反相高效液相色譜法同時測定面痤凈軟膏中甲硝唑與氯霉素的含量

劉 麗，金 鑫，韓 鳳

(四平市食品藥品檢驗所化學室，吉林 四平 136000)

反相高效液相色譜法同時測定面痤凈軟膏中甲硝唑與氯霉素的含量

劉 麗*，金 鑫，韓 鳳

(四平市食品藥品檢驗所化學室，吉林 四平 136000)

目的：建立同時測定面痤凈軟膏中甲硝唑、氯霉素含量的測定方法。方法：采用反相高效液相色譜法同時測定面痤凈軟膏中甲硝唑、氯霉素的含量。色譜柱為Inertsil ODS-3柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相為0.01 mol/L庚烷磺酸鈉緩沖溶液-甲醇(V∶V=68 ∶32)，檢測波長為277 nm。結果：甲硝唑在0.06～0.75 mg/ml范圍內呈良好的線性關系，平均加樣回收率為97.6%，RSD=1.5%(n=9)。氯霉素在0.02～0.25 mg/ml范圍內呈良好的線性關系，平均加樣回收率為99.4%，RSD=1.6%(n=9)。結論：本方法簡便可靠，專屬性強，重現性好，可用于面痤凈軟膏的質量控制。

面痤凈軟膏； 甲硝唑； 氯霉素； 反相高效液相色譜法

面痤凈軟膏為吉林省第二榮復軍人醫院結合多年臨床經驗，以甲硝唑、氯霉素為主藥，加入冰片、升華硫等研制而成。其對頑固性皮膚病痤瘡、脂溢性皮炎等療效良好且不良反應少。本研究采用高效液相色譜法同時測定制劑中甲硝唑、氯霉素的含量，為質量控制提供依據[1]。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010CHT型高效液相色譜儀(日本島津公司)；BP211D型電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)。

1.2 藥品與試劑

面痤凈乳膏(吉林省第二榮復軍人醫院，規格：含甲硝唑30 mg/g、氯霉素10 mg/g，批號：20160607、20160608、20160609)；甲硝唑對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100191—201507，含量以100%計)；氯霉素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：130555—200602，含量以99.4%計)；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Inertsil ODS-3柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為0.01 mol/L庚烷磺酸鈉緩沖溶液(取磷酸二氫鉀6.8 g，用0.01 mol/L庚烷磺酸鈉溶液溶解并稀釋至1 000 ml，再加三乙胺5 ml，混勻，用磷酸調節pH至2.5)-甲醇(V∶V=68 ∶32)；檢測波長為277 nm；理論板數按甲硝唑峰計算≥2 000，甲硝唑與氯霉素的分離度≥2.0，進樣量為10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液：分別取甲硝唑對照品、氯霉素對照品適量，加甲醇(每10 mg氯霉素加甲醇1 ml)使溶解，用流動相稀釋制成每1 ml中含氯霉素0.1 mg、含甲硝唑0.3 mg的混合溶液，即得[2-5]。

2.2.2 供試品溶液：取供試品適量(約相當于甲硝唑30 mg、氯霉素10 mg)，精密稱定，置于100 ml容量瓶中，加甲醇5 ml，加熱使基質溶散均勻，加磷酸鹽緩沖液(pH=6.0)適量，振搖15 min，加磷酸鹽緩沖液(pH=6.0)稀釋至刻度，搖勻，離心，過濾，濾液作為供試品溶液[2-5]。

2.2.3 雙陰性樣品溶液：取處方中除去甲硝唑、氯霉素制成的雙陰性樣品，按照“2.2.2”項下方法制備，即得[2-5]。

2.3 系統適用性試驗

分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液、雙陰性樣品溶液各10 μl，按“2.1”項下色譜條件進樣測定[6-9]。結果顯示，甲硝唑峰理論板數為15 000，甲硝唑與氯霉素的分離度為21.0，完全分離，且陰性樣品無干擾，見圖1。

A.氯霉素定位；B.混合對照品溶液；C.供試品溶液；D.雙陰性樣品溶液A. chloramphenicol location; B. mixed reference substance solution; C. test solution; D. double negative sample solution圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關系試驗

