三萜皂苷分離純化方法的研究進展

劉克明，佟繼銘，劉永平，聶 佳

（承德醫學院中藥研究所/河北省中藥研究與開發重點實驗室，河北承德 067000）

三萜皂苷分離純化方法的研究進展

劉克明，佟繼銘，劉永平△，聶 佳

（承德醫學院中藥研究所/河北省中藥研究與開發重點實驗室，河北承德 067000）

三萜皂苷；分離純化；工藝

1 三萜皂苷分離純化的傳統方法

1.1 分段沉淀法 皂苷難溶于乙醚、丙酮等有機溶劑，可將粗提皂苷先溶于少量甲醇或乙醇中，再逐漸滴入乙醚、丙酮等，邊加邊搖均勻，皂苷即被析出；也可重復操作幾次，逐漸降低溶劑的極性，將不同極性的皂苷分批次沉淀出來，從而達到分離的目的。蘇永昌等[4]采用分段沉淀法分離純化了海參皂苷，并與其它方法相結合，提高了海參皂苷的純度。分段沉淀法雖然操作簡便，但難將皂苷分離完全，不易獲得皂苷純品。

1.2 膽甾醇沉淀法 由于皂苷能與膽甾醇生成難溶的分子復合物，故可將此性質用于皂苷的分離。先將粗提皂苷依次溶于少量乙醇和膽甾醇飽和的乙醇溶液中，直到沒有沉淀析出為止，然后濾取沉淀，用水和有機溶劑依次洗滌，以除去相應的雜質，最后用乙醚回流提取干燥后的沉淀，使皂苷分離出來。1960年，Wagner和Bosse運用膽甾醇沉淀法發現七葉皂苷以α-七葉皂苷和β-七葉皂苷兩種形式存在[5]。膽甾醇沉淀法中三萜皂苷與膽甾醇形成的復合物不如甾體皂苷與膽甾醇形成的復合物穩定，操作也較復雜，現已很少使用。

1.3 溶劑分離法 在中草藥提取液中加入另一種溶劑，以改變混合物溶劑的極性，使一部分物質沉淀析出，可達到分離的目的，其中成分在兩相溶劑中分配系數相差越大，則分離效率越高。羅晨曲等[6]采用溶劑分離法，以95%乙醇：汽油(10:4)對制得的甘草酸粗品冷卻提取，并用4倍量冰醋酸在60℃進行熱熔等步驟，得到甘草酸鉀鹽精品(甘草甜素)，收率提高了10.2%。溶劑分離法具有選擇性好、操作簡便、快速的優點。

1.4 泡沫分離法 由于皂苷具有良好的起泡性，根據表面吸附的原理，可以通氣鼓泡在液相中形成的氣泡為介質，對液相中的溶質進行分離。王玉堂等[7]用正丁醇與乙酸乙酯作浮選溶劑，采用泡沫分離法中的動態泡沫浮選法，對二醇型人參皂苷Rb1、Rc、Rb2和Rd具有很好的富集效果，回收率均大于90%。泡沫分離法操作雖靈活多樣，但對分離純化的樣品有選擇性。

2 三萜皂苷分離純化的新技術

2.1 大孔樹脂柱色譜法 大孔樹脂柱色譜法是近年來用于分離極性較大化合物的一種常用方法，將中藥提取物的水溶液通過大孔樹脂柱吸附其中的有效成分，先用水沖洗，以除去水溶性雜質，然后用不同濃度的乙醇依次從低至高進行沖洗，最后按不同濃度進行分裝并回收樣品。陳勇等[8]采用AB-8型和D-101型大孔樹脂柱色譜法分離純化柴胡總皂苷，并運用高效液相法測定兩種方法中柴胡皂苷的含量，得出AB-8型大孔樹脂柱色譜法是分離純化柴胡皂苷的最佳工藝。該種方法的優點是大孔樹脂柱色譜吸附容量大，使用周期長，適用于皂苷的初步分離和精制。

2.2 吸附柱色譜法 根據吸附柱色譜所用吸附劑性質的不同，吸附柱色譜可分為正相吸附柱色譜和反相吸附柱色譜，常用硅膠作為正相吸附柱色譜的吸附劑，樣品上柱后，以不同比例的混合溶劑進行梯度洗脫；反相色譜柱固定相為非極性的色譜柱，通常以鍵合相硅膠Rp-18、Rp-8或Rp-2等為填充劑。冷晶等[9]采用硅膠柱色譜法進行分離純化，然后將其洗脫液經過ODS柱對甘草中三萜皂苷進行分離純化，得到兩個單體化合物。邢倩倩等[10]采用親水/反相二維色譜法分離純化桔梗中的三萜皂苷，先用水煮醇沉和反相/親水兩種模式進行固相萃取，然后過XAmide色譜柱，在6-25min之間就能得到20個三萜皂苷的精細組分。

硅膠柱色譜法操作方便，分離精度高，適用于分離度差別較大的化合物；反相色譜柱需要相對應的反相薄層色譜做檢識，適用于復雜樣品中三萜皂苷的分離純化，分離效率高，重現性好。

