條葉龍膽中環烯醚萜類化學成分及細胞毒活性研究△

周艷麗，張艷，李碩熙，李英琴，李博謙，王愛莉

(黑龍江中醫藥大學 佳木斯學院，黑龍江 佳木斯 154007)

·基礎研究·

條葉龍膽中環烯醚萜類化學成分及細胞毒活性研究△

周艷麗，張艷*，李碩熙，李英琴，李博謙，王愛莉

(黑龍江中醫藥大學 佳木斯學院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的利用植物化學和現代譜學分析相結合的手段，針對性地開展條葉龍膽中特征性成分——環烯醚萜類化學成分的研究，并對所分離得到的環烯醚萜類單體成分進行細胞毒活性試驗，為新的抗腫瘤藥物研發提供物質基礎。方法運用現代植物化學的研究手段對條葉龍膽進行針對性的提取、分離，并利用包括核磁共振(1D，2D NMR)、質譜等多種譜學手段對其進行結構鑒定，采用MTT方法測定各單體環烯醚萜類化合物的細胞毒活性。結果從條葉龍膽乙醇提取物中分離得到了9個環烯醚萜類成分，分別鑒定為天目地黃苷A(1)，天目地黃苷E(2)，6-酮基-8-乙酰鉤果草苷(3)，6，7-去氫-8-乙酰鉤果草苷(4)，齒葉玄參苷A(5)，大花木巴戟苷C(morinlongoside C，6)，3′-O-β-D-吡喃葡萄糖基獐牙菜苷(7)，地黃新苷B(8)和地黃新苷C(9)。采用MTT方法對化合物1～9進行細胞毒活性評價，結果顯示化合物1、4、5、8對人源肝癌細胞HepG2增殖具有抑制活性，IC50值分別為13.6、12.0、7.5、9.0 μmol·L-1。結論環烯醚萜類化合物1～9均為從該植物中首次分離得到，且發現了對人源肝癌細胞HepG2增殖有一定抑制活性的環烯醚萜類成分。

條葉龍膽；環烯醚萜；細胞毒活性

條葉龍膽GentianamanshuricaKitag.為龍膽科(Gentianaceae)龍膽屬(Gentiana)多年生草本植物，生長在海拔 100～1100 m的山坡草地、濕草地、路旁處，在我國多個省份均有分布[1]。該屬植物物種多樣，世界范圍內有400余種，分布于歐洲、亞洲等地，而我國有247種，分布遍及全國[1]。文獻調研發現從該屬植物中分離得到的化學成分主要為環烯醚萜、黃酮等類成分[2-4]?，F代藥理研究不但顯示出其與傳統功效一致的保肝活性，而且呈現出了抗炎、止痛、抗病毒、抗腫瘤等方面的活性[2-4]?；邶埬憣僦参锔缓哂辛己每鼓[瘤活性的環烯醚萜類成分，為了給新的抗腫瘤藥物研發提供一定的數據支撐，筆者對條葉龍膽環烯醚萜類成分進行了定向研究，從其乙醇提取物中共分離得到9個環烯醚萜類結構，采用MTT方法對化合物1～9進行細胞毒活性評價。

1 儀器與材料

Bruker DRX-600核磁共振儀，Bruker HTC/Esquire 質譜儀，硅膠(200～300目)、硅膠板(高效板，青島海洋化學有限責任公司)，凝膠LH-20(GE公司)，高效液相色譜儀(Agilent 1260)、Multiskan MK3酶標儀(熱電公司)，Quintix125D-1CN分析天平(德國賽多利斯集團)。

HepG2、HCT-1116、BGC-823細胞(中國醫學科學院基礎研究所)，四甲基偶氮唑鹽(MTT，Gibco公司)。

條葉龍膽于2014年7月采集于黑龍江省齊齊哈爾市碾子山地區，經黑龍江中醫藥大學陳效忠副教授鑒定為龍膽科龍膽屬植物條葉龍膽GentianamanshuricaKitag.的根及根莖。藥材存放于黑龍江中醫藥大學佳木斯學院標本館(編號：2014090703)。

