玫瑰花的組織培養研究

閆釗

摘要：主要以甘肅徽縣地區引進的良種“保加利亞”玫瑰作為研究對象進行試驗，結果表明，3月中下旬、6月10～25日這兩段時間最適宜采摘玫瑰外植體；枝條中部、上部這兩個部位最適合建立無菌體系；最佳的外植體擴繁培養基是交互使用0.1mg/LI-BA+MS+1.0mg/L BA.0.1mg/L 2，4-D+1.0mg/L BA+MS、0.2mg/L NAA+1.0mg/L BA+MS這三種培養基，而1/2M5+0.8～1.0mg/LIBA培養基是最適合生根的。只要通過科學煉苗，玫瑰花的移栽成活率可以超過90%。

關鍵詞：玫瑰花：組織培養：研究分析

玫瑰也被稱為刺玫瑰，是一種薔薇科薔薇屬植物，大概高2m左右的直立灌木，葉片像羽狀，玫瑰枝干比較粗壯，大概有5～9枚小葉，整個形狀為橢圓狀倒卵形或者橢圓形。玫瑰中含有很多天然礦物質（108種），而且富含很多種天然維生素以及清毒養顏成分，還具有人體必需的18種氨基酸，另外玫瑰的藥用價值也很高。因此玫瑰產業具有很好的發展前景，非常有必要探索玫瑰快速繁育技術，提高玫瑰組織培養效益的途徑。

1 材料以及方法

1.1 研究試驗材料

本次研究試驗材料選自甘肅徽縣地區從外引進的優良玫瑰苗，已經栽培了2年多。

1.2 試驗方法

每個試驗處理都采用單因子試驗方法，各試驗處理接種數量為10瓶，需要試驗2次。具體的試驗方法如下：①獲得外植體。隨機選取一些沒有病蟲害、健壯的玫瑰苗作為本次研究標的物，采用合理的殺菌脫毒處理培養措施后當作培養母株。外植體選擇2015年抽生的腋芽飽滿枝條或者3月中旬一直到7月下旬沒有萌發的1年生枝條。②建立無菌體系。及時把采摘的外植體材料送回實驗室，一定要將水分流失減少到最低限度，使材料保鮮，在流水狀態下沖洗9～10min，將水分濾干之后再把多余的枝葉等去除，然后剪成一段長1～1.5cm，并且上面有1～2個芽的莖段或者莖尖，一定要注意下切口應該斜剪，上切口平剪，將其放置于無菌瓶中，然后放在無菌臺上。進行接種前應該采用0.1%～0.2%HgCl₂溶液來浸泡材料，注意浸泡的時候千萬不能隨意晃動裝有外植體的無菌瓶，從而確保能夠完全消毒。消毒之后應該采用無菌水仔細沖洗7～8次，將材料表面上殘留的HgCl₂溶液徹底消除，把水分濾干之后放在培養基上接種培養。③培養條件。選擇在徽縣苗木組培中心進行試驗，調節光照強度為2000Lx，光照時間連續10～12h，培養室溫度保持在21±2℃。選擇的培養基應該添加葡萄糖20kg/L，瓊脂5.5kg/L，培養基的pH值為5.9。

2 試驗結果以及分析

2.1 外植體外部因素對于初代培養的主要影響

在3月5日～7月5日這段時間內，每隔5d在選定的玫瑰植株上采摘1次外植體，然后分別根據枝條上部、中部、下部進行相應的處理，放置在20kg/L葡萄糖+1.0mg/L BA+MS+瓊脂5.5kg/L的培養基中接種進行初代培養，連續觀察25d，并且詳細記錄。結果表明，3月中下旬、6月10日至25日這兩段時間最適宜采摘玫瑰外植體，把這段時間采摘的外植體帶回實驗室后通過相應的殺菌處理進行初代培養之后，具有很高的新芽抽生率，而且建立無菌體系的難度相對比較小，其中枝條中部、上部最適合建立無菌體系，通常情況下枝條下部的芽抽生速度相對比較慢，同時也出現嚴重的污染。

2.2 愈傷組織誘導受到不同激素的影響分析

根據不同的組織把在初代培養基上生長比較良好的無菌苗接種在添加幾種不同濃度激素的MS培養基中，連續觀察30d，詳細記錄相關數據。具體見表1。

根據表1中的觀察結果分析，愈傷組織自身的形態、質地對于器官發生部位及其能力具有決定性的作用，玫瑰莖尖組織、莖段組織在一定激素誘導下都可以生成愈傷組織，同時其周圍會冒出健康小芽，但是不管添加什么激素，玫瑰葉片都無法誘導出愈傷組織。其次，如果培養基中沒有添加激素，不管選用什么樣的玫瑰組織都無法誘導產生愈傷組織。0.5mg/L NAA培養基、0.1mg/L2，4-D+1.0mg/L BA培養基誘導玫瑰愈傷組織的效果相對良好，假如用作芽子的大量擴繁，最好是采用0.1mg/L 2，4-D+1.0mg/L BA組合培養基。

2.3 芽分化以及增殖采用不同培養基的影響

在無菌條件下在培養皿中隨機切取1.5cm長的莖段（帶有葉芽）、生長健壯的無菌材料莖尖，將其放置在1.0mg/L BA+MS培養基中接種，連續觀察10d后會發現開始萌芽，而且抽生出了新芽，待新芽生長到2cm，將其切下分別放置于1.0mg/L BA+MS+0.1mg/L2，4-D培養基（①）、1.0mg/L BA+MS+0.2mg/L 2，4-D培養基（②）、1.5mg/L BA+MS+0.1mg/L IBA培養基（③）、1.5mg/L BA+MS+0.5mg/L IBA培養基（④）、1.0mg/LBA+MS+0.2mg/L NAA 培養基（⑤）等幾種培養基中進行培養，前提條件是其他條件相同，連續觀察30d，詳細記錄結果，具體見表2。

從表2中分析可知，同等條件下，在相同時間內芽分化量較多，長勢良好的培養基為①、③、⑤，雖然②號培養基的芽分化較大，長勢也良好，但呈褐化；④號培養基芽分化量相對較少，而且芽長勢細弱。為此，玫瑰繼代增殖培養應該選擇①號、③號、⑤號培養基，而且交互使用這3種培養基的話有助于壯苗。

2.4 試管苗煉苗移栽

把健壯芽苗隨機切成2cm左右莖段（帶腋葉）或者莖尖放置在不同培養基中培養，連續觀察35d后發現沒有激素的MS空白培養基無法誘導生根，培養基中IBA濃度相對較低的話，玫瑰生根率也相對比較低，但是超過某濃度值，會對玫瑰生根產生抑制作用，最佳的IBA濃度在0.8～1.0mg/L之間。試管苗生長至2cm，苗高3cm多，根數有2條，而且長勢良好，葉片呈綠色的情況，在煉苗處理后就可以移栽。移栽的過程中一定要采用大量溫水將生根苗根系上的培養基徹底沖洗干凈，然后把玫瑰苗放在添加適量IBA溶液中可提高苗木移栽成活率。

3 結論

適當采用組織培養技術有利于玫瑰的快速繁育，建立玫瑰無菌體系的過程中一定要注意選擇合適的初代培養時間以及最佳的外植體培養部位。試管苗移栽成活率主要和煉苗方法以及煉苗時間有關。玫瑰組織培養過程中很容易出現苗邊葉黃化，不利于玫瑰組織快速繁育。發生玻璃化現象可能是因為培養瓶的濕度較高或者激素濃度過高。

（收稿：2016-03-24）