瑞香狼毒抗癌作用研究進展

吳宏輝 李紅麗 王文全 侯俊玲

摘要：近年來動物實驗與臨床試驗均證實，瑞香狼毒在抑制腫瘤細胞增殖、誘導細胞凋亡、調控細胞周期、調節機體免疫系統等方面具有突出的防治腫瘤作用，并已從中分離出具抗癌活性的單體化合物。本文從抗癌活性成分、抗癌機制、臨床運用、不同炮制品對抗癌作用的影響、毒副作用5方面對狼毒抗癌作用進行綜述。

關鍵詞：中藥；瑞香狼毒；抗癌；綜述

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.11.034

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2016）11-0127-04

Abstract： In recent years， animal experiments and clinical trials have confirmed that Euphorbiae Ebracteolatae Radix has outstanding medicinal value of cancer prevention in the aspects of inhibition of tumor cell proliferation， inducing apoptosis， cell cycle regulation and regulation of immune. It also has been reported that monomeric compounds with function of anti-tumor activity have been separated. This article reviewed anti-cancer effects of Euphorbiae Ebracteolatae Radix from five angles， which were anti-cancer active ingredient， anti-cancer mechanisms， clinical application， the effects of different processed products on anti-cancer effects and side effects.

Key words： TCM； Euphorbiae Ebracteolatae Radix； anti-cancer； review

狼毒首載于《神農本草經》，為不常用品種。其國內同名異物品很多，主要有瑞香科、大戟科、天南星科等。仇氏等[1]考證認為，瑞香狼毒是狼毒正品，大戟科的狼毒大戟即蘆茹，月腺大戟為已消失的草蘆茹。目前市場上主流狼毒商品為瑞香狼毒Stellerachamaejasme L.或狼毒大戟Euphorbia fischeriana Steud.和月腺大戟Euphorbia ehracteolata Hayata的根。本文所述主要為瑞香狼毒，其味辛，性平，有毒，入肺、肝、脾經，有逐水祛痰、散結殺蟲功效，主治水腫腹脹，痰、食、蟲積，瘰疬，痰核，疥癬。歷代醫家根據“以毒攻毒”法，常用狼毒治療“癥瘕”“積聚”等類似現代癌癥的疾病[2]?，F代研究顯示了狼毒的抗癌作用，具有極大的藥用價值。茲就相關研究概述如下。

1 抗癌活性成分

早期研究顯示，狼毒抗癌活性成分主要是黃酮苷、蒽苷、樹脂及有毒的高分子有機酸[3]。近年研究表明，除上述成分外，二萜類、生物堿類、黃酮類及木脂素類等均有一定的抗癌作用。

1.1 二萜類

瑞香狼毒含有的二萜類化合物主要包括二萜原酯類化合物、尼地嗎啉及Stelleramacrin A、B[3]。其中尼地嗎啉因其具有較寬的抗癌譜和較強的抗癌活性而引起了國內學者的廣泛關注。之后的研究表明，與目前臨床常用的同樣植物來源的抗癌藥物長春新堿，以及公認具有最強抗癌活性化療藥物之一的阿霉素相比，尼地嗎琳發揮抗癌作用時的濃度較兩者均低[4]。但因尼地嗎啉有效劑量與毒性劑量接近，故降低了其開發利用的價值。

1.2 生物堿類

生物堿廣泛分布于于雙子葉植物中，大多具有較強生物活性。王氏等[5]提取了瑞香狼毒總生物堿，體外實驗表明瑞香狼毒總生物堿對體外培養的人胃癌細胞SGC-7901、人肝癌細胞BEL-7402和人白血病細胞增殖均有出較強的抑制作用，且與劑量呈正相關；在作用機制方面，流式細胞術檢測顯示總生物堿作用48 h后引起SGC-7901細胞凋亡且有明顯的G1期阻滯作用。目前關于瑞香狼毒生物堿類抗癌作用的研究較少，有待進一步分離純化并進行體內抗癌活性研究。

