鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp450s的 影響

任 紅，劉 冬，鄭少杰，嚴弋敬，孫海燕,*，明 建,*

（1.西南大學食品科學學院，重慶 400715；2.深圳職業技術學院 深圳市發酵精制檢測系統重點實驗室，廣東 深圳 518055）

鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp450s的 影響

任 紅1,2，劉 冬2，鄭少杰1，嚴弋敬2，孫海燕2,*，明 建1,*

（1.西南大學食品科學學院，重慶 400715；2.深圳職業技術學院 深圳市發酵精制檢測系統重點實驗室，廣東 深圳 518055）

為探究鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp450s的影響，采用實時熒光定量反轉錄聚合酶鏈式反應法和Western blot法評價鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2c37 3 種酶的mRNA和蛋白表達。結果顯示，與空白對照組相比，低劑量鐵觀音多酚提取物（150 mg/（kg·d））能顯著誘導Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2c37的mRNA表達（P＜0.05），同時顯著誘導Cyp2d22蛋白的表達，但對Cyp3a11蛋白表達無明顯作用，對Cyp2c37蛋白表達呈現顯著抑制作用；中劑量（300 mg/（kg·d））能顯著抑制Cyp3a11、Cyp2c37的mRNA和蛋白表達（P＜0.05），而對Cyp2d22的mRNA和蛋白表達無顯著影響；高劑量（600 mg/（kg·d））對3 種酶的mRNA表達無顯著影響，但對3 種酶的蛋白表達呈顯著抑制作用（P＜0.05）。結果表明鐵觀音多酚提取物能夠影響小鼠肝Cyp3a11、Cyp2d22和Cyp2c37的表達，揭示了鐵觀音多酚提取物與藥物合用時產生的代謝性藥物相互作用。

鐵觀音茶；多酚提取物；Cyp450；mRNA；蛋白表達

茶葉在我國有數千年的栽種和飲用歷史，現已作為世界公認的保健型飲料。茶葉的保健作用主要來源于其所含的主要生物活性物質——茶多酚[1]。茶多酚占茶葉干質量的15%～30%，主要由兒茶素、黃酮類、酚酸類、花色素四大類物質組成[2-3]。茶葉按照發酵度與制法，分為六大類，即綠茶、黃茶、白茶、烏龍茶、紅茶和黑茶，其中烏龍茶屬半發酵茶，福建安溪鐵觀音是烏龍茶中最著名的品種之一[4-5]。

茶多酚主要在肝臟中由肝細胞內滑面內質網上的肝藥酶進行代謝，肝藥酶又稱細胞色素P450酶（CYP450s），是參與多種內源性及外源性物質在體內轉化的混合功能氧化酶系統，其中涉及體內大多數藥物代謝的主要3 個基因家族為CYP1、CYP2、CYP3，最主要的蛋白亞型有CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9等，大約占CYP450s氧化酶含量的30%、2%和20%，分別介導了臨床藥物約50%、30%、10%的代謝過程[6-8]。小鼠和人的藥物代謝酶的基因具有同源性，即小鼠肝Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2c37分別相當于人肝CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9的表達[9-10]。

國內外大量研究表明，茶多酚作為一種生物活性物質，具有很強的抗氧化、抗腫瘤、抗輻射、降血脂、降血糖、預防和治療心腦血管疾病等多種生理生化作用[11]，飲茶也成為許多人必不可少的生活習慣。有關攝入茶多酚對肝CYP450s的影響至今鮮見報道，已有的少量研究報道結論各不相同，且主要針對茶多酚對其他外源物質代謝的影響或體外研究[12-13]，很多制備茶多酚的茶葉原料及制備過程并不明確[14]。為此，本研究采用鐵觀音綠茶多酚提取物在短期內對正常小鼠灌胃處理，采用實時熒光定量反轉錄聚合酶鏈式反應（real-time reverse transcription polymerase chain reaction，real-time RT-PCR）法和Western blot法，從基因轉錄水平和宏觀蛋白表達水平觀察其對小鼠肝Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2c37的影響作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 動物、材料與試劑