2 提取與分離

取干燥藥材10 kg，粉碎后用95%乙醇水溶液回流提取3次，每次1 h。將3次提取得到的提取液合并，經減壓干燥得到干浸膏2.0 kg，加水混懸后，依次用乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，萃取液分別進行減壓濃縮干燥，得到乙酸乙酯部分和正丁醇部分。取正丁醇部分(共300.0 g)用D101大孔吸附樹脂柱色譜(12.0 cm×80.0 cm)分離，依次選用適量的純水，30%、60%、95%乙醇水溶液進行分段洗脫。其中，60%乙醇水溶液洗脫部分經真空干燥得到洗脫物78.0 g，運用硅膠柱色譜法進行進一步色譜分離，梯度洗脫溶劑選用三氯甲烷-甲醇系統(體積比依次為20∶1，10∶1，6∶1，4∶1，3∶1，1∶1，0∶1)，經收集合并洗脫液得到10個流分Fr.1～10。流分Fr.8(13.8 g)經硅膠柱色譜[三氯甲烷-甲醇(50∶50)洗脫]得到16個亞組分Subfr.8(1～16)。流分Subfr.8(7)(3.0 g)經過反復硅膠柱色譜后又經LH-20凝膠柱色譜純化得到化合物3(17.0 mg)和4(15.0 mg)。Subfr.8(8)(2.0 g)經LH-20凝膠柱色譜純化得到化合物2(8.1 mg)。流分Subfr.10(5.3 g)首先經C18反相柱色譜進行純化，再經半制備HPLC(甲醇-水為流動相，體積比為30∶70，流速為3.0 mL·min-1)進一步純化得到化合物1(9.3 mg)和7(2.7 mg)。流分Fr.12(10.0 g)經C18反相柱色譜分離，得到20個流分Subfr.12(1～20)。Subfr.12(5)(1.5 g)經過制備型HPLC(甲醇-水為流動相，體積比為40∶60，流速為5.0 mL·min-1)得到化合物5(12.0 mg)和6(8.5 mg)。Subfr.12(7)(1.0 g)經過制備型HPLC(甲醇-水為流動相，體積比為50∶50，流速為5.0 mL·min-1)得到化合物8(8.0 mg)和9(5.0 mg)。

3 體外抑制腫瘤細胞增殖活性評價(MTT法)

將3種待測細胞株(HepG2，HCT-1116，BGC-823)配制成1×105濃度的懸液，接種100 μL于96孔板，培養24 h；將待測樣品配制6個梯度濃度(0.10、0.50、0.25、1.25、6.25、31.25 μmol·L-1)，每個梯度濃度做6個重復，分別取100 μL至96孔板實驗組，另外設空白組和對照組(紫杉醇)；作用48 h后，離心，棄上清液，加100 μL MTT，再使其作用4 h后，再次離心，棄上清液，加150 μL二甲基亞砜(DMSO)，振蕩約10 min，于570 nm下測其吸光度值[5]。

4 結果

4.1 結構鑒定

化合物1：白色粉末。ESI-MSm/z331 [M+H]+，結合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式為C15H22O8。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.08(1H，d，J=7.8 Hz，H-1)，4.47(1H，m，Ha-3)，4.28(1H，m，Hb-3)，5.60(1H，dd，J=6.0，2.6 Hz，H-4)，6.26(1H，d，J=6.0 Hz，H-6)，5.97(1H，d，J=6.0 Hz，H-7)，2.75(1H，m，H-9)，1.33(3H，s，H-10)；Glc(葡萄糖基)δ：4.75(1H，d，J=8.4 Hz，H-1′)，3.33(1H，m，H-2′)，3.42(1H，t，J=8.4 Hz，H-3′)，3.37(1H，t，J=8.4 Hz，H-4′)，3.33(1H，m，H-5′)，3.87(1H，dd，J=12.0，2.0 Hz，Ha-6′)，3.71(1H，dd，J=12.0，6.0 Hz，Hb-6′)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：98.9(C-1)，66.6(C-3)，116.8(C-4)，141.7(C-5)，130.6(C-6)，145.7(C-7)，82.8(C-8)，55.9(C-9)，23.3(C-10)；Glcδ：100.5(C-1′)，74.9(C-2′)，77.9(C-3′)，71.8(C-4′)，78.4(C-5′)，62.9(C-6′)。以上數據與文獻報道的數據進行比較[6]，確定化合物為天目地黃苷A，從該植物中首次分離得到。

