血液乙醇濃度檢測中丙酮干擾2例

文迪，于峰，董玫，秦曉欣，向平，馬春玲

（1.河北醫科大學基礎醫學院法醫學系河北省法醫學重點實驗室河北醫科大學法醫鑒定中心，河北石家莊 050017；2.石家莊市公安局物證鑒定所，河北石家莊 050000；3.司法部司法鑒定科學技術研究所上海市法醫學重點實驗室上海市司法鑒定專業技術服務平臺，上海 200063）

血液乙醇濃度檢測中丙酮干擾2例

文迪1，于峰1，董玫1，秦曉欣2，向平3，馬春玲1

（1.河北醫科大學基礎醫學院法醫學系河北省法醫學重點實驗室河北醫科大學法醫鑒定中心，河北石家莊 050017；2.石家莊市公安局物證鑒定所，河北石家莊 050000；3.司法部司法鑒定科學技術研究所上海市法醫學重點實驗室上海市司法鑒定專業技術服務平臺，上海 200063）

法醫毒理學；色譜法，氣相；血液；乙醇；丙酮

1 案例

1.1 簡要案情

案例1：2016年2月某日零時許，楊某駕車在某地與趙某發生交通事故，抽取楊某靜脈血，對乙醇含量進行檢測。

案例2：2016年2月某日7時許，某村發現一具男性尸體，提取死者心血進行乙醇含量檢測。

兩個案例中血液均保存于抗凝管中，無血凝塊，未腐敗。

1.2 檢測方法

參照GA/T 1073—2013行業標準[1]，采用頂空氣相色譜法對血液中乙醇濃度進行檢測。7694E頂空進樣器（美國Agilent公司）；加熱箱爐溫：65℃；定量環溫度：105℃；傳輸線溫度：110℃；樣品瓶加熱平衡時間：10min。7890A氣相色譜儀（美國Agilent公司）；氣相色譜柱1：DB-ALC1石英毛細管柱（30m×0.32mm，1.8μm）；氣相色譜柱2：DB-ALC2石英毛細管柱（30m× 0.32mm，1.2μm）；檢測器：火焰離子化檢測器；柱溫：40℃；檢測器溫度：250℃；進樣口溫度：150℃；載氣流速：8mL/min；燃氣（H2）：30mL/min；空氣：400mL/min；尾吹（N2）：25mL/min。

氣相色譜質譜（GC-MS）條件[2，3]：Clarus 680氣相色譜儀（美國PerkinElmer公司），色譜柱為Elite-WAX ETR柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），載氣為氦氣（1 mL/min），進樣口溫度150℃，不分流進樣，柱溫40℃，保持5min；PE Clarus SQ8 S質譜，離子源溫度250℃，電子轟擊源（EI），電離能量70eV，傳輸線溫度250℃，掃描模式為全掃描，掃描范圍m/z 30～150amu。血樣加入頂空瓶后，65℃水浴加熱，然后用氣密針抽取1mL液上氣體直接進樣。

1.3 檢測結果

乙醇和內標（叔丁醇）在頂空氣相色譜柱1及柱2分析條件下的保留時間分別為1.202、1.608 min和1.040、1.506min。

案例1中，柱1及柱2色譜條件下均未檢出乙醇成分，但在柱1條件下檢出一未知峰（1.335min，圖1A），且在柱2條件下的保留時間與叔丁醇一致（圖1B）。經質譜定性，該未知峰保留時間為2.95 min，特征離子質荷比（m/z）為43、58，確認其為丙酮，分子離子峰[M-H]的m/z為58，斷裂脫去CH3后產生m/z 43的碎片離子。

圖1 案例1中靜脈血頂空氣相色譜圖

案例2中，柱1及柱2色譜條件下均檢出乙醇成分（圖2），柱1條件下的定量平均值為0.09 mg/mL，柱2條件下的定量平均值為0.06mg/mL。但是，在柱1條件下檢出與案例1相同保留時間的未知峰，經質譜定性為丙酮成分。由于該血樣同時檢出丙酮成分，在柱2條件下丙酮與內標峰不能分離，內標受到干擾，因此柱2條件下的定量結果無效。鑒定意見為送檢心血中乙醇質量濃度為0.09mg/mL。

