歸方程y=2 205.5x+25.711，R2=0.999 5 ，平均加樣回收率為103.07 %，RSD %為1.7 %。不同產地絞股藍中蘆丁含量在1.152 8～1.433 2 mg / g之間。黔東南州不同產地絞股藍中蘆丁含量的差異不大。

關鍵詞：黔東南州產絞股藍，蘆丁，高效液相色譜法

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絞股藍Gynostemma pentaphyllum(Thumb.)Makino 為葫蘆科絞股藍屬植物，又名七葉膽、五葉參、七葉參等。多年生草質藤本，蔓生，莖細弱、分枝，具縱棱及溝，被短柔毛；葉互生，膜質，鳥足狀，具3-9枚小葉，通常5-7葉；卷須纖細，2岐，稀單一；根系分布淺，一般集中于表土150 mm以內；花雌雄異株，圓錐花序，雌花圓錐花序遠較雄花短??；子房球形，2-3室，花柱3枚；漿果，種子卵狀心形，深褐色，2-3粒[1]。全草入藥味苦、寒、歸肺、肝、脾經。絞股藍性寒，味甘苦，無毒，入肺、脾、心、腎經，長于補氣養陰，清肺化痰，養心安神。絞股藍含有多種藥用成分：皂苷、黃酮、多糖、氨基酸、植物蛋白、甾體、色素、有機酸、纖維素、葉綠素、木質素、微量元素等[2]。研究表明，絞股藍活性成分具有降血脂、降血糖、調血壓、延緩衰老、預防冠心病、抑制癌細胞、調節人體生理機能、增強機體免疫力等功能，被譽為“人間仙草”[3]。絞股藍對生長條件要求低，周期短，易于人工栽培，產量大。目前，以絞股藍為主要原料開發出的各種保健飲料、醫用制劑等不斷增多，品種繁多，深受人們喜愛。本實驗通過建立HPLC法測定黔東南州不同產地絞股藍蘆丁的含量，研究得出黔東南州地區產地絞股藍蘆丁的含量范圍，為絞股藍的進一步研究提供了一定的參考依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

儀器：安捷倫1260高效液相色譜儀、G1311C輸液泵、G1316A柱溫箱、G1329B自動進樣器、DAD檢測器(G1315D)、工作站(Chem Station foy LC systems)；色譜柱Waters Symmetry C-18(5 μm 4.6×150 mm)；KQ-500DA型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；SHZ-DⅢ型循環水式真空泵(常州普天儀器制造有限公司)； 二兩裝高速中藥粉碎機(瑞安市永歷制造有限公司)；電子天平(梅特勒AE240)。

試劑：甲醇(色譜純)；醋酸(色譜純)；水為超純水；甲醇(分析純)。

供試品：絞股藍6各批次分別產于貴州省施秉縣、雷山縣、臺江縣為各兩批。

對照品：蘆丁(中國藥品生物制品檢定所提供，批號為：100080-200707、含量90.5 %)

1.2試驗方法

1.2.1溶劑考察

精密稱取絞股藍粉末(過4號篩)約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入25 ml甲醇、乙醇、50 %甲醇、50 %乙醇，稱定重量，密塞，再分別超聲處理(功率250 W，頻率25 kHz)30 min、20 min、15 min，放冷，再稱定重量，分別補足減失的重量，搖勻，濾過，續濾液用0.45 μm微孔濾膜濾過，精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀中分析20 min，結果甲醇超聲提取30 min的溶液成分較多效果好。

1.2.2流動相的考察

本實驗經過對不同甲醇-1 %冰醋酸比例流動相進行考查，流動相甲醇-1 %冰醋酸(30∶70)進行測定時，其保留時間為26 min左右，對流動相甲醇-1 %冰醋酸(50∶50)進行測定時，其保留時間為4 min左右，對流動相甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)進行測定時，其保留時間為12 min左右，峰型較好，樣品圖譜的分離也較好，結果流動相甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)時效果最好見圖1。

圖1　流動相甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)

1.2.3檢測波長的確定

取蘆丁對照品和供試液于紫外光區掃描，結果得在檢測波長為257 nm試對照品有最大吸收，供試液在257 nm波長處也有最大吸收且效果好，故選擇257 nm為檢測波長。

1.2.4色譜柱的考查

本實驗對Dikma C-18(5 μm 4.6×250 mm)，Dikma C-18(5 μm 4.6×150 mm)，Waters Symmetry C-18(5 μm 4.6×150 mm)，Thermo C-18(5 μm 4.6×250 mm)色譜柱進行了考查，結果Waters Symmetry C-18(5 μm 4.6×150 mm)效果較好，出峰時間理想。

2方法建立

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1 %冰醋酸(40∶60)為流動相；流速1.0 ml / min；進樣量為10 μL；檢測波長為257 nm；柱溫為30 ℃；理論塔板數按蘆丁峰計應不低于2 000。

