品紅亞硫酸試液對比色法測定環氧乙烷殘留量的影響

胡　芳，楊　紅，韓　瑜

(1 貴州省醫療器械檢測中心，貴州　貴陽　550004；2 貴州省生物研究所，貴州　貴陽　550009)

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品紅亞硫酸試液對比色法測定環氧乙烷殘留量的影響

胡芳1，楊紅1，韓瑜2

(1 貴州省醫療器械檢測中心，貴州貴陽550004；2 貴州省生物研究所，貴州貴陽550009)

考查品紅亞硫酸試液配制條件對比色法測定環氧乙烷殘留量的影響。用同一系列濃度的乙二醇標準溶液，分別經四種不同條件下的品紅試劑顯色，比較此四種方式下標準溶液的吸光度值及標準曲線的線性關系；并對同批次的輸液器進行測定，比較輸液器中環氧乙烷殘留量的測定情況。四種品紅亞硫酸試液配制方法均能使供試品顯色，標準曲線趨勢相似，相關系數分別為0.9908、0.9947、0.9904、0.9903。輸液器供試液的吸光度在四種條件下均為0.000，但因四支標準曲線的響應值不同，故經過標準曲線方程換算后獲取的供試液的相應反應體積區別較大，其單位產品中環氧乙烷絕對含量依次為0.12 mg/套、0.10 mg/套、0.13 mg/套、0.15 mg/套。結論參照GB/T 14233.1-2008配制并經暗處放置12 h后再使用的品紅亞硫酸試液，可使比色反應更加靈敏、線性更好。

品紅亞硫酸試液；比色法；環氧乙烷；殘留量測定

輸液(血)器、注射器具、吸氧管等是常見一次性醫療器械產品，人們對一次性產品的使用，既是當下醫療衛生產業的發展使然，也是人們把其習慣性的作為治病保健的載體。因此一次性醫療器械產品的安全可靠性與疾病治療的效果是密切相連的[1]。這些一次性醫療產品在使用前必須消毒，而此過程主要是通過環氧乙烷(ethylene oxide，EO)高壓熏蒸的方法進行處理[1]。因為EO具有廣譜高效殺菌作用，通入過量的EO能滿足一次性產品的生物要求，但它也是一種有毒氣體，過量的EO會對人體產生危害[2]。因此控制EO的殘留量就有著至關重要的意義[3]。醫用輸液、輸血、注射器具等在現行標準GB 8368-2005[4]和GB/T 14233.1-2008[5]的指導下，可采用比色法和氣相色譜法(仲裁法)對EO的殘留量進行測定。鑒于當前化學比色法還占據不可或缺的地位，其低成本快速測定的性質使其暫時還不能離開實驗舞臺，所以本試驗主要針對比色法的條件展開探討，考查其試劑配制中——品紅亞硫酸試液對顯色反應的影響，以期補充和完善比色法測定EO殘留量的實驗條件來提高實驗結果的穩定性和準確性。

1　實驗準備

一次性使用重力式輸液器，江西洪達醫療器械集團有限公司；乙二醇，堿性品紅(指示劑)，高碘酸，鹽酸，硫代硫酸鈉，亞硫酸鈉，活性炭等所有化學試劑均為分析純；所有用水為純凈水。

1.2儀器

TU-1810 ASPC紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司；10 mL具塞比色管；DHG-9030A電熱鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司；水浴鍋等。

2　方法與結果

2.1基礎試液配制

0.1 mol/L鹽酸、5 g/L高碘酸溶液、10 g/L硫代硫酸鈉、10%亞硫酸鈉溶液的配制同于標準[5]10.2項。

2.2品紅亞硫酸試液配制

2.2.1方案一

政府和金融機構應深入基層，針對貧困戶的特點設計符合其需求的金融知識，加強對貧困戶金融知識的教育和普及，將金融知識普及活動常規化、常態化，使得農戶對金融和保險產品有正確的認知。在普及金融知識的同時，引導、傳授貧困戶正確運用金融知識的技能，提高對金融風險的認知與防范。同時，借助于手機、自媒體、電視等媒體渠道，定時推送金融理財以及反非法集資、反假幣等金融知識，潛移默化地影響和提升農戶金融意識。

參照GB/T 14233.1-2008中10.2項的配制方法，稱取0.1 g堿性品紅，加入120 mL熱水溶解，冷卻后加入10%亞硫酸鈉溶液20 mL、鹽酸2 mL置于暗處，放置1 h后，即得。本品臨用新制。

2.2.2方案二

同2.2.1 制備品紅試液，但該試液置于暗處放置12 h后使用。

2.2.3方案三

同《中國藥典》2010版二部附錄[6]品紅亞硫酸試液的制備方法：取堿性品紅0.2 g，加熱水100 mL溶解后，放冷，加10%亞硫酸鈉溶液20 mL、鹽酸2 mL，用水稀釋至200 mL，加活性炭0.1 g，攪拌并迅速過濾，放置1 h以上，即得。本品臨用新制。