1.3 黃酮類

瑞香狼毒含有的黃酮類化合物有狼毒素，狼毒素A、B、C，新狼毒素A、B，異狼毒素，7-甲氧基狼毒素，狼毒素外消旋體，內消旋體異狼毒素及狼毒色原酮。研究表明，瑞香狼毒總黃酮提取物對體外培養的腫瘤細胞有較強的抑制作用，急性毒性較小，能顯著抑制小鼠移植性腫瘤S180和H22的生長，并呈現較好的劑量依賴性[6-7]。闞氏等[8]對瑞香狼毒抗癌活性成分進行篩選，發現雙二氫黃酮類對癌細胞有明顯抑制作用。汪氏等[9]分別對狼毒乙素和新狼毒素A進行抗癌效果評價，發現狼毒乙素對小鼠宮頸癌U14有顯著抑制作用，新狼毒素A對雄激素非依賴性前列腺癌有抗癌活性。

1.4 木脂素類

木脂素是一類由苯丙素氧化聚合而成的天然化合物，結構類型多樣，生物活性廣泛而顯著?，F已從瑞香狼毒中分離得到4種木脂素成分，其中3種是具有四氫呋喃并四氫呋喃型結構的化合物。王氏等[10]研究表明，瑞香狼毒總木脂素對體外培養的腫瘤細胞SGC-7901、HEP-7402和HL-60增殖及集落形成有較強的抑制作用，具有巨大的開發潛力。

1.5 狼毒多糖

迄今，國內學者對瑞香狼毒根部提取的多糖抗腫瘤作用研究較少。崔氏等[11]研究發現，狼毒多糖（ESP-AW1）可通過增強S180荷瘤鼠抗腫瘤免疫應答功能，抑制腫瘤細胞在體內轉移和復發。蔣氏等[12]研究顯示，狼毒多糖能抑制腫瘤細胞與內皮細胞的黏附，推測其可能具有抑制腫瘤細胞轉移的作用。

2 抗癌作用及其機制

2.1 肺癌

邢氏等[13]從超微結構水平對瑞香狼毒水提取物進行抗癌評價，發現細胞在各方面均有變化，揭示了瑞香狼毒水提取物對肺癌細胞有明顯的細胞毒作用。另外研究顯示，瑞香狼毒水提取物可降低人肺鱗狀細胞癌NCI-H520的Survivin蛋白表達水平，與腫瘤壞死因子聯用有明顯抑制作用[14-15]；并能增強肺癌耐藥細胞株對順鉑的敏感性，對肺癌耐藥具有一定的逆轉作用[16]。另外，從瑞香狼毒中提取到的1，5-二苯基-1，1-戊酮，對人肺癌細胞NCI-H446[H446]克隆形成有抑制作用，且可明顯減少端粒酶的數量[17]。

2.2 肝癌

有研究將含瑞香狼毒水提物的藥物血清處理人肝癌SMMC-7721細胞后，經體外培養，細胞增殖受到明顯抑制；而使用Western blot法測定表明，瑞香狼毒藥物血清能下調Survivin和血管內皮生長因子蛋白表達，推測其可能是抑制SMMC-7721細胞增殖的機制之一[18]。吳氏[19]研究發現，瑞香狼毒總黃酮可阻滯細胞周期，使人肝癌SMMC-7721細胞停滯在G2/M期，其機制可能與上調Caspase-3有關。從瑞香狼毒中分離出藥效組分Zp1111對肝癌細胞也有增殖抑制作用，且還能誘導細胞凋亡，使細胞周期阻滯在G1期，故推測其作用機制可能與抑制CDK2和上調Bax有關[20]。

2.3 膀胱癌

毛氏等[21]體外細胞實驗研究表明，瑞香狼毒抑制人膀胱癌T24細胞增殖具有巨大的研發潛力。申氏等[22]研究表明，瑞香狼毒水提物能抑制膀胱癌T24細胞增殖，且抑制效應呈劑量依賴性，隨時間延長而逐漸升高。同時瑞香狼毒水提物能促進T24細胞凋亡，使T24細胞中Survivin蛋白表達下降。B淋巴細胞瘤/白血病-2（Bcl-2）是Bcl-2基因家族最重要的抗凋亡基因，其表達高低與膀胱癌發生發展有關。周氏等[23]研究發現，瑞香狼毒水提取物可通過減少Bcl-2的表達而抑制人膀胱癌Biu-87細胞增殖，促進凋亡；且與藥物濃度、作用時間呈正相關。

