乳腔鏡腋窩淋巴結清掃對外周血ICAM-1、CD44表達的影響及其意義*

駱成玉 王 萌 葛沙沙 崔智淼

(首都醫科大學附屬復興醫院乳腺微創中心，北京 100038)

·臨床研究·

乳腔鏡腋窩淋巴結清掃對外周血ICAM-1、CD44表達的影響及其意義*

駱成玉**王 萌 葛沙沙 崔智淼

(首都醫科大學附屬復興醫院乳腺微創中心，北京 100038)

目的探討乳腔鏡腋窩淋巴結清掃治療乳腺癌的腫瘤學安全性。方法2013年4月～2014年4月，將我院收治的52例乳腺癌患者按患者意愿分成乳腔鏡腋窩淋巴結清掃組(乳腔鏡組，26例)和常規腋窩淋巴結清掃組(常規組，26例)。術前、術后1天、術后3天、術后5天抽取靜脈血，應用ELISA法分析2組細胞間黏附分子1(ICAM-1)及CD44的表達水平。結果乳腔鏡組與常規組術前、術后1天、術后3天、術后5天靜脈血ICAM-1及CD44水平均無明顯差異(P>0.05)。結論乳腔鏡腋窩淋巴結清掃術與常規清掃手術一樣，沒有增加外周血ICAM-1、CD44的表達，具有一定的腫瘤學安全性。

乳腺癌； 血液播散； 乳腔鏡腋窩淋巴結清掃； 細胞間黏附分子1； CD44

在乳腺癌手術中，腔鏡腋窩淋巴結清掃術的徹底性已被廣泛認可，但腋窩脂肪溶解抽吸是否使得腫瘤細胞入血從而增加術后血循環微轉移的風險的問題仍存在爭議。診斷腫瘤的血循環微轉移尚無直接證據?，F有研究顯示，細胞間黏附分子(intercellular adhesion molecule 1，ICAM-1)和CD44等細胞表面黏附分子對細胞間的相互作用具有重要意義，通過與其配體結合介導白細胞與血管內皮細胞的黏附并降低自然殺傷細胞的活性，增加腫瘤細胞浸潤及轉移功能，促進腫瘤轉移。其在外周血中的表達可以為腫瘤的轉移或預后提供有效的預測信息，可以用來監測腫瘤分期和疾病分級，評價各種治療方法的有效性[1～4]。腫瘤患者血清ICAM-1及CD44水平與腫瘤存在及治療反應有關，提示其可作為疾病監測的標志物，是一種檢測腫瘤存在及轉移的非創傷性方法，在評價乳腺癌術后癌細胞有無血循環微轉移方面具有重要作用[5～7]。本研究應用酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，通過測定乳腔鏡腋窩淋巴結清掃術(mastoscopic axillary lymph node dissection，MALND)和常規腋窩淋巴結清掃術(conventional axillary lymph node dissection，CALND)的術前、術后1天、術后3天、術后5天血ICAM-1及CD44的表達水平，探討MALND對乳腺癌血行轉移的可能影響。

1 臨床資料與方法

1.1 一般資料

本研究經醫院倫理委員會審批(2013HY第018號)，所有入組者均被詳細告知研究細節并簽署書面知情同意書。納入標準：病理確診乳腺癌，年齡<80歲，腋窩淋巴結經術前臨床觸診、彩超檢查陽