鐵觀音購于福建安溪，屬二級茶葉，烘干、打粉，過80 目篩，避光常溫保存。

實驗動物（C57BL/6小鼠，雌性SPF級，7～8 周齡，體質量（18±2） g）和飼料均購自南方醫科大學實驗動物中心。

UNIQ-10柱式Trizol總RNA抽提試劑盒、1×TE buffer、Cyp3a11、Cyp2c37、Cyp2d22引物、Loading buffer 生工生物工程（上海）股份有限公司；PrimeScriptTMRT Master Mix、SYBR?Premix Ex Taq?（TliRNaseH Plus）、RNase-free水 寶生物工程（大連）有限公司；BCA蛋白定量試劑盒 美國Pierce公司；Cyp3a11、Cyp2c37、Cyp2d22一抗（多克隆兔抗）、二抗（辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔） 艾博抗（上海）貿易有限公司；脫脂奶粉 美國CST公司；NP-40 美國Merck公司；100×蛋白酶抑制劑 美國Sigma公司；ECL化學發光液、預染蛋白Maker 伯樂生命醫學產品（上海）有限公司；甲醇、氯仿、無水乙醇均為國產試劑。

1.2 儀器與設備

5180 R型冷凍離心機、22331 Hamburg紫外分光光度計、微量移液槍、普通PCR儀 德國Eppendorf公司；FastPrep-24樣品處理系統 安倍醫療器械貿易（上海）有限公司；LightCycler 1.5熒光定量PCR儀 瑞士Roche公司；MiniProtein電泳系統、Mini Trans-Blot轉膜系統、全自動凝膠成像儀 伯樂生命醫學產品（上海）有限公司；Spectra Max M5e多功能酶標儀 美國Molecular Devices公司；Laborota4001型旋轉蒸發儀德國Hedolphg公司；MS1 Minishaker漩渦混合儀 德國IKA公司。

1.3 方法

1.3.1 鐵觀音多酚的提取

參照GB/T 8313—2008《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》并稍做修改[15]。取20 g已處理的鐵觀音茶粉，按1∶25（m/V）加入預熱的70%甲醇，裝入1 000 mL的圓底燒瓶中并用玻璃棒充分攪拌均勻潤濕，立即轉入70 ℃水浴中，裝上冷凝管，回流冷浸提30 min。浸提后冷卻至室溫，過濾，將濾渣重新加入圓底燒瓶，重復浸提3 次。合并濾液，將濾液旋轉蒸發至原體積的15%～20%，保證甲醇幾乎被旋蒸完全，再用3 倍體積氯仿萃取1 次，再次旋轉蒸發，將其旋轉蒸發至萃取后體積的5%左右，溶解剩余部分于超純水中。10 000 r/min離心15 min，取上清液，真空冷凍干燥，常溫避光保存。

1.3.2 實驗動物及處理

將24 只健康成年SPF級C57BL/6小鼠隨機分為4 組，即空白對照組（control），鐵觀音茶多酚提取物低（150 mg/（kg·d）（以體質量計，下同），TL）、中（300 mg/（kg·d），TM）、高劑量（600 mg/（kg·d），TH）組。動物在環境相對濕度50%～60%，溫度20～25℃，光照/黑暗分別為12 h的SPF級屏障環境內飼養。每天早上分別對實驗組小鼠灌胃7 d，空白對照組按體質量（10 mL/kg）灌胃超純水7 d，灌胃2 h后正常進食、飲水。第7天灌胃2 h后脊椎猝死，取小鼠肝臟，用預冷的生理鹽水沖洗血跡，-80 ℃保存。

1.3.3 RNA的提取及real-time RT-PCR

取凍存的小鼠肝臟50 mg，按照試劑盒說明，用UNIQ-10柱式Trizol總RNA抽提試劑盒抽提肝臟組織的總RNA。用紫外分光光度計測總RNA的濃度及OD260nm/OD280nm比值，其中比值均在1.7～2.1之間，說明RNA的純度可以進行下一步實驗，同時進行瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整性，觀察18S與28S條帶，以條帶清晰且28S亮度約為18S的二倍為最佳標準；用PrimeScriptTMRT Master Mix試劑盒逆轉錄RNA模板成cDNA，操作步驟按照試劑盒說明書進行；然后采用SYBR?Premix Ex Taq?（TliRNaseH Plus）試劑盒對mRNA的表達進行相對定量，所有操作均在冰上進行；選擇β-肌動蛋白作為內參基因，其中的定量方法采用比較閾值法（2-△△Ct法），計算實驗組和空白對照組之間的基因表達水平的差異[16]。引物序列[17-19]見表1。

表1 Real-time RT-PCR引物Table 1 Quantitative real-time RT-PCR primers used in this study

1.3.4 Western blot法提取蛋白

取凍存的肝臟組織80 mg，加1 mL預冷的含有蛋白酶抑制劑的蛋白裂解液（主要含NP-40、Tris-HCl（pH 8.0），二胺四乙酸、NaCl），用FastPrep-24核酸蛋白提取儀行勻漿，將勻漿液轉移至離心管中。4 ℃、12 000 r/min離心30 min，取上清液。采用Wang Dongxu[20]及Wang Lihua[21]等的方法并根據實驗室的條件加以調整：用BCA法檢測蛋白濃度，取所需體積的蛋白質溶液按比例加入5×Loading buffer，100 ℃加熱5 min，加熱后將樣品置于冰水中冷卻，分裝后存于-80 ℃。所有操作均在冰上進行。將上樣液從-80 ℃冰箱取出，100 ℃加熱5 min，冷卻后采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，取空白對照組和3 個實驗組各1 個樣品，每孔槽內確?？杉訕悠返捏w積和蛋白總量相等。電泳完畢后將蛋白轉移至PVDF膜上，5%的脫脂奶粉封閉液封閉膜，然后用兔抗多克隆抗體甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH，為內參蛋白）、Cyp3a11、Cyp2c37、Cyp2d22作用于4 ℃過夜，復溫后用TBST洗膜5次，每次5 min。再與羊抗兔免疫球蛋白（immune globulin G，IgG）-過氧化物酶二抗結合1 h，TBST洗膜5 次，每次5 min，ECL顯影成像。顯影后將所得的蛋白質條帶用Image Lab 5.1軟件系統進行半定量分析。

1.4 數據統計分析

數據分析采用SPSS 17.0統計學軟件對數據進行統計分析，統計方法采用單因素方差分析（analysis of variance，ANOVA），多重比較檢驗進行顯著性分析，P＜0.05為具有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11表達水平的影響

圖1 鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11 mRNA表達的作用Fig. 1 Effects of polyphenols from Tieguanyin on mRNA expression of Cyp3a11 in liver of mice

由圖1可知，鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11 mRNA表達的影響。與空白對照組相比，鐵觀音多酚提取物低劑量組對Cyp3a11 mRNA的表達呈顯著誘導作用（P＜0.05），中劑量組對Cyp3a11 mRNA有顯著下調作用（P＜0.05），高劑量組對其則無顯著影響。因此，鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11 mRNA的表達未呈明顯的劑量依賴性。

圖2 鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11蛋白表達的作用Fig. 2 Effects of Tieguanyin tea polyphenols on the protein expression of Cyp3a11 in liver of mice

圖2 反映的是各劑量組中小鼠肝Cyp3a11蛋白表達的半定量結果。由圖2可知，與空白對照組相比較，低、中劑量組均對小鼠肝Cyp3a11蛋白的表達無顯著影響，其中高劑量組對小鼠肝Cyp3a11蛋白的表達呈顯著上調作用（P＜0.05）。

由實驗結果可得，在鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp3a11表達的影響作用中，其mRNA表達和蛋白表達的分析結果不大相同。鐵觀音多酚提取物中劑量都有下調Cyp3a11表達的作用，但其蛋白表達無顯著性，低劑量組對Cyp3a11 mRNA的表達呈顯著誘導作用，但對蛋白表達卻無顯著作用；高劑量組對其mRNA的無顯著影響，但對Cyp3a11蛋白的表達存在顯著的誘導作用。

2.2 鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp2d22表達水平的影響

圖3 鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp2d22 mRNA表達的作用Fig. 3 Effects of Tieguanyin tea polyphenols on the mRNA expression of Cyp2d22 in liver of mice

圖3 是鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp2d22 mRNA表達的作用結果。與空白對照組相比，鐵觀音多酚提取物低劑量組顯著誘導Cyp2d22 mRNA的表達（P＜0.05），中、高劑量組對Cyp2d22 mRNA表達的作用甚微，沒有顯著性影響。

圖4 鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp2d22蛋白表達的作用Fig. 4 Effects of Tieguanyin tea polyphenols on the protein expression of Cyp2d22 in liver of mice

小鼠肝組織Cyp2d22蛋白表達的半定量結果由圖4可知，與空白對照組相比較，低劑量組能顯著誘導小鼠肝Cyp2d22蛋白的表達（P＜0.05），中劑量組對小鼠肝Cyp2d22的蛋白表達無顯著影響，高劑量組對小鼠肝Cyp2d22的蛋白表達有誘導的趨勢，無顯著性影響，沒有劑量依賴關系。

鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp2d22表達的影響中，其mRNA表達和蛋白表達的分析結果大致相同，Cyp2d22 mRNA和蛋白表達結果幾乎吻合。說明低劑量的鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp2d22存在顯著的誘導作用，中、高劑量組對其無顯著影響。

2.3 鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp2c37表達水平的影響

圖5 鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp2c37 mRNA表達的作用Fig. 5 Effects of Tieguanyin tea polyphenols on the mRNA expression of Cyp2c37 in liver of mice

由圖5可知，相比空白對照組，鐵觀音多酚提取物低劑量組對小鼠肝Cyp2c37 mRNA的表達呈顯著誘導作用（P＜0.05），中劑量組對Cyp2c37 mRNA的表達呈顯著抑制作用（P＜0.05），高劑量組對Cyp2c37 mRNA的表達無顯著影響。

圖6 鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp2c37蛋白表達的作用Fig. 6 Effects of Tieguanyin tea polyphenols on the protein expression of Cyp2c37 in liver of mice

各劑量組中小鼠肝Cyp2c37蛋白表達的半定量結果由圖6可知，與空白對照組相比，鐵觀音多酚提取物中劑量組能夠顯著抑制小鼠肝Cyp2c37蛋白表達的作用（P＜0.05），而低、高劑量組存在抑制作用，但沒有顯著影響。

在鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp2c37表達的影響中，其mRNA表達和蛋白表達的分析結果明顯不一致?？傮w說來，鐵觀音多酚提取物中劑量組對Cyp2c37的mRNA和蛋白表達都有相一致的顯著抑制作用，鐵觀音多酚提取物低劑量組對Cyp2c37的mRNA有顯著的誘導作用，但其對蛋白表達存在一定的抑制作用，高劑量組對Cyp2c37的mRNA表達沒有明顯作用，但其對蛋白表達呈微弱的抑制作用，但無統計學意義。

3 結論與討論

本實驗從基因轉錄水平和蛋白表達水平上對鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp450酶系各亞型酶Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2c37的作用進行了探討。福建安溪鐵觀音是一種著名的烏龍茶，已有研究表明，其多酚與其他發酵程度不同茶葉的茶多酚相比多酚提取物的含量較高；且安溪鐵觀音多酚提取物主要成分與它們也有很大的差別，其成分以兒茶素為主，主要含有表兒茶素、表沒食子兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素沒食子酸酯等，由于其經過一定程度發酵，還含有少量茶黃素等其他大分子多酚聚合物[22]。目前國內外研究主要集中在茶多酚提取物對人體重要的抗氧化及抗腫瘤作用，而對通過肝藥酶的代謝作用研究甚少。

本實驗結果中，與空白對照組相比：1）鐵觀音多酚提取物低劑量組對小鼠肝Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2c37 mRNA均存在顯著誘導作用，但僅誘導Cyp2d22的蛋白表達，對Cyp3a11和Cyp2c37的蛋白表達無顯著影響。其原因可能是鐵觀音多酚提取物主要作用于Cyp3a11、Cyp2c37轉錄后水平的調控，使其蛋白表達結果與mRNA表達結果不一致。有研究表明，一些成熟mRNA通過核孔復合物后，可能并不與翻譯裝置結合，最后翻譯出少量功能蛋白；蛋白的翻譯后修飾作用也不容忽視，例如泛素-蛋白酶體的降解作用也可降低功能蛋白的產生[23]。因此出現鐵觀音多酚提取物呈現對Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2c37 mRNA有顯著影響，而對其對應的部分蛋白表達卻無顯著影響。2）中劑量組能夠顯著抑制小鼠肝Cyp3a11和Cyp2c37的mRNA表達，但僅顯著抑制Cyp2c37的蛋白表達，對Cyp3a11的蛋白表達無顯著作用，其原因可能是真核細胞中mRNA與蛋白質的表達存在時間和位點的間隔，可能在蛋白量持續增加的時候mRNA已經降解[24]，這就導致檢測出鐵觀音多酚提取物中劑量顯著降低Cyp3a11 mRNA的表達，卻對其蛋白表達無影響。3）高劑量組對Cyp3a11的mRNA表達無影響，但對其蛋白表達卻呈現顯著誘導作用。其機制可能仍與上述mRNA與蛋白質的表達存在間隔有關。4）除此之外，許多藥物和環境化學物能夠通過孕烷X受體、組成型雄甾烷受體等多種核轉錄因子調節CYP3A4、CYP2C9等多種CYP450亞型的轉錄，繼而影響這些酶的表達和活性[25-26]，鐵觀音多酚提取物對這些核轉錄因子的作用值得進一步研究。5）鐵觀音是一類廣受歡迎的茶飲料，許多人即使在用藥期間也有飲茶的習慣，因此飲茶對肝藥酶的影響勢必會加快或減慢合用藥物的體內代謝過程，導致代謝性藥物相互作用，降低藥物療效或增加藥物毒性。因此，系統研究鐵觀音對肝藥酶的影響至關重要。但目前相關報道較少且較分散[27-31]，關于茶多酚對CYP450s的研究及具體機制有待于進一步深入。

[1] MIRKOV S, KOMOROSKI B J, RAMíREZ J, et al. Effects of green tea compounds on irinotecan metabolism[J]. Drug Metabolism and Disposition, 2007, 35(2): 228-233.DOI:10.1124/dmd.106.012047.

[2] 宛曉春. 茶葉生物化學[M]. 3版. 北京: 中國農業出版社, 2007: 1-25.

[3] 何曉葉. 紫陽綠茶多酚提取物高效液相色譜指紋圖譜研究[D]. 西安: 陜西師范大學, 2014: 1.

[5] 張雪波. 不同季節安溪鐵觀音茶葉多酚類物質含量差異及其與品質的關系[J]. 農業科學與技術: 英文版, 2014, 15(7): 1191-1195. DOI:10.16175/j.cnki.1009-4229.2014.07.026.

[6] 張小梅, 馮毅凡, 陳耕夫, 等. 細胞色素P450與中草藥代謝關系的研究進展[J]. 廣東藥學院學報, 2011, 27(3): 327-331. DOI:10.3969/ j.issn.1006-8783.2011.03.030.

[7] 曾蘇. 藥物代謝學[M]. 杭州: 浙江大學出版社, 2004: 9-35.

[8] YANG J, TUCKER G T, ROSTAMI-HODJEGAN A. Cytochrome P450 3A expression and activity in the human small intestine[J]. Clinical Pharmacology and Therapeutics, 2004, 76(4): 391-391. DOI:10.1016/j.clpt.2004.07.001.

[9] HRYCAY E G, BANDIERA S M. Expression, function and regulation of mouse cytochrome P450 enzymes: comparison with human cytochrome P450 enzymes[J]. Current Drug Metabolism, 2009, 10(10): 1151-1183. DOI:10.2174/138920009790820138.

[10] 趙從. 細胞色素CYP3A11 knock-down小鼠的表達檢測及表型分析[D].重慶: 西南大學, 2011: 3-4.

[11] KHAN N, MUKHTAR H. Tea polyphenols for health promotion[J]. Life Sciences, 2007, 81(7): 519-533. DOI:10.1016/j.lfs.2007.06.011.

[12] KUMAR M, JAIN M, SEHGAL A, et al. Modulation of CYP1A1, CYP1B1 and DNA adducts level by green and white tea in Balb/c mice[J]. Food and Chemical Toxicology, 2012, 50(12): 4375-4381. DOI:10.1016/j.fct.2012.08.045.

[13] KAMENICKOVA A, VRZAL R, DVORAK Z. Effects of ready to drink teas on AhR-and PXR-mediated expression of cytochromes P450 CYP1A1 and CYP3A4 in human cancer cell lines and primary human hepatocytes[J]. Food Chemistry, 2012, 131(4): 1201-1206. DOI:10.1016/j.foodchem.2011.09.104.

[14] 陳霞. 茶多酚對小鼠細胞色素P450和b_5含量及CYP2E1和CYP1A2表達的影響[D]. 大連: 大連醫科大學, 2008: 6.

[15] 周衛龍, 徐建峰, 許凌. 茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法: GB/T 8313-2008 [S]. 北京: 中國標準出版社, 2008.

[16] COCCI P, MOSCONI G, PALERMO F A. Partial cloning, tissue distribution and effects of epigallocatechin gallate on hepatic 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase mRNA transcripts in goldfish (Carassius auratus)[J]. Gene, 2014, 545(2): 220-225. DOI:10.1016/j.gene.2014.05.030.

[17] 王永輝. 柴胡總皂苷對小鼠部分藥物代謝酶及P-糖蛋白的影響[D].廣州: 廣州中醫藥大學, 2012: 29.

[18] 劉瑩, 劉楠啟, 王國麗, 等. 雌雄小鼠肝臟中Ⅰ相代謝酶的mRNA表達譜[J]. 藥物生物技術, 2013(5): 381-385.

[19] 張軼雯. 冬凌草甲素對CYP450酶的影響及其機制研究[D]. 長沙:中南大學, 2014: 33.

[20] WANG D X, WANG Y J, WAN X C, et al. Green tea polyphenol (-)-epigallocatechin-3-gallate triggered hepatotoxicity in mice: responses of major antioxidant enzymes and the Nrf2 rescue pathway[J]. Toxicology and Applied Pharmacology, 2015, 283(1): 65-74. DOI:10.1016/j.taap.2014.12.018.

[21] WANG L H, LINGAPPAN K, JIANG W W, et al. Disruption of cytochrome P4501A2 in mice leads to increased susceptibility to hyperoxic lung injury[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2015, 82: 147-159. DOI:10.1016/j.freeradbiomed.2015.01.019.

[22] 葉美君, 周衛龍, 徐建峰, 等. 不同茶類中茶黃素類含量的測定與分布探討[J]. 農產品加工, 2015(2): 49-53. DOI:10.3969/jissn.1671-9646(X).2015.02.042.

[23] ZHAO Y, JENSEN O N. Modif i cation-specif i c proteomics: strategies for characterization of post-translational modifications using enrichment techniques[J]. Proteomics, 2009, 9(20): 4632-4641. DOI:10.1002/pmic.200900398.

[24] de SOUSA ABREU R, PENALVA L O, MARCOTTE E M, et al. Global signatures of protein and mRNA expression levels[J]. Molecular Biosystems, 2009, 5(12): 1512-1526. DOI:10.1039/B908315D.

[25] 馬彥榮, 張國強, 武新安. 核受體PXR, CAR, LXR和FXR作為代謝性疾病治療靶點的研究進展[J]. 中國醫院藥學雜志, 2015, 35(7): 659-663. DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2015.07.24.

[26] 薛春苗, 張冰, 金銳, 等. 仙茅對正常/虛寒大鼠孕烷X受體及其介導的藥物代謝酶CYP3A和運轉蛋白P-gp的影響[J]. 中華中醫藥雜志, 2014, 29(7): 2144-2147.

[27] 王繼坤, 陳橋, 鄭桂清. 綠茶、紅茶、白茶和烏龍茶化學組分的差異性分析[J]. 北京農業, 2011(18): 135-137.

[28] CHOW H H S, HAKIM I A, VINING D R, et al. Effects of repeated green tea catechin administration on human cytochrome P450 activity[J]. Cancer Epidemiology Biomarkers and Prevention, 2006, 15(12): 2473-2476. DOI:10.1158/1055-9965.EPI-06-0365.

[29] WENG Z, GREENHAW J, SALMINEN W F, et al. Mechanisms for epigallocatechin gallate induced inhibition of drug metabolizing enzymes in rat liver microsomes[J]. Toxicology Letters, 2012, 214(3): 328-338. DOI:10.1016/j.toxlet.2012.09.011.

[30] MATOU?KOVá P, BáRTíKOVá H, BOU?OVá I, et al. Effect of defined green tea extract in various dosage schemes on drugmetabolizing enzymes in mice in vivo[J]. Journal of Functional Foods, 2014, 10: 327-335. DOI:10.1016/j.jff.2014.06.026.

[31] GOODIN M G, ROSENGREN R J. Epigallocatechin gallate modulates CYP450 isoforms in the female Swiss-Webster mouse[J]. Toxicological Sciences, 2003, 76(2): 262-270. DOI:10.1093/toxsci/kfh001.

Effect of Polyphenols Extracted from Tieguanyin Tea on the mRNA and Protein Expression Levels of Hepatic Cytochromes P450 (Cyp450s) in Mice

REN Hong1,2, LIU Dong2, ZHENG Shaojie1, YAN Yijing2, SUN Haiyan2,*, MING Jian1,*
(1. College of Food Science, Southwest University, Chongqing 400715, China；2. Shenzhen Key Laboratory of Fermentation, Purif i cation and Analysis, Shenzhen Polytechnic, Shenzhen 518055, China)

In this paper, the effect of polyphenols extracted from Tieguanyin tea on the mRNA and protein expression levels of cytochromes P450 3a11 (Cyp3a11), 2d22 (Cyp2d22) and 2c37 (Cyp2c37) in the liver of mice was explored by real-time reverse transcription polymerase chain reaction（real-time RT-PCR） and Western blot. The results showedthat the polyphenol extract at low dose (150 mg/(kg·d)) significantly induced the mRNA expression of Cyp3a11, Cyp2d22, and Cyp2c37 (P ＜ 0.05) in comparison with the control group, while it significantly induced the protein expression of Cyp2d22 but had no signif i cant effect on the protein expression of Cyp3a11 and exhibited a signif i cant inhibitory effect on the protein expression of Cyp2c37. The polyphenols at middle dose (300 mg/(kg·d)) signif i cantly inhibited the mRNA and protein expression of Cyp3a11 and Cyp2c37 (P ＜ 0.05) but had no signif i cant effect the mRNA and protein expression of Cyp2d22. The polyphenols at high dose (600 mg/(kg·d)), although having no signif i cant effect on the mRNA expression of three enzymes, signif i cantly inhibited their protein expression levels (P ＜ 0.05). Therefore, Tieguanyin tea polyphenols can affect both the mRNA and protein expression levels of Cyp3a11, Cyp2d22 and Cyp2c37 in the liver of mice, suggesting that metabolism-based interactions can occur when they are used in combination with medicines.

Teiguanyin tea; polyphenol extracts; Cyp450; mRNA; protein expression

O625.3

A

1002-6630（2017）07-0201-06 DOI:10.7506/spkx1002-6630-201707032

康尤. 我國茶葉種類知多少[J]. 新農村, 2012(8): 36.

10.3969/ j.issn.1008-2182.2012.08.036.

任紅, 劉冬, 鄭少杰, 等. 鐵觀音多酚提取物對小鼠肝Cyp450s的影響[J]. 食品科學, 2017, 38(7): 201-206. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201707032. http://www.spkx.net.cn

REN Hong, LIU Dong, ZHENG Shaojie, et al. Effect of polyphenols extracted from Tieguanyin tea on the mRNA and protein expression levels of hepatic cytochromes P450 (Cyp450s) in mice[J]. Food Science, 2017, 38(7): 201-206. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201707032. http://www.spkx.net.cn

2016-04-29

廣東省科技計劃項目（2013B051000089）；深圳市戰略性新興產業發展專項資金資助項目（JCYJ20130331151222011）；深圳市科技計劃項目（JCYJ20140901162541286；JCYJ20160530173755124）

任紅（1991—），女，碩士研究生，研究方向為食品化學與營養學。E-mail：670643177@qq.com

*通信作者：孫海燕（1972—），女，教授，博士，研究方向為天然活性成分分析及代謝組學。E-mail：susan@szpt.edu.cn明建（1972—），男，教授，博士，研究方向為食品化學與營養學。E-mail：mingjian1972@163.com