2.2.4方案四

稱取0.1 g堿性品紅，加入120 mL熱水溶解，冷卻后加入10%亞硫酸鈉溶液20 mL、加入0.1 mol/L鹽酸2 mL置于暗處，放置1 h以上，即得。本品臨用新制。

2.3標準對照溶液配制

稱取0.5462 g 乙二醇于含有30 mL水的50 mL容量瓶中，加水至刻度即得乙二醇貯備液。精確量取該貯備液1.0 mL，用水稀釋至1000 mL，即得濃度為0.0109 g/L乙二醇標準溶液，待用。

2.4空白溶液的配制

取四支10 mL納氏比色管，精確加入0.1 mol/L鹽酸2 mL，加入5 g/L高碘酸溶液0.4 mL，搖勻，于25 ℃恒溫條件下放置1 h。然后滴加10 g/L硫代硫酸鈉溶液至出現的黃色恰好消失。再分別加入2.2項下所制的四種不同方案的品紅亞硫酸試液0.2 mL，用蒸餾水稀釋至10 mL，搖勻，在37 ℃烘箱中恒溫放置1 h，于560 nm波長處進行調零，以此作為相應條件下的空白參比。

2.5標準曲線的繪制

(1) 取四組10 mL納氏比色管，每組五支，分別于每組的五支比色管中精確加入0.1 mol/L鹽酸2.0 mL，再分別精確加入0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL 的0.0109 g/L乙二醇標準溶液。

(2) 然后于各比色管中加入5 g/L高碘酸溶液0.4 mL，搖勻，于25 ℃恒溫條件下放置1 h。然后滴加10 g/L硫代硫酸鈉溶液至出現的黃色恰好消失；再以組為單位，從組一至組四，依次于加入2.2項下所制的四種不同方案的品紅亞硫酸試液0.2 mL，用蒸餾水稀釋至10 mL，搖勻，在37 ℃烘箱中恒溫放置1 h，以2.4項下相應的品紅亞硫酸試液所制的空白溶液作為參比，于560 nm波長處測定標準溶液的吸光度A，繪制吸光度-體積標準曲線。

(3) 以測定的乙二醇標準溶液的取用體積V(mL)為橫坐標x，測得的各乙二醇標準溶液的吸光度A為縱坐標y，繪制相應條件下的標準曲線，并計算其相關系數，結果見表1和圖1。

表1　同一系列乙二醇標準溶液經四種不同品紅亞硫酸試液顯色后所繪制的工作曲線表

圖1　四種不同品紅亞硫酸試液顯色后制備的同一系列的乙二醇標準溶液吸光度曲線響應圖

從圖1可知，四條曲線的趨勢相似，曲線相關性良好。但經2.2.2項下的品紅亞硫酸試液顯色后，各待測標準溶液顯色較明顯，測定信號較其余三者高。

2.6供試液的測定

通過極限浸提法，取一次性輸液器上有代表部位，截為5 mm 長碎塊，稱取2.0置于具塞三角瓶中，加0.1 mol/L鹽酸10 mL，置于25 ℃恒溫條件下放置1 h，作為供試液，待用。然后精密量取供試液2.0 mL于納氏比色管中，制備兩份，然后按照2.5(2)操作，測定該輸液器經四種品紅亞硫酸試液顯色后測定值的異同，結果見表2。

表2　同一輸液器供試液經四種不同品紅亞硫酸試液顯色后的環氧乙烷殘留量測定

注：單位產品中環氧乙烷絕對含量(mg)公式為[5]：WEO=1.775V×c1×m；其中V為標準曲線上找出的供試液相應的體積(mL)；c1為乙二醇標準溶液濃度(0.0109 g/L)；m為單位產品的質量(平均16.7642 g/套)。

從實驗結果可知：首先，供試品在四種反應條件下，其殘留含量均符合標準[4]規定；其次，在四種品紅亞硫酸試液條件下的輸液器供試液的吸光度均為0.000，但四支標準曲線的響應值不同，故經過標準曲線方程換算后獲取的供試液的相應反應體積則區別較大。2.2.1和2.2.2項下的供試液的結果較為接近，臨用新制的品紅試液放置1 h后即可使用，但經暗處放置12 h后再使用，其比色反應相對更加靈敏、線性更好。

3　討　論

(1)試驗中選用水浴鍋對整個實驗溫度進行恒溫處理，主要是為了恒定乙二醇的反應溫度，以確保反應的完全，最終能真實反映檢出結果。

(2) 當加入品紅試液后，需要在(37±1) ℃條件下恒溫1 h，比色管中反應的試液顏色會隨著溫度的升高而變紅，但其穩定性會相對變弱，因此需要嚴格控制好反應溫度，建議在36 ℃ 最佳。