化合物2：白色粉末。ESI-MSm/z635 [M+Na]+，結合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式為C30H44O13。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.10(1H，d，J=10.0 Hz，H-1)，6.33(1H，m，H-3)，5.08(1H，dd，J=6.0，4.8 Hz，H-4)，3.25(1H，m，H-5)，3.90(1H，d，J=7.8 Hz，H-6)，3.47(1H，s，H-7)，2.47(1H，m，H-9)，4.26(1H，d，J=14.0 Hz，Ha-10)，3.79(1H，d，J=14.0 Hz，Hb-10)；Glcδ：5.00(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，4.90(1H，dd，J=10.0，8.0 Hz，H-2′)，3.67(1H，m，H-3′)，3.40(1H，m，H-4′)，3.39(1H，m，H-5′)，3.97(1H，d，J=11.4 Hz，Ha-6′)，3.70(1H，m，Hb-6′)；1.70(1H，m，Ha-2″)，1.20(1H，m，Hb-2″)，1.90(1H，m，Ha-3″)，1.40(1H，m，Hb-3″)，1.85(1H，m，Ha-4″)，1.50(1H，m，Hb-4″)，6.78(1H，d，J=16.0 Hz，H-7″)，6.48(1H，d，J=16.0 Hz，H-8″)，5.90(1H，s，H-10″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：96.0(C-1)，141.9(C-3)，104.8(C-4)，39.2(C-5)，80.0(C-6)，62.6(C-7)，66.6(C-8)，43.7(C-9)，62.1(C-10)；Glcδ：98.3(C-1′)，74.8(C-2′)，75.9(C-3′)，72.1(C-4′)，79.0(C-5′)，63.0(C-6′)；40.3(C-1″)，37.8(C-2″)，19.0(C-3″)，37.2(C-4″)，75.9(C-5″)，80.9(C-6″)，140.9(C-7″)，134.6(C-8″)，155.0(C-9″)，119.1(C-10″)。以上數據與文獻的數據進行比較[6]，確定化合物為天目地黃苷E，從該植物中首次分離得到。

化合物3：白色粉末。ESI-MSm/z405 [M+H]+，結合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式為C17H24O11。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.45(1H，d，J=2.0 Hz，H-1)，5.57(1H，d，J=6.0 Hz，H-3)，5.13(1H，dd，J=6.0，2.0 Hz，H-4)，2.45(1H，d，J=6.3 Hz，Ha-7)，2.30(1H，d，J=6.3 Hz，Hb-7)，2.95(1H，d，J=1.6 Hz，H-9)，1.54(3H，s，H-10)，1.91(3H，s，OAc)；Glcδ：4.71(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.45(1H，m，H-2′)，3.30(1H，m，H-3′)，3.37(1H，m，H-4′)，3.53(1H，m，H-5′)，3.82(1H，m，Ha-6′)，3.70(1H，m，Hb-6′)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：95.7(C-1)，145.4(C-3)，109.2(C-4)，73.8(C-5)，213.3(C-6)，50.1(C-7)，87.7(C-8)，56.2(C-9)，23.1(C-10)；Glcδ：99.6(C-1′)，73.8(C-2′)，77.5(C-3′)，71.7(C-4′)，77.2(C-5′)，61.7(C-6′)；171.6(1-OAc)，25.0(2-OAc)。以上數據與已知文獻的數據進行比較[7]，確定化合物為6-酮基-8-乙酰鉤果草苷，從該植物中首次分離得到。

化合物4：白色粉末。ESI-MSm/z389 [M+H]+，結合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式為C17H24O10。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.45(1H，d，J=2.0 Hz，H-1)，5.76(1H，d，J=6.0 Hz，H-3)，5.23(1H，dd，J=6.0，2.0 Hz，H-4)，6.07(1H，dd，J=9.0，1.6 Hz，H-6)，5.84(1H，d，J=9.0，3.5 Hz，H-7)，3.26(1H，d，J=2.0 Hz，H-9)，1.40(3H，s，H-10)，2.02(3H，s，OAc)；Glcδ：4.52(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.50(1H，m，2′)，3.56(1H，m，H-3′)，3.23(1H，m，H-4′)，3.37(1H，m，H-5′)，3.75(1H，m，H-6′a)，3.63(1H，m，H-6′b)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：95.0(C-1)，144.1(C-3)，107.8(C-4)，76.3(C-5)，133.9(C-6)，128.8(C-7)，90.7(C-8)，47.3(C-9)，23.5(C-10)；Glcδ：99.3(C-1′)，74.8(C-2′)，77.2(C-3′)，70.8(C-4′)，77.9(C-5′)，62.5(C-6′)；167.2(OAc-1)，25.6(OAc-2)。以上數據與文獻的數據進行比較[7]，確定化合物為6，7-去氫-8-乙酰鉤果草苷，從該植物中首次分離得到。

