黃連對脾虛大鼠胃腸運動功能及胃動素、胃泌素的影響

楊紅蓮 段玉紅 錢笑音

摘要：目的 觀察黃連對脾虛大鼠胃腸運動功能及胃動素（MTL）、胃泌素（GAS）的影響，探討其“健胃”“敗胃”的量效機制。方法 采用勞形與勞神制作勞倦過度脾虛模型。60只SD大鼠隨機分為空白對照組、模型組、陽性藥組和黃連大、中、小劑量組，每組10只。各給藥組給予相應藥液灌胃，空白對照組和模型組給予生理鹽水灌胃，每日1次，連續14 d。觀察各組脾虛大鼠一般情況、胃腸運動功能及MTL、GAS含量。結果 與空白對照組比較，模型組大鼠胃內殘留率明顯升高，小腸推進率、MTL和GAS含量明顯降低（P<0.05，P<0.01）；與模型組比較，黃連小劑量組胃內殘留率明顯降低，小腸推進率、MTL和GAS含量明顯升高（P<0.05，P<0.01）；黃連大劑量組小腸推進率、MTL含量明顯降低（P<0.05）。結論 黃連大劑量“敗胃”、小劑量“健胃”，其量效機制可能與直接調節胃腸運動，或通過調節胃腸激素的分泌調節胃腸運動有關。

關鍵詞：黃連；脾虛；胃腸運動；胃動素；胃泌素；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.11.018

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2016）11-0075-03

Abstract： Objective To observe the effects of Coptidis Rhizoma on gastrointestinal motility functions， MTL and GAS in spleen-deficiency rats； To explore the dose-effect mechanism of “invigorating stomach” and “spoiling appetite”. Methods Fatigue and troublesome were used to establish exhausted spleen-deficiency models. 60 SD rats were randomly divided into blank control group， model group， positive medicine group， Coptidis Rhizoma high-， medium- and low-dose groups， with 10 rats in each group. Each medication group received relevant medicine for gavage， while the blank control group and model group received normal saline for gavage， once a day for 14 d. The general gastrointestinal motility functions， MTL and GAS of rats in each group were observed. Results Compared with blank control group， the gastric residual rate of model group was significantly higher； small intestinal propulsion rate， MTL， and GAS were significantly lower （P<0.05， P<0.01）. Compared with model group， the gastric residual rate in Coptidis Rhizoma low-dose group was significantly lower； small intestinal propulsion rate， MTL and GAS increased significantly （P<0.05， P<0.01）； small intestinal propulsion rate and MTL in Coptidis Rhizoma high-dose group were significantly lower （P<0.05）. Conclusion High-dose Coptidis Rhizoma leads to “spoiling appetite”， and low-dose Coptidis Rhizoma leads to “invigorating stomach”， which may be related to adjusting gastrointestinal motility directly or adjusting the secretion of gastrointestinal hormones.

Key words： Coptidis Rhizoma； spleen deficiency； gastrointestinal motility； MTL； GAS； rats

黃連始載于《神農本草經》，性味苦寒，其單方、復方及主要提取物被廣泛用于治療脾胃病。然而黃連治療脾胃病又有“小劑量健胃，大劑量敗胃”之說。黃連的“健胃”“敗胃”主要來自于“苦寒健胃”“苦寒敗胃”的說法。中醫認為小量苦寒藥能健益脾胃，使脾胃功能正常發揮。由于苦能燥濕，燥傷陰，陰傷則胃無以受納；寒能傷陽，陽傷則脾的運化功能受損。因而，大劑量苦寒藥可導致脾胃功能失調。以往的藥理研究結果表明，黃連“健胃-敗胃”的量效關系主要與其對胃腸動力的調節有關[1-2]。本實驗采用勞形與勞神法復制脾虛模型，探討不同劑量黃連對脾虛大鼠胃腸動力的影響，揭示黃連“健胃”“敗胃”量效的部分本質，為臨床合理運用黃連提供初步的實驗依據。

1 實驗材料

1.1 動物

2月齡SPF級健康SD雄性大鼠60只，體質量為（200±10）g，長春市億斯實驗動物技術有限責任公司，合格證號SCKK（吉）2014-0004，飼養于濕度45%～55%、室溫（23±2）℃環境下。