(3)經品紅亞硫酸試液顯色處理完畢的待測液，需立即進行儀器測定，否則長時間的曝光，會使測定值飄移[7]，不能反映供試品的真實情況。

(4) 品紅亞硫酸試液對供試液的顯色程度，會影響供試液中殘留的環氧乙烷含量的測定的真實性。在標準[5]中對品紅亞硫酸試液的配制未提到放置于暗處的具體時間，通過在同一條件下對四種品紅亞硫酸試液進行乙二醇標準溶液、輸液器的測定，從標準曲線的響應情況和輸液器供試液的測定結果可知2.2.1和2.2.2項下的供試液的結果較為接近，即臨用新制的品紅試液放置1 h后即可使用，經暗處放置12 h后再使用也無異常，相比較而言，后者比色反應情況相對更加靈敏、線性更好。

(5)藥典[6]附錄對品紅亞硫酸試液的配制與GB/T 14233.1-2008[5]的配制方式大致相同，只是藥典方法中通過加入0.1 g活性炭對該試液進行吸附，因為在GB/T 14233.1-2008中提到“……試液應無色，若發現有微紅色，應重新配制?！?，為此，試驗組對試液脫色進行實驗探索，通過添加活性炭，的確可使品紅亞硫酸試液達到無色，甚至透明，但加入過多的活性炭(mmax=1.0 g)，品種和亞硫酸試液將會失去其顯色作用——乙二醇標準溶液經該過度脫色的品紅試液處理后，無法顯色。

比色法和氣相法都是測定一次性醫療器械產品中環氧乙烷殘留量的方法。雖然比色法不是仲裁法，但它作為一種基礎實驗方法，價格低廉，普適性較強，因此當下乃至長時間內其依舊會存在于化學檢測的舞臺中，而任何一種檢測方法都需要重視和不斷完善，以確保其實驗結果的真實性。因此完善其測定環氧乙烷殘留量的實驗條件，有利于提高實驗結果的穩定性和準確性。

[1]吳玉梅.環氧乙烷在醫院物品滅菌中的應用[J].中國現代藥物應用,2015(4):265-266.

[2]岳錦花.比色法檢測一次性無菌注射器環氧乙烷的可行性探討[J].華人時刊(下旬刊),2014(7):194.

[3]劉泰玉,梁志紅,駱紅宇.品紅——亞硫酸比色法測定一次性使用輸液(血)器環氧乙烷殘留量[J].山東醫藥工業,1995,15(3):11-12.

[4]GB 8368-2005.中華人民共和國國家標準《一次性重力式輸液器重力輸液式》[S].中國標準出版社,2006.

[5]GB/T 14233.1-2008.中華人民共和國國家標準《醫用輸液、輸血、注射器具檢驗方法第1部分：化學分析方法》[S].中國標準出版社,2009.

[6]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典.2010年版二部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010,附錄172.

[7]劉翔.一次性使用輸液器環氧乙烷殘留量檢驗方法探討[J].江蘇藥學與臨床研究,2002,10(4):79-80.

Influence of Fuchsin Sodium Sulfite Solution in Determination of the Ethylene Oxide Residue by Colorimetry

HUFang1,YANGHong1,HANYu2

(1 Guizhou Medical Device Testing Center, Guizhou Guiyang 550004;2 Guizhou Institute of Biology, Guizhou Guiyang 550009, China)

The effects of fuchsin sulfite solution preparation conditions to determinate the ethylene oxide residued by colorimetry were tested. Using the ethylene glycol standard solution with a series of concentration, which coloured respectively by four different conditions of fuchsin reagent, comparing with the absorbance and the linear relationship of standard curve in these four mode of standard solution, the same batch of infusion was measured, comparing with the conditions of infusion in determination of the amount of ethylene oxide residues. The preparation method of four kinds of fuchsin sulfite solution can make the sample solution color. The standard curves showed a similar trend. The correlation coefficients were 0.9908, 0.9947, 0.9904, 0.9903. Under the four conditions, the absorbance of the test solution infusion was 0.000. But the response values of the four standard curves were different. So after conversion of the standard curve equation, the corresponding reaction volume of the test solution had big difference. The absolute content of epoxy ethane in the unit product was 0.12 mg/set, 0.10 mg/set, 0.13 mg/set and 0.15 mg/set. Referring to GB/T 14233.1-2008 preparation and using the fuchsin sulfite solution after dark for 12 h,which can make more sensitive colorimetric reaction, the linearity was better.

fuchsin sulfite solution; colorimetry; ethylene oxide; determination of residue

胡芳(1984-)，女，碩士研究生，主管藥師，主要從事天然藥物活性成分分析、醫療器械及相關產品的理化檢測分析。

楊紅(1980-)，女，本科，副高級工程師，主要從事醫療器械及相關產品的理化檢測。

R187+.2

A

1001-9677(2016)010-0147-03