化合物5：白色粉末。ESI-MSm/z805 [M+Na]+，結合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式為C36H46O19。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.20(1H，m，H-1)，6.51(1H，m，H-3)，5.11(1H，m，H-4)，2.51(1H，m，H-5)，4.10(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，3.67(1H，s，H-7)，2.61(1H，dd，m，H-9)，4.20(1H，d，J=13.4 Hz，Ha-10)，3.85(1H，d，J=13.4 Hz，Hb-10)；Glcδ：4.80(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.25(1H，m，H-2′)，3.43(1H，t，J=9.0 Hz，H-3′)，3.27(1H，m，H-4′)，3.33(1H，m，H-5′)，3.65(1H，m，H-6′a)，3.95(1H，m，H-6′b)；Rhaδ：5.10(1H，m，H-1″)，5.31(1H，m，H-2″)，5.36(1H，m，H-3″)，5.20(1H，t，J=10.0 Hz，H-4″)，4.10(1H，m，H-5″)，1.25(1H，d，J=6.0 Hz，H-6″)，7.27(1H，d，J=2.0 Hz，H-2?)，7.00(1H，d，J=8.6 Hz，H-5?)，7.19(1H，dd，J=2.0，8.6 Hz，H-6?)，7.70(1H，d，J=16.0 Hz，H-7?)，6.47(1H，d，J=16.0 Hz，H-8?)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：95.6(C-1)，142.9(C-3)，103.7(C-4)，37.8(C-5)，85.2(C-6)，60.0(C-7)，66.9(C-8)，43.7(C-9)，61.7(C-10)，Glcδ：100.1(C-1′)，75.3(C-2′)，78.1(C-3′)，72.3(C-4′)，79.0(C-5′)，63.3(C-6′)；Rhaδ：98.2(C-1″)，71.7(C-2″)，71.0(C-3″)，72.5(C-4″)，68.6(C-5″)，18.0(C-6″)，129.3(C-1?)，112.0(C-2?)，151.4(C-3?)，153.8(C-4?)，112.9(C-5?)，124.9(C-6?)，148.0(C-7?)，115.9(C-8?)，168.5(C-9?)；172.0(OCOCH3-1)，21.0(OCOCH3-1)，172.0(OCOCH3-2)，21.0(OCOCH3-2)，56.6(OMe)，56.8(OMe′)。以上數據與文獻的數據進行比較[8]，確定化合物為齒葉玄參苷A，從該植物中首次分離得到。

化合物6：白色粉末。ESI-MSm/z559 [M+Na]+，結合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式為C22H32O15。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.40(1H，d，J=5.6 Hz，H-1)，7.50(1H，m，H-3)，3.70(1H，m，H-5)，6.11(1H，dt，J=2.0，5.5 Hz，H-6)，5.70(1H，dt，J=2.0，5.5 Hz，H-7)，3.10(1H，m，H-8)，2.50(1H，m，H-9)，3.90(1H，m，H-10a)，3.80(1H，m，H-10b)；Glcδ：4.70(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，3.30(1H，m，H-2′)，3.40(1H，m，H-3′)，3.37(1H，m，H-4′)，3.32(1H，m，H-5′)，3.92(1H，m，Ha-6′)，3.75(1H，m，Hb-6′)；Glc 4.36(1H，d，J=7.0 Hz，H-1″)，3.27(1H，m，H-2″)，3.40(1H，m，H-3″)，3.33(1H，m，H-4″)，3.30(1H，m，H-5″)，3.90(1H，dd，J=2.0，12.0 Hz，Ha-6″)，3.70(1H，dd，J=8.5，12.0 Hz，Hb-6″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)Aglyconeδ：97.7(C-1)，153.3(C-3)，112.1(C-4)，40.7(C-5)，136.0(C-6)，131.8(C-7)，48.9(C-8)，45.3(C-9)，72.5(C-10)，171.0(C-11)；Glcδ：100.3(C-1′)，74.9(C-2′)，78.0(C-3′)，71.9(C-4′)，78.6(C-5′)，62.9(C-6′)；Glcδ：103.9(C-1″)，75.5(C-2″)，78.0(C-3″)，71.7(C-4″)，78.3(C-5″)，62.8(C-6″)。以上數據與文獻的數據進行比較[9]，確定化合物為大花木巴戟苷C，從該植物中首次分離得到。