2.4 胃癌

焦氏等[24]采用血清藥理學方法探討瑞香狼毒水提物的抗癌機理，發現不同劑量、不同時間瑞香狼毒水提物小鼠的藥物血清處理腫瘤細胞后，其噻唑藍轉化率和克隆形成率均顯著降低，且給藥2 h后藥物血清表現出更強的抑制腫瘤細胞增殖作用。有報道，瑞香狼毒水提物除具有增強機體非特異性免疫功能外，還能增強機體的耐藥性，在濃度為0.25 mg/mL時能部分逆轉人胃癌SGC7901/ADM對阿霉素（ADM）的耐藥性[25]，具有較大的開發前景。

2.5 惡性黑色素瘤

王氏等[26]研究表明，瑞香狼毒提取液對惡性黑色素瘤B16細胞抑制作用隨藥物濃度升高而增強，作用24 h后，可誘導B16細胞凋亡。Western blot分析顯示，瑞香狼毒通過下調Bcl-2表達水平并上調Bax表達，導致癌細胞凋亡和降低細胞存活率。另有報道，瑞香狼毒提取物能顯著抑制B16細胞生長，并抑制其肺轉移。由此認為抗癌轉移效果可能部分與其下調促轉移因子p-Akt及上調抑癌轉移因子PTEN表達有關[27]。

3 臨床研究

王氏等[28-29]采用光動力學療法并區適行調強（PDT/IMCRT）與中藥瑞香狼毒不同策略的整合治療，通過中藥的優化同步中醫藥輔助方案，可達到減毒增效帶瘤生存目的，結果逆向調強放療（IMRT）聯合熱療及中藥狼毒水提液外用組比單純IMRT組和IMRT聯合微波熱療組有效率明顯提高。因此認為，IMRT聯合熱療、中藥瑞香狼毒水提液外用能更有效控制皮膚癌發展。王氏等[30]觀察了三維適形放射治療（3DCRT）、熱療聯合瑞香狼毒灌注綜合治療對中晚期肺癌的臨床療效，放療量效關系，以及熱療次數與療效關系。結果3DCRT、熱療聯合瑞香狼毒灌注綜合治療組能更有效控制腫瘤發展，在患者身體可耐受前提下，放射劑量與療效呈正相關，內生場治療次數與療效呈正相關。段氏等[31]臨床試驗顯示，瑞香狼毒輔助治療非小細胞肺癌在臨床上能取得更好的近期治療效果。

4 不同炮制品抗癌作用

狼毒生品藥性峻烈，毒副作用大，常須炮制而減其毒性后使用。程氏等[32]實驗表明，醋制狼毒提取物可不同程度抑制4種人癌細胞株增殖，其中石油醚部位抑制作用最強，對SMMC-7721、HepG2、H460細胞株增殖抑制率分別為81.08%、80.39%和89.81%，乙酸乙酯部位的抑制作用次之，抑制率分別為79.06%、78.36%和67.33%。馬氏等[33]發現瑞香狼毒酒制之后抗腫瘤活性較生品高，其中低、中劑量酒制瑞香狼毒抑瘤率分別為98.40%和87.16%，生狼毒組抑瘤率為69.45%。與生狼毒對照組相比，各組酒制瑞香狼毒Bax灰度值升高，Bcl-2灰度值下降。故認為相較于生品，酒制瑞香狼毒對荷瘤小鼠的抑瘤率提高，作用機制可能為Bax表達明顯上調，Bcl-2表達逐漸下調。

5 毒副作用

《神農本草經》列狼毒為下品，有大毒?！侗静菥V目》也認為狼毒“有大毒”。申氏等[34]用狼毒水提物和醇提物對小鼠進行毒性實驗，以測定其半數致死量。結果水提物為275.90 g/kg，其95%可信區間（CI）為238.90～318.70 g/kg；醇提物為171.96 g/kg，其95%CI為112.78～262.22 g/kg。提示瑞香狼毒毒性及副作用不大。另外，小鼠急性毒性實驗表明，狼毒大戟有毒成分主富集于超臨界二氧化碳部位，且毒性較低[34]。其半數致死量為2.05 g/kg，95%CI為1.77～2.37 g/kg。王氏等[35]對瑞香狼毒中9個單體化合物體外細胞毒性進行了研究，發現狼毒色原酮、異狼毒素表現出較弱的細胞毒性；且除石油醚和多糖提取物外，瑞香狼毒生品各溶劑提取物均呈現不同程度的抗腫瘤活性和細胞毒性，并呈藥物劑量依賴性。