取甲硝唑、氯霉素對照品適量，用甲醇溶解后，加磷酸鹽緩沖液(pH=6.0)-甲醇(V∶V=95 ∶5)分別稀釋成含甲硝唑0.06、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75 mg/ml，含氯霉素0.02、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25 mg/ml的溶液，分別按照“2.1”項下色譜條件進樣10 μl，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(Y)，濃度為橫坐標(X)，繪制標準曲線，甲硝唑的線性回歸方程為Y=9.527×106X+7.209×103，r=0.999 9；氯霉素的線性回歸方程為Y=2.015×107X+7.206×103，r=0.999 6。表明甲硝唑在0.06～0.75 mg/ml范圍內、氯霉素在0.02～0.25 mg/ml范圍內，線性關系良好。

2.5 精密度試驗

精密吸取含0.3 mg/ml甲硝唑、10 mg/ml氯霉素的混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定6次，記錄色譜圖。結果表明，甲硝唑峰面積的RSD為0.2%，氯霉素峰面積的RSD為0.5%，本方法精密度良好。

2.6 重復性試驗

取樣品(批號：20160607)6份，每份約1 g，精密稱定，按照“2.2.2”項下的方法制成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。結果表明，甲硝唑平均含量的RSD為0.9%，氯霉素平均含量的RSD為0.6%，本方法重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗

稱取樣品(批號：20160607，甲硝唑含量：99.5%，氯霉素含量：99.9%)共9份，每份約1 g，按照“2.2.2”項下的方法制成供試品溶液，精密加入高、中、低含量的混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算回收率。甲硝唑平均回收率為97.6%，RSD為1.5%，氯霉素平均回收率為99.4%，RSD為1.6%(n=9)，見表1—2。

表1 甲硝唑加樣回收率試驗結果Tab 1 Recovery test of Metronidazole

表2 氯霉素加樣回收率試驗結果Tab 2 Recovery test of Chloramphenicol

2.8 樣品含量測定

取3批樣品(批號：20160607、20160608、20160609)，按照“2.2.2”項下的方法制成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，以峰面積計算供試品中甲硝唑、氯霉素的含量[10]。結果表明，甲硝唑、氯霉素含量測定結果均在90%～110%之間。

表3 甲硝唑、氯霉素含量測定結果Tab 3 Content determination of metronidazole and chloramphenicol

3 討論

面痤凈軟膏為O/W型軟膏劑，由藥物與油脂性基質混合制成。本研究采用適宜的溶劑(甲醇)加熱先將藥物從基質中溶解分散后再用流動性提取進行含量測定。由于該制劑有2種主藥成分，本文采用一測多評法同時測定甲硝唑、氯霉素的含量，分別根據《中華人民共和國藥典：二部》(2015年版)“甲硝唑片”和“氯霉素”項下的波長和流動相進行驗證，確定以0.01 mol/L庚烷磺酸鈉緩沖溶液-甲醇(V∶V=68 ∶32)為流動相，檢測波長為277 nm時色譜峰柱效高、重現性好、專屬性強、分離度、靈敏度高且陰性無干擾[11-13]。該法縮短了檢驗周期，可用于面痤凈軟膏的質量控制。

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Simultaneous Determination of Metronidazole and Chloramphenicol in Miancuojing Ointment by RP-HPLC

LIU Li,JIN Xin,HAN Feng

(Chemical Room,Siping Institute for Food and Drug Control,Jilin Siping 136000,China)

OBJECTIVE: To establish the method for simultaneous determination of metronidazole and chloramphenicol in Miancuojing ointment. METHODS: To determine the content of metronidazole and chloramphenicol simultaneous in Miancuojing ointment by RP-HPLC. The column was Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5 μm),the mobile phase was 0.01 mol/L sodium heptanesulfonate buffer-methanol (V∶V=68 ∶32),the detection wavelength was 277 nm. RESULTS: Metronidazole within the range of 0.06-0.75 mg/ml showed a good linear relationship,and the average recovery rate was 97.6%,RSD=1.5%(n=9). Chloramphenicol within the range of 0.02-0.25 mg/ml showed a good linear relationship,the average recovery rate was 99.4%,RSD=1.6%(n=9). CONCLUSIONS: This method is simple and reliable with strong specificity,good reproducibility,and can be used for quality control of Miancuojing ointment.

Miancuojing ointment; Metronidazole; Chloramphenicol; RP-HPLC

R927.2

A

1672-2124(2017)08-1083-03

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.08.029

2017-01-21)

*副主任藥師。研究方向：藥物分析。E-mail：xiaoyu_di@sina.com