化合物7：白色粉末。ESI-MSm/z543 [M+Na]+，結合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式為C22H32O14。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.50(1H，d，J=2.0 Hz，H-1)，7.60(1H，s，H-3)，3.09(1H，m，H-5)，1.68(2H，m，H-6)，3.85(1H，m，Ha-7)，4.37(1H，m，Hb-7)，5.51(1H，m，H-8)，2.70(1H，m，H-9)，5.30(1H，m，Ha-10)，5.28(1H，m，Hb-10)；Glcδ：4.70(1H，d，J=7.0 Hz，H-1′)，3.22(1H，m，H-2′)，4.45(1H，m，H-3′)，3.30(1H，m，H-4′)，3.21(1H，m，H-5′)，3.60(1H，m，Ha-6′)，3.55(1H，m，Hb-6′)；Glc 4.56(1H，d，J=7.0 Hz，H-1″)，3.30(1H，m，H-2″)，3.32(1H，m，H-3″)，3.40(1H，m，H-4″)，3.29(1H，m，H-5″)，3.66(1H，m，Ha-6″)，3.57(1H，m，Hb-6″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：98.3(C-1)，154.5(C-3)，105.5(C-4)，28.8(C-5)，26.0(C-6)，70.0(C-7)，133.8(C-8)，44.0(C-9)，121.0(C-10)，169.2(C-11)；Glcδ：100.1(C-1′)，74.6(C-2′)，87.8(C-3′)，70.3(C-4′)，78.0(C-5′)，62.9(C-6′)；Glcδ：105.0(C-1″)，75.8(C-2″)，78.3(C-3″)，71.8(C-4″)，78.6(C-5″)，62.6(C-6″)。以上數據與文獻的數據進行比較[10]，確定化合物為3′-O-β-D-吡喃葡萄糖基獐牙菜苷，從該植物中首次分離得到。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm/z683 [M+Na]+，結合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式為C29H40O17。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.55(1H，d，J=2.6 Hz，H-1)，6.30(1H，dd，J=6.0，2.6 Hz，H-3)，5.00(1H，dd，J=6.0，3.0 Hz，H-4)，3.00(1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-5)，5.10(1H，m，H-6)，2.31(1H，m，Ha-7)，2.10(1H，m，Hb-7)，2.63(1H，dd，J=10.0，2.6 Hz，H-9)，1.46(3H，s，H-10)；Glcδ：4.66(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，3.20(1H，dd，J=9.0，8.0 Hz，H-2′)，3.38(1H，t，J=9.0 Hz，H-3′)，3.28(1H，m，H-4′)，3.30(1H，m，H-5′)，3.90(1H，m，Ha-6′)，3.68(1H，m，Hb-6′)；7.70(1H，d，J=2.0 Hz，H-2″)，7.22(1H，d，J=8.6 Hz，H-5″)，7.70(1H，dd，J=8.6，2.0 Hz，H-6″)，3.88(1H，s，OMe)；Glcδ：5.08(1H，d，J=7.2 Hz，H-1?)，3.53(1H，dd，J=9.0，8.0 Hz，H-2?)，3.50(1H，t，J=9.0 Hz，H-3?)，3.39(1H，t，J=9.0 Hz，H-4?)，3.45(1H，m，H-5?)，3.88(1H，m，Ha-6?)，3.69(1H，m，Hb-6?)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：93.6(C-1)，141.5(C-3)，104.7(C-4)，39.8(C-5)，81.0(C-6)，47.9(C-7)，79.6(C-8)，52.0(C-9)，26.2(C-10)；Glcδ：99.6(C-1′)，75.0(C-2′)，78.7(C-3′)，72.0(C-4′)，78.1(C-5′)，62.9(C-6′)；125.8(C-1″)，114.4(C-2″)，150.7(C-3″)，152.6(C-4″)，116.6(C-5″)，124.6(C-6″)，167.8(C-7″)，56.9(OMe)；Glcδ：101.3(C-1?)，74.8(C-2?)，78.3(C-3?)，71.6(C-4?)，78.0(C-5?)，62.6(C-6?)。以上數據與文獻的數據進行比較[11]，確定化合物為地黃新苷B，從該植物中首次分離得到。