有報道，炮制后，狼毒在保留一定程度抗腫瘤活性的基礎上，其相應各溶劑提取物的細胞毒性均降低，毒性排列順序為姜礬制品<醋制品<生品[36]。

6 小結

國內外有關狼毒的研究進行了多年，實驗研究和臨床均顯示其有抗癌作用，且從中也分離出多種有抗癌活性的化學成分。已有的實驗研究表明，狼毒含有多種抗癌成分，其作用機制大致可分為4類：①對癌細胞的細胞毒作用；②協同誘導細胞凋亡；③抑制增殖、阻滯細胞周期作用；④抑制癌細胞轉移作用。

雖然國內學者對狼毒抗癌的機理進行了探索，但因癌癥病情變化多樣、機理復雜等因素，至今仍未有明確解釋。不斷發現的新成分抗癌活性也有待進一步確定。另外，現有研究大多關注于狼毒生品，對不同炮制品抗癌作用和毒性的研究較少。臨床上的中藥大多為配伍使用，而目前多數研究都只關注單味狼毒的抗癌作用，對含狼毒復方的研究鮮有報道。另外，有關狼毒的毒理研究仍不夠深入，而其抗癌有效劑量與中毒劑量較為接近，限制了臨床運用。

筆者認為，今后相關研究應著重以下幾點：①中藥作用具有多成分多靶點的特性，可建立符合中醫特色的“抗癌中藥癌癥作用機理實驗動物模型”評價狼毒抗癌作用；②中藥的臨床使用常為復方，應加強對含狼毒復方抗癌作用機制的研究，同時應重視協同提高機體免疫能力的研究；③狼毒為有毒中藥，對其抗癌作用研究應采取藥效與毒性相結合的研究方法，比較研究生品和不同炮制品的毒性成分的抗癌效果，建立科學的存效脫毒（減毒）方法；④以中醫理論為基礎，以療效為中心，確定狼毒“量-效”關系，同時聯合使用現代醫學手段，開展狼毒抗癌療效及機制研究。以上4點相結合可作為今后狼毒研究的有效方法。

參考文獻：

[1] 仇立波，孫忠人，王佳妮，等.狼毒考證集萃[J].四川中醫，2012，30（9）：52-54.

[2] 任小巧，高增平，穆麗莎，等.中藥新藥毒性與抗癌效應研究[J].中醫學報，2015，30（1）：7-9.

[3] 李旺，張淑萍.中藥狼毒抗癌作用研究概況[J].張家口醫學院學報， 2004，21（1）：76-80.

[4] 馮威健，吉田光二，池川哲郎.瑞香狼毒提取物尼地嗎啉與長春新堿和阿霉素體外抗癌活性的比較[J].癌癥，1994，13（6）：503-505.

[5] 王敏，王學習，賈正平，等.瑞香狼毒總生物堿的抗腫瘤活性和機理研究[J].中藥材，2010，33（12）：1919-1922.

[6] 王敏，賈正平，馬駿，等.瑞香狼毒總黃酮提取物的抗腫瘤作用[J].中國中藥雜志，2005，30（8）：603-606

[7] 吳曉亮，韓敏，劉曉松，等.不同瑞香狼毒提取物對肝癌細胞的抑制作用[J].畜牧與飼料科學，2009，30（9）：5-6.

[8] 闞曉溪，王志鑫，楊乾栩，等.瑞香狼毒醇提物的抗腫瘤活性研究[J].中國中藥雜志，2013，38（8）：1219-1225.

[9] 汪群紅，陳雪芬，胡敏，等.狼毒乙素和新狼毒素A的抗腫瘤作用[J].中華中醫藥學刊，2013，31（11）：2359-2361.

[10] 王彬，賈正平，蔡文清，等.瑞香狼毒總木脂素的體外抗腫瘤活性[J].蘭州大學學報，2008，44（2）：63-65.

[11] 崔立然，徐浩，劉吉成，等.狼毒多糖對S180荷瘤鼠免疫功能的調控作用[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（2）：255-258.

[12] 蔣麗艷，張威，于智浦，等.狼毒多糖對腫瘤與內皮細胞粘附的影響[J].齊齊哈爾醫學院學報，2015，36（5）：628-629.

[13] 邢立強，李旺，李鴻君，等.瑞香狼毒提取物對肺癌細胞超微結構的影響[J].時珍國醫國藥，2007，18（8）：1844-1845.

