探討Stathmin對卵巢癌細胞增殖、粘附、侵襲、轉移的作用研究

張子旸，廖 欣，王啟峰

（1.牡丹江醫學院附屬紅旗醫院婦產科，黑龍江 牡丹江 157011；2.黑龍江省牡丹江市第二人民醫院，黑龍江 牡丹江 157013）

卵巢癌為女性常見的一種生殖系統惡性腫瘤疾病，病死率位居婦科腫瘤之首。由于卵巢組織解剖結構、內分泌功能復雜，患者發病早期的臨床癥狀并不明顯，因此在早期診斷和鑒別上具有較大難度[1]。為提高卵巢癌患者的早期確診率，國內研究學者一直在尋找能夠輔卵巢癌早期診斷的生化標志物。Stathmin是一種高度保守的微管解聚蛋白。近年來已有研究發現該蛋白在多種癌細胞中呈高表達。本研究主要探討Stathmin在卵巢癌細胞增殖、粘附、侵襲、轉移中的作用，現進行以下報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

人卵巢癌細胞：從新鮮的卵巢癌病理標本中采集。

主要儀器和試劑：酶聯免疫檢測儀（購自美國貝克曼庫爾特有限公司）、Transwell小室（購自美國Millipore公司）、DMEM培養液（購自Gibco公司）、胰蛋白酶（購自Gibco公司）。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養及Stathmin檢測

將人卵巢癌細胞株放置于含有10%小牛血清的DMEM培養液中進行常規培養，使用0.25%的胰蛋白酶進行消化，按實驗研究所需細胞密度進行接種。采用免疫組織化學法檢測癌細胞中Stathmin的表達，以單個視野下10%細胞Stathmin陽性為分界值，判定Stathmin表達高于10%為高表達組，≤10%為低表達組。

1.2.2 增殖能力檢測

采用MTT法檢測癌細胞的增殖能力，取對數生長周期的細胞，接種于96孔板中，每個孔的細胞濃度為5×103/個，培養24h后，在每個孔中加入150μl DMSO，低速震蕩10min，在酶聯免疫檢測儀490nm波長處，測量各個孔的吸光值，重復測量3次后，計算細胞增值率。

1.2.3 粘附能力檢測

采用MTT法檢測癌細胞的粘附能力，取對數生長周期的細胞，接種于96孔板中，常規培養24h后，使用PBS小心清洗，將未粘附的細胞去除，在每孔中加入100μl 10%小牛血清，振蕩10min，在酶聯儀波長490nm處測出各吸光度值，計算細胞黏附率。

1.2.4 侵襲能力檢測

采用Transwell小室檢測細胞侵襲能力，將細胞接種于直徑6cm的小皿中，培養24h后，離心，取上清液，計算5個視野的穿膜細胞平均數，計算細胞侵襲率。

1.2.5 轉移能力檢測

采用細胞劃痕修復試驗檢測細胞轉移能力，取對數生長的細胞，接種于24孔板中，每孔細胞濃度為1×106/個，培養24h后，用100μl微量移液槍頭在24孔板內直線劃痕，然后更換培養液，去除脫落細胞，在鏡下觀察，根據愈合程度評價細胞的遷移能力。

1.3 觀察指標

比較兩組細胞的增殖能力、黏附能力、轉移能力和侵襲能力。

1.4 統計學方法

為采用SPSS18.0統計學軟件進行分析，進行t 檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

高表達組細胞培養后24h的增殖率、黏附率、轉移率、侵襲率較低表達組高，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組細胞培養后24h的增殖率、黏附率、轉移率、侵襲率比較（ ±s）

表1 兩組細胞培養后24h的增殖率、黏附率、轉移率、侵襲率比較（ ±s）

組別 增殖率（%） 黏附率（%） 轉移率（%） 侵襲率（%）高表達組 14.15±2.40 0.26±0.08 5.96±1.05 1.29±0.20低表達組 10.90±2.34 0.11±0.03 4.54±0.98 1.58±0.18 t 4.336 7.851 4.421 4.820 P 0.000 0.000 0.000 0.000

3 討 論

近年來不斷有研究學者發現，Stathmin在惡性腫瘤疾病乳腺癌、前列腺癌、肺癌細胞中有較高表達，但尚無較多關于卵巢癌細胞中Stathmin表達特征及臨床意義的研究[2]。本研究檢測發現，卵巢癌細胞中也有Stathmin表達，為明確Stathmin對卵巢癌細胞增殖、黏附、轉移、侵襲能力的影響，本研究根據Stathmin表達水平的高低對培養的人卵巢癌細胞進行分組，比較兩組細胞培養24h后的增殖率、黏附率、轉移率、侵襲率，結果顯示高表達組細胞上述指標檢測結果均高于低表達組，表明Stathmin的高表達能夠提高卵巢癌細胞的增殖、黏附、轉移、侵襲能力。深入分析Stathmin高表達對卵巢癌細胞增殖、黏附、轉移、侵襲能力的影響機制可能為為：Stathmin的作用靶點為微管蛋白，其磷酸化水平與微管的平衡狀態及細胞周期轉換均存在密切關系，當正常細胞進入有絲分裂期時，Stathmin的磷酸化水平開始增強，活性逐漸降低，繼而會促進細胞退出有絲分裂期，阻礙正常細胞增殖，促進腫瘤細胞增殖、黏附、侵襲和轉移[3]。

綜上所述，本研究得出Stathmin高表達能夠增強卵巢癌細胞增殖、黏附、轉移、侵襲能力，促進患者疾病發展。同時也提示可將該指標作為卵巢癌預后評估的重要指標。但由于現階段國內外醫療領域關于該方面的課題研究較少，因此本次研究所得結果仍需日后開展更多實踐研究進行驗證。

參考文獻

[1] 劉包欣子,王瑞平,鄒 璽,等.常春藤皂苷元對結腸癌細胞LoVo增殖、粘附、侵襲和遷移能力的影響[J].南京中醫藥大學學報,2013,29(1):44-47.

[2] 韓海英,張培彤,王耀焓,等.川芎嗪聯合丹參酮ⅡA對人肺巨細胞癌PG-BE1、PG-LH7細胞增殖、黏附及侵襲的影響[J].中國腫瘤,2016,25(9):728-733.

[3] 戴海萍,朱國華,吳麗麗,等.LPXN過表達對THP-1細胞增殖、粘附和侵襲的影響及其機制研究[J].中國實驗血液學雜志,2017,25(3):673-677.