淺探快速尿細菌培養方法的建立

張艷霞 長沙市中醫醫院（長沙市第八醫院） （湖南 長沙 410199）

淺探快速尿細菌培養方法的建立

張艷霞 長沙市中醫醫院（長沙市第八醫院） （湖南 長沙 410199）

尿路感染是人類最常見的感染之一，是尿道內有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥，通常伴隨有菌尿和膿尿?？砂l生于各個年齡段的人群。典型的臨床表現為發熱、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難和恥骨上壓痛，臨床表現可因患者的年齡和健康狀況不同而異。診斷尿路感染最常用的方法是進行尿液標本的細菌學檢查，而傳統的細菌培養方法需要3～4d才能出鑒定藥敏結果。在藥敏結果出來之前，醫生只能根據經驗用藥，這就增加了醫生對患者病情掌握的不確定性。目前臨床微生物鑒定藥敏試驗的方法有兩種，第一種方法是沿用100多年前由Gram、Pasteur、Koch及Petri等創造的傳統的微生物學鑒定方法。用常規的手工方法即通過細菌的形態、生理、生化性狀等對細菌進行分類鑒定，并用紙片法進行藥敏試驗。目前使用最廣泛的方式，但過程繁瑣，費時費力。另一種方法是借助商品化的鑒定系統，免除了繁瑣的手工操作，通過細菌在反應板上的生化反應自動判讀結果，確定細菌種類。因操作較為簡單，功能齊全，而市場上此類儀器也較多，也已大量應用于臨床，但整個鑒定藥敏時間仍需3～4d。而臨床醫生在往往在治療患者的過程中，更多的是關注革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌或真菌及其藥敏，而非細菌具體種類。

1.目的

通過自動微生物分析系統，優化細菌培養條件，尋找一種快速而準確的尿培養及細菌鑒定、藥敏方法，從而在24～48h內報告細菌鑒定藥敏結果。提高時效的同時，準確率較高，為醫生提供及時可靠的診斷依據。

2.方法

2.1 定制微生物鑒定藥敏卡片

結合自動微生物藥敏分析系統，采用96孔板定制微生物鑒定藥敏卡片，分為革蘭染色陽性球菌藥敏卡片、革蘭染色陰性桿菌藥敏卡片、真菌鑒定藥敏卡片。結合臨床常用抗生素的使用并充分考慮其MIC，如：革蘭染色陰性

桿菌藥敏卡片的藥物包括AMP、AMC、PIP、TZP、MEM、ATM、CXM、FEP、CAZ、CRO、CFP、CSL、FOS、AMK、SXT、NIT、LVX、TGC，主要涉及的細菌含腸桿菌科細菌、銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌以及其他非發酵菌。革蘭染色陰性桿菌藥敏卡片的藥物包括AMP、AMC、PIP、TZP、MEM、ATM、CXM、FEP、CAZ、CRO、CFP、CSL、FOS、AMK、SXT、NIT、LVX、TGC，并充分考慮可能的MIC。主要涉及的細菌含腸桿菌科細菌、銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌以及其他非發酵菌。

2.2 細菌培養鑒定及藥敏試驗操作步驟

①按照《全國臨床檢驗操作規程》要求，取中段尿10mL置于15mL離心管中，接種血平板、中國藍平板，將平板置于CO2濃度為5%的、溫度為37?C的培養箱中培養；②將標本以4000r/min離心10min，棄上清，取底層0.2mL尿沉渣加入裝有5mL肉湯培養基的小培養瓶中，混勻，置于220r/min、37?C的振蕩培養箱中培養8h；③取出離心管，4000r/min離心10min，取少許沉渣涂片，革蘭染色并鏡檢，并初步報告鏡檢結果，如無菌生長、革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌、真菌等；④根據鏡檢結果選著藥敏卡片，并按標準操作規程操作藥敏試驗，置于37?C培養箱12h后上機檢測；⑤取血平板、中國藍平板上生長細菌染色鏡檢，并判斷是否與之前結果一致。如一致，報告藥敏結果。如不一致，取平板上分離出的細菌再進行藥敏。

3.結果

在培養8h后，能初步判斷細菌革蘭染色情況，在24h內報告細菌革蘭染色情況及藥敏結果。如前后革蘭染色結果不一致，則48h內報告鑒定藥敏結果。

4.結論

尿路感染在藥敏結果報告之前，往往是臨床醫生根據經驗用藥，容易造成誤用從而影響治療效果。通過改良試劑、耗材、操作步驟等從而縮短藥敏報告時間，很多程度依靠于藥敏試驗，這種改良的快速尿細菌培養方法相比傳統鑒定藥敏方法，能縮短鑒定藥敏藥敏時間，為臨床提供有價值診斷依據。但在具體的操作過程中，影響因素較多，如留取操作不規范，污染標本；標本內細菌總量不一致，影響8h時結果判斷。

1006-6586(2017)16-0022-02

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2017-06-16