1.2 藥物

黃連，通遼市藥材公司，批號分別為20140612、20131209。黃連水煎液制備：精密稱取500 g黃連放入圓底瓶，加10倍量水，浸泡30 min，電熱套加熱，武火煮沸后文火煎煮1 h，收集上清液，藥渣加8倍量水煎煮1 h，收集上清液，藥渣加6倍量水，再煎煮1 h，收集上清液，合并濾液，旋轉蒸發儀減壓濃縮至500 mL，即藥液濃度為100%（相當1 g原藥材/mL）；多潘立酮片，西安楊森制藥有限公司，批號20120328。

1.3 主要試劑與儀器

胃動素（MTL）試劑盒，北京北方生物技術研究所；胃泌素（GAS）試劑盒，北京北方生物技術研究所。r-911全自動放免技術儀，中國科技大學中佳公司；TGL-20B型離心機，上海安亭科學儀器廠；電子天平，沈陽龍騰電子有限公司。

2 實驗方法

2.1 造模

參照文獻[3]方法，采用勞形與勞神制作勞倦過度脾虛模型。大鼠每日游泳至力竭，同時剝奪睡眠時間5 h，連續12 d。實驗期間觀察大鼠毛色、精神狀態、飲食、大便等一般情況，隔日稱重1次。

2.2 分組及給藥

大鼠適應性喂養1周，按體質量隨機分為空白對照組、模型組、陽性藥組及黃連大、中、小劑量組，每組10只。黃連大、中、小劑量組分別給予黃連藥液20、10、5 g/kg灌胃，陽性藥組給予多潘立酮水溶液5 g/kg灌胃，空白對照組和模型組給予等量生理鹽水灌胃。給藥體積均為10 mL/kg，每日1次，造模后第13日開始用藥，連續14 d。

2.3 指標檢測

2.3.1 大鼠胃內殘留率及小腸推進率測定 末次給藥后，所有大鼠禁食不禁水24 h，隨后用含5%炭末和2%CMC-Na的炭末混懸液2.5 mL灌胃，30 min后每只大鼠用1%戊巴比妥鈉1.2 mL麻醉，腹主動脈采血3 mL，分別用于制備血清和血漿。脫頸處死大鼠，剖開腹腔，將幽門至回盲部的一段腸管取出并測量其長度，此即小腸的總長度，然后測出炭末推進長度，即幽門部到炭末前沿的長度，計算小腸推進率（幽門部到炭末前沿的長度/小腸總長度×100%）；然后將大鼠胃賁門和幽門部兩端分別結扎并稱取胃全重，將胃體剪開（沿胃大彎），將胃內殘留物洗凈，濾紙拭干稱重，此即胃凈重，用胃全重減去胃凈重即得胃內殘留物質量，計算胃內殘留率[4][（胃全重-胃凈重）÷炭末混懸液灌胃總質量×100%]。

2.3.2 胃動素和胃泌素水平測定 大鼠腹主動脈采血4 mL，置于2只試管中，第1只管2 mL，3000 r/min離心10 min，分離血清，置于-20 ℃冰箱保存，待測血清GAS；第2只管預先加入10%EDTA-K2 30 μL、抑肽酶1000 U抗凝，2 mL血加入其中混勻，4 ℃、3000 r/min離心15 min，分離血漿，置于-20 ℃冰箱保存，待測血漿MTL。

3 統計學方法

采用SPSS16.0統計軟件進行分析。實驗數據以—x±s表示，多組間比較采用方差分析。P<0.05表示差異有統計學意義。

4 結果

4.1 一般狀況

空白對照組大鼠精神狀態良好，毛色有光澤，活動度佳，食量正常、大小便正常；模型組大鼠出現活動減少，拱背、瞇眼、被毛散亂無光澤、大便稀、攝食量減少、體質量減輕等脾虛癥狀；黃連大、中劑量組大鼠上述脾虛癥狀加重；陽性藥組和黃連小劑量組大鼠則食量增加，精神好轉，體質量增加。

4.2 黃連對脾虛大鼠胃內殘留率和小腸推進率的影響

與空白對照組比較，模型組胃內殘留率明顯升高、小腸推進率明顯降低（P<0.05，P<0.01）；與模型組比較，陽性藥組和黃連小劑量組胃內殘留率明顯降低（P<0.01），小腸推進率明顯升高（P<0.05），黃連大劑量組小腸推進率明顯降低（P<0.05）。結果見表1。