2.1對照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對照品0.011 32 g于100 ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，得0.102 446 mg / ml蘆丁標準品溶液。

2.2絞股藍供試品溶液的制備

精密稱取絞股藍粉末(過4號篩)約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱定重量，密塞，超聲處理(功率250 W，頻率25 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，續濾液用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

測定法分別精密吸取上述供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算蘆丁的含量。

2.3標準曲線的制備及線性范圍的考察

精密吸取2.1.3蘆丁對照品溶液2、4、6、8、10、12 μL，按上述2.1.1色譜條件項測定峰面積，以蘆丁進樣質量為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程y=2 205.5x+25.711，相關系數r=0.999 5，線性考察見圖2。

圖2　蘆丁標準曲線圖

2.4穩定性考察

精密稱取絞股藍粉末(過4號篩)約1.0 g，精密稱定，按色譜條件項下條件，按2.2供試品溶液的制備項下方法制備，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h對蘆丁進行測定。測定結果見表1。

表1　穩定性考察表

由上述測定結果表明，供試品溶液在24 h內比較穩定。

2.5精密度考察

精密稱取絞股藍粉末(過4號篩)約1.0 g，精密稱定，按色譜條件項下條件，按2.2供試品溶液的制備項下方法制備，連續進樣6次對供試品進行測定。測定結果見表2。

表2　精密度考察表

由上述測定結果表明，儀器精密度良好。

2.6重現性考察

精密稱取絞股藍粉末(過4號篩)約1.0 g，精密稱定，按色譜條件項下條件，按2.2供試品溶液的制備項下方法，制備6個樣品，每個樣品進3針，對蘆丁進行測定。測定結果見表3。

表3　重現性考察表

由上述結果表明，此測定方法的重現性良好。

3黔東南州不同產地樣品的測定

不同批次絞股藍供試樣品的含量測定精密稱取絞股藍藥材粉末(過4號篩)2份，按照色譜條件及2.2供試品溶液制備方法對蘆丁進行測定。測定結果見圖3、表4。

圖3　黔東南州不同產地樣品的測定圖譜

樣品名稱平均峰面積蘆丁含量/mg/gRSD/%施秉11064.71.18140.29施秉21038.81.15280.21雷山11165.51.29290.32雷山21178.71.30770.16臺江11285.21.42620.02臺江21291.91.43320.08

由上述測定結果表明，黔東南州3個不同產地6個不同批次絞股藍藥材中蘆丁的含量有一定差異，但相差不大范圍在1.152 8～1.433 2 mg / g之間。

4結果與討論

通過研究建立了一可靠穩定的高效液相色譜含量檢測方法，對黔東南州3個不同產地6個不同批次絞股藍藥材中的蘆丁進行含量測定，得出各產地各批次藥材中蘆丁含量不同，其中臺江產絞股藍中蘆丁含量最高，雷山產絞股藍其次，施秉產絞股藍蘆丁含量最少。結果表明黔東南州地區產絞股藍藥材中蘆丁的含量有一定差異，但相差不大范圍在1.152 8～1.433 2 mg / g之間。其中同一產地不同批次絞股藍藥材中蘆丁的含量差異較小。采收時間與加工處理對藥材的含量都有一定的影響，總的來說本次實驗為黔東南州產絞股藍的含量與絞股藍中蘆丁成分的檢測方法提供一定的依據。

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收稿日期：2016-04-13；修回日期：2016-04-16

作者簡介：譚霖，男，苗族，貴州省天柱縣人，本科，就職于黔東南州食品藥品檢驗檢測中心。研究領域：中藥學。研究方向：中藥材質量。

中圖分類號：R284.1

文獻標識碼：A

文章編號：1003-6563(2016)03-0066-04

Research of rutin content from gynostemma in Qiandongnan

TAN Lin，YANG Xin，LONG Ying，XU Qiuping

(Qiandongnanfoodanddruginspectiontestingcenter，Carey556000，China)

Abstract：By using high performance liquid chromatography(HPLC)method，the content of rutin from different origin gynostemma is determined in qiandongnan，chromatographic column(Diamonsil C18，5 mu l，150×4.6 mm made in di company)，mobile phase：methanol -1 % glacial acetic acid(40∶60)，detection wavelength：257 nm，column temperature：30 ℃，the flow rate：1.0 ml / min.As the rutin index，the content of rutin in gynostemm is determined.The rutin in gynostemma in the range of 0.204 892 μg ～ 1.229 352 μg has a good linear relationship，and the regression equation is y= 2 205.5+25.711x，R2 = 0.999 5.The average sample recovery rate is 103.07 %，and the RSD % is 1.7 %.The Rutin content in gynostemma in different regions is 1.1530 mg / g ～ 1.433 7 mg / g.The difference of the rutin content in different origin gynostemma of Qiandongnan prefecture is not big.

Keywords：Qiandongnan gynostemma production，Rutin，high performance liquid chromatography