圖2 案例2中心血頂空氣相色譜圖

2 討論

酮體是在肝中脂肪酸氧化分解的中間產物，是肝輸出能源的一種方式，包括乙酰乙酸、β-羥基丁酸及丙酮三種成分，因此，丙酮是體內代謝物酮體的主要成分之一。正常情況下，血中含少量酮體，約0.03～0.5mmol/L[4]。在病理條件下，糖類物質利用受阻或長期不能進食，脂肪動員加強，肝內酮體生成過多，超過肝外利用酮體的能力，從而引起血中酮體增多，稱酮血癥[5]。另外，職業暴露等因素也可以造成血液中丙酮含量的升高，引起急性丙酮中毒[6]。

人體血液乙醇濃度的測定值是認定車輛駕駛人員是否酒后或醉酒駕駛的重要執法證據。本例采用頂空氣相色譜雙柱確認法對兩例案件進行血液乙醇濃度檢測。案例1檢材中未檢出乙醇成分，但檢出另一未知物質，且該物質在柱2條件下與內標叔丁醇的保留時間重疊，無法分離；通過氣相色譜-質譜法進行分析，確證該物質為丙酮。案例2檢材中同時檢出乙醇和丙酮成分，由于在柱2中丙酮與叔丁醇的保留時間重合，內標峰面積增加，從而使乙醇測定值降低，對乙醇的定量結果發生了干擾，因此，在本案的檢測體系中柱2條件下對乙醇的定量結果無效，以柱1條件下兩次測定的平均值為最終結果。通過上述兩例案件，筆者認為：（1）由于體內可產生丙酮，故丙酮不能作為內標物質使用；（2）僅采用頂空氣相色譜單柱法進行乙醇濃度檢測存在一定的風險，雙柱確認法可有效降低誤判的可能性；（3）如果發現雙柱定量結果之間的差異較大，要考慮乙醇或內標叔丁醇的色譜峰存在未知物的干擾；（4）在建立檢測體系時，應對與乙醇色譜行為相似的物質，如丙酮、乙醛、甲醇、異丙醇及苯系物的保留時間進行考察；（5）出現未知色譜峰干擾時，可考慮采用質譜儀對其進行定性分析，排除干擾后再進行乙醇濃度定量分析。

總之，血液中乙醇濃度檢測過程中，除要對檢材采集、保存、檢測方法等進行規范化管理，還應注意在檢測過程中出現假陽性，或其他未知物對檢測體系干擾的可能。

[1]中華人民共和國公安部.生物樣品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇的頂空-氣相色譜檢驗方法：GA/T 1073—2013[S].北京：中國標準出版社，2013.

[2]沈敏.法醫毒物司法鑒定實務[M].北京：法律出版社，2011.

[3]李韻譜，董小艷，吳亞西.氣相色譜-質譜法分析環境空氣中甲醇和丙酮[J].環境衛生學雜志，2013，3（5）：445-448.

[4]賈弘褆，馮作化.生物化學與分子生物學[M].第2版.北京：人民衛生出版社，2010.

[5]陳灝珠，鐘南山，陸再英.內科學[M].第8版.北京：人民衛生出版社，2013.

[6]吳從容.急性丙酮中毒兩例報告[J].中國工業醫學雜志，1995，8（4）：248.

DF795.4

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2017.03.036

1004-5619（2017）03-0337-02

2016-04-01）

（本文編輯：嚴慧）

國家重點研發計劃項目（2016YFC0800704-3）

文迪（1982—），男，副教授，副主任法醫師，主要從事法醫毒理及毒物分析研究；E-mail：wendi01125＠126.com

馬春玲，女，教授，主任法醫師，主要從事法醫毒物學研究；E-mail：chunlingma＠126.com