化合物9：白色粉末。ESI-MSm/z697 [M+Na]+，結合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式為C30H42O17。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.55(1H，d，J=2.6 Hz，H-1)，6.30(1H，dd，J=6.0，2.6 Hz，H-3)，5.00(1H，dd，J=6.0，3.0 Hz，H-4)，3.00(1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-5)，5.10(1H，m，H-6)，2.31(1H，m，Ha-7)，2.10(1H，m，Hb-7)，2.63(1H，dd，J=10.0，2.6 Hz，H-9)，1.46(3H，s，H-10)；Glcδ：4.66(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，3.20(1H，dd，J=9.0，8.0 Hz，H-2′)，3.38(1H，t，J=9.0 Hz，H-3′)，3.28(1H，m，H-4′)，3.30(1H，m，H-5′)，3.90(1H，m，Ha-6′)，3.68(1H，m，Hb-6′)；7.70(1H，d，J=2.0 Hz，H-2″)，7.22(2H，s，H-2″和H-6″)，3.88(6H，s，OMe)；Rhaδ：5.35(1H，d，J=1.2 Hz，H-1?)，4.15(1H，m，H-2?)，3.90(1H，m，H-3?)，3.45(1H，m，H-4?)，4.25(1H，m，H-5?)，1.20(3H，d，J=6.0 Hz，H-6?)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：93.6(C-1)，141.5(C-3)，104.7(C-4)，39.8(C-5)，81.0(C-6)，47.9(C-7)，79.6(C-8)，52.0(C-9)，26.2(C-10)；Glcδ：99.6(C-1′)，75.0(C-2′)，78.7(C-3′)，72.0(C-4′)，78.1(C-5′)，62.9(C-6′)；125.8(C-1″)，114.4(C-2″)，150.7(C-3″)，152.6(C-4″)，116.6(C-5″)，124.6(C-6″)，167.8(C-7″)，56.9(OMe)；Rhaδ：101.3(C-1?)，72.8(C-2?)，72.3(C-3?)，73.6(C-4?)，71.5(C-5?)，18.0(C-6?)。以上數據與已知文獻的數據進行比較[11]，確定化合物為地黃新苷C，從該植物中首次分離得到。

4.2 體外抑制腫瘤細胞增殖活性結果

僅化合物1、4、5、8對人源肝癌細胞HepG2增殖呈現出一定的抑制活性，其IC50值分別為13.6、12.0、7.5、9.0 μmol·L-1，陽性藥紫杉醇IC50值為0.003 μmol·L-1。

5 結果和討論

本文對條葉龍膽進行化學成分和生物活性研究，并且首次從該植物中分離得到9個環烯醚萜苷類化合物，其中4個化合物具有選擇性抑制HepG2增殖活性。本研究結果對于從條葉龍膽中尋找抗腫瘤先導化合物具有一定的參考意義。

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IridoidsfromGentianamanshuricaandTheirAnti-tumorActivity

ZHOU Yanli，ZHANG Yan*，LI Shuoxi，LI Yingqin，LI Boqian，WANG Aili

(JiamusiCollege，HeilongjiangUniversityofChineseMedicine，Jiamusi154007，China)

Objective:To study the iridoids inGentianamanshuricaand their cytotoxic activity aiming at the new anti-tumor drug discovery.MethodsPhytochemical investigation and cytotoxic activity were carried out.ResultsNine iridoids were obtained and elucidated as rehmachingiioside A (1)，rehmachingiioside E (2)，6-keto-8-acetylharpagide (3)，6，7-dehydro-8-acetylharpagide (4)，scrodentoside A (5)，morinlongoside C (6)，3′-O-β-D-glucopyranosyl sweroside (7)，rehmaglutoside B (8)，and rehmaglutoside C (9).Among them，compounds 1，4，5，and 8 exhibited anti-tumor activity against HepG2 cell with IC50values of 13.6，12.0，7.5，and 9.0 μmol·L-1，respectively.ConclusionThe compound 1-9 were isolated fromG.manshuricafor the first time.

Gentianamanshurica；iridoid；anti-tumor activity

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.9.006

黑龍江中醫藥大學?；?201736)

*

張艷，講師，研究方向：中草藥微量活性成分；Tel：(0545)6103257；E-mail:tonyyan20081982@163.com

2017-01-14)