2.3 高效液相色譜法 高效液相色譜法是目前分離皂苷類化合物常用的一種方法，將液體作為流動相，使用高壓輸液系統，以不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱中，在柱內各成分得到分離，并進入檢測器進行檢測。一般采用反相色譜柱對皂苷進行分離純化。周淵等[11]運用反相高效液相色譜法(HPLC)和二極管陣列檢測器(DAD)，以乙腈和水作為流動相，對反碳18柱進行梯度洗脫，建立了同時測定毛冬青根中的六種活性化合物(其中包括三萜皂苷類化合物)的方法，且總回收率在99%以上。張志鋒等[12]采用高效液相色譜同時測定白花刺參中兩種新的三萜皂苷，10批白花刺參藥材中刺參苷J的含量為0.508%-1.308%，刺參苷N的含量為0.359%-0.838%。高效液相色譜法的優點是分離效率高、選擇性好、應用范圍廣，適用于分子量大、不同極性的有機化合物。

2.4 分配柱色譜法 分配柱色譜法又稱液-液色譜法，利用被分離的各組分在不相溶的固定相和流動相中不同的溶解度，在樣品組分隨流動相移動、通過色譜柱的過程中，組分在兩相中不斷地建立、打破和重新保持平衡，因各組分分配系數不同，在柱中經多次分配平衡后產生了差速遷移，從而得到分離。孟大利等[13]采用分配柱色譜法等分離手段對牛膝的化學成分進行分離、鑒定，得到5個化合物，其中就含有三萜皂苷。分配柱色譜法的優點是穩定性高，適用于各種類型的樣品。

2.5 凝膠色譜法 凝膠色譜法主要用于高聚物的相對分子質量分級分析，以及相對分子質量分布測試。分子量大小不同的各成分在通過凝膠床時，按分子量大小依次排序，凝膠表現出分子篩效應，在不同濃度的溶劑進行洗脫時，各成分按分子量遞減的次序被洗脫，不同分子量的皂苷先后被洗脫下來。崔月花等[14]運用凝膠色譜法結合其它方法，從靈芝發酵液中分離得到靈芝三萜皂苷，純度可達94.45%。凝膠色譜法的優點是操作簡便，不需要使用有機溶劑，對高分子物質有很好的分離效果。

2.6 薄層色譜法 薄層色譜法是通過吸附實現分離的方法，利用各成分對相同吸附劑吸附能力的不同，在移動相(溶劑)流過固定相(吸附劑)的運行過程中不斷吸附、解吸附，從而使各成分相互分離。佟昕等[15]運用薄層色譜法對乳香中的三萜皂苷類成分進行鑒別和含量測定，結果：乳香TLC圖譜中，ALBA斑點清晰可見，分離效果好，且回收率高達96.1%。薄層色譜法的優點是展開時間短，分離能力強，適用于定性實驗。

2.7 高速逆流色譜法 高速逆流色譜(HSCCC)是一種連續高效的液-液分配色譜分離技術，不借助任何固態作為載體，物質的分離依據其在兩相中分離系數的不同而實現，可避免因不可逆吸附引起的樣品損失、變性、失活等情況，適合于天然生物活性成分的分離。張敏等[16]采用高速逆流色譜(HSCCC)法分離純化人參中的總皂苷，最后依據人參總皂苷在兩相中分配系數不同實現分離，得到3個單體皂苷和1個混合物組分，純度高達95%以上。高速逆流色譜法的優點是簡便、快速，能節省溶劑。

2.8 色譜聯用技術 采用色譜法分離三萜類化合物常將聯合應用多種色譜法。付文衛等[17]采取聯用幾種色譜的方法對桔梗中的三萜皂苷進行分離純化，在乙酸乙酯萃取的基礎上，經大孔樹脂柱色譜法分離，所得提取物再經硅膠柱色譜法和硅膠柱分配色譜法進行分離，最后運用高效液相色譜法分離，得到5個三萜皂苷類化合物。幾種色譜法聯合使用能充分發揮每種方法各自的優勢，使分離純化的純度顯著提高。

3 展望

三萜皂苷是一類具有明顯藥理活性的化合物，具有多種藥用價值和研究意義[18]。隨著科學技術的發展和各種新技術的應用，三萜皂苷的分離純化工藝將不斷得到完善和創新。今后，應注意從以下幾個方面加強研究工作：⑴由于不同的分離純化方法對不同藥物有效成分的分離有差別，應根據實際需要和三萜皂苷的性質靈活運用；⑵三萜皂苷的分離純化不僅應快速、高效，而且應向節省能源和產業現代化方向發展；⑶三萜皂苷在衛生、醫藥和食品領域有著廣闊的應用前景，但其在活性機理、代謝和生物轉化等方面的研究仍存在著較多問題。因此，加強三萜皂苷類成分藥物在體內的藥動學研究對于食品和藥物的安全性均有重要意義。

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R962

A

1004-6879（2017）02-0154-03皂苷(Saponin)廣泛分布于自然界，包括三萜皂苷和甾體皂苷，其中苷元為三萜的皂苷稱為三萜皂苷。多數三萜類化合物是由一類基本母核為30個碳原子組成的萜類化合物，其結構根據異戊二烯定可看作是由6個異戊二烯單位聚合而成，是一類非常重要的中藥化學成分[1]。某些三萜皂苷因具有抗炎、抗菌、抗癌、溶血、抗病毒、降低膽固醇等多種生理活性，使其在醫藥、衛生等方面有著巨大的應用潛力，近年來成為人們關注的熱點[2-3]。通過查閱相關文獻，本文對三萜皂苷分離純化工藝進行了歸納總結，并對各種工藝進行了對比分析。

2016-07-14）