4.3 黃連對脾虛大鼠胃動素和胃泌素水平的影響

與空白對照組比較，模型組GAS、MTL水平明顯下降（P<0.01）；與模型組比較，陽性藥組和黃連小劑量組GAS、MTL水平明顯升高（P<0.05，P<0.01），黃連大劑量組MTL明顯降低（P<0.05），黃連中劑量組MTL、GAS有下降趨勢，但差異無統計學意義（P>0.05）。結果見表2。

5 討論

脾虛證指脾氣不足、失其健運所表現的證候，是脾胃證候中的常見證型，多因素體脾虛、飲食不節、勞累過度、情志不遂或久病耗傷脾氣所致。脾氣虛證以食少、腹脹、大便溏薄、神疲、肢體倦怠、舌淡脈弱等為常見證候[5]。根據其病因，目前造模方法很多，如苦寒瀉下法、飲食不節法、勞倦過度法、外濕困脾法。用大黃苦寒瀉下雖能塑造脾虛模型，但考慮苦寒藥物黃連對脾胃功能的影響，恐對實驗結果造成影響，故選用勞形與勞神相結合的勞倦過度法。此方法簡單易操作，且模型動物出現的癥狀與脾虛患者臨床表現相似。

近年來，已經有關于黃連“健胃”“敗胃”的實驗研究，如楊氏等[6]連續14 d給大鼠灌胃生黃連和黃連不同炮制品，結果顯示，生黃連組動物飲水量、飲食量、體質量均低于對照組，認為與黃連過服久服損傷脾胃有關。也有學者對黃連“健胃”“敗胃”的機理進行了探討，如有研究發現過量使用黃連組動物的胃排空及胃腸推進較正常動物減慢[1]。有學者用大劑量黃連給予大鼠連續灌胃，發現動物胃黏膜組織MTL含量顯著降低[2]。上述研究表明，黃連“健胃”“敗胃”與胃腸運動功能密切相關。胃排空實驗和小腸推進實驗是研究胃腸運動功能的基本實驗方法，胃內殘留率、小腸推進率及炭末排出時間是反映胃腸運動功能的基本指標。胃腸激素在調節胃腸運動中起重要作用。MTL屬消化間期激素，其生理功能是促進消化道運動，加速胃排空，對胃腸運動尤其消化間期移行復合運動有調節作用[7]。GAS主要促進胃酸分泌、胃竇收縮；促進胃蛋白酶和內因子分泌，對胃黏膜細胞有營養及增殖作用[8]。本實驗結果表明，模型組胃內殘留率明顯升高，小腸推進率明顯降低，MTL和GAS水平明顯降低；黃連大劑量組脾虛癥狀加重，胃內殘留率有升高趨勢，小腸推進率明顯降低，MTL顯著降低，黃連小劑量組脾虛大鼠精神狀態好轉，體質量增加，MTL、GAS顯著升高。本研究提示，黃連大劑量“敗胃”、小劑量“健胃”，其量效機制可能與直接調節胃腸運動，或通過調節胃腸激素的分泌間接調節胃腸運動有關。

參考文獻：

[1] 邱賽紅.常用苦寒藥過量使用對胃粘膜屏障功能影響的實驗研究[J].中國醫藥導刊，2007，9（2）：140-142.

[2] 李飛艷，邱賽紅，尹健康，等.常用苦寒藥對大鼠胃腸激素影響的研究[J].湖南中醫藥大學學報，2007，27（1）：9-11.

[3] 胡琳琳，高云芳，何志仙.三種脾虛證模型小鼠消化吸收功能改變的比較研究[J].中國中西醫結合雜志，2005，25（9）：813-816.

[4] 劉芬，劉艷菊，田春漫.蒼術提取物調節脾虛證大鼠胃腸動力障礙的作用機制研究[J].北京中醫藥大學學報，2014，30（12）：825-829.

[5] 國家技術監督局.中醫臨床診療術語[M].北京：中國標準出版社，1997：23-24.

[6] 楊偉鵬，王怡薇，王彥禮，等.吳茱萸汁炮制對黃連抗炎藥效和苦寒藥性的影響[J].中國中醫藥信息雜志，2013，20（8）：42-44.

[7] 周呂，柯美云.胃腸動力學[M].北京：科學出版社，1999：29-31.

[8] 朱憲彝.臨床內分泌學[M].天津：天津科技衛生出版社，1993：63.