[14] 邢立強，李旺，孫黎，等.瑞香狼毒提取物逆轉肺癌細胞耐藥的免疫組化研究[J].陜西中醫，2007，28（4）：500-501.

[15] 邢立強，趙建清，李旺，等.瑞香狼毒提取物和腫瘤壞死因子對肺癌基因蛋白表達的影響[J].時珍國醫國藥，2007，18（6）：1323-1324.

[16] 李鴻君，邢立強，李旺，等.瑞香狼毒水提取物對肺腺癌細胞株耐藥及凋亡的影響[J].河北醫藥，2013，35（6）：823-825.

[17] 劉芳，劉華，孫黎，等.瑞香狼毒提取物作用于人肺癌細胞NCI-H446[H446]后端粒酶的定量表達[J].河北北方學院學報（醫學版）， 2008，25（3）：27-29.

[18] 李霞.瑞香狼毒藥物血清誘導人肝癌細胞SMMC-7721凋亡的分子機制研究[D].呼和浩特：內蒙古農業大學，2010：24-27.

[19] 吳曉亮.瑞香狼毒總黃酮的提取及其抑制肝癌SMMC-7721細胞機理的研究[D].呼和浩特：內蒙古農業大學，2010.

[20] 潘國鳳，楊慶，劉安，等.瑞香狼毒藥效組分誘導人肝癌細胞凋亡及對細胞周期依賴性蛋白激酶CDK2的影響[J].中國藥理與臨床，2011，27（5）：41-45

[21] 毛剛，王健，陳國俊，等.瑞香狼毒水提物小鼠血清對人膀胱癌T24細胞增殖的影響[J].中國醫藥導報，2010，7（16）：16-17.

[22] 申彥，李建文，張雁鋼，等.瑞香狼毒水提取物對人膀胱癌T24細胞Survivin表達的影響[J].中國醫藥導報，2012，9（10）：20-32.

[23] 周維，劉屹立.瑞香狼毒水提取物對人膀胱癌Biu-87細胞Bcl-2表達的影響[J].世界中西醫結合雜志，2015，10（3）：338-341.

[24] 焦效蘭，賈正平.瑞香狼毒水提物小鼠藥物血清對人胃腺癌SGC-7901細胞增殖的影響[J].中成藥，2002，24（3）：196-197.

[25] 高煒.瑞香狼毒抗胃癌療效機制研究[D].青島：青島大學，2009：17.

[26] 王莉平，王義善，張國營，等.狼毒對惡性黑色素瘤細胞生長的影響及其分子作用機制的研究[J].時珍國醫國藥，2011，22（5）：1133-1135.

[27] 王園園，王義善，楊桂青，等.狼毒提取液對小鼠惡性黑色素瘤B16細胞體內轉移能力的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（1）：195- 198.

[28] 王義善，王欽文，賈喜鳳，等.PDT/IMCRT同步中藥治療中晚期腫瘤的臨床研究[J].醫學研究雜志，2008，37（10）：28-31.

[29] 王義善，王莉平，胡蓉蓉，等.IMRT聯合熱療、狼毒水提液外用治療皮膚癌56例臨床分析[J].陜西醫學雜志，2010，39（1）：83-84.

[30] 王莉平，王義善，胡蓉蓉，等.185例例肺癌保守綜合治療的臨床研究[J].中國民族民間醫藥，2009，24（15）：81-83.

[31] 段昕，賈春.瑞香狼毒治療肺癌的臨床研究[J].吉林醫學，2012， 33（12）：2545-2546.

[32] 程林兵，楊光明，李俊松，等.狼毒生品及炮制品的體外抗腫瘤活性研究[J].西北藥學雜志，2014，29（2）：152-156.

[33] 馬曉莉，劉晉芝，曹松云，等.酒制瑞香狼毒對荷瘤小鼠抑瘤作用及機制的實驗研究[J].中成藥，2013，35（6）：1143-1147.

[34] 申屠瑾，魏品康，韋潔芬，等.狼毒對小鼠移植性腫瘤的影響[J].中西醫結合雜志，1984，4（1）：46.

[35] 王玉華，孫夏，孫麗君，等.蒙藥材瑞香狼毒體外細胞毒性的研究[J].中國醫藥生物技術，2012，7（1）：9-13.

[36] 胡爽，劉峰，陳美言，等.不同炮制品瑞香狼毒藥材急性毒性試驗研究[J].安徽農業科學，2015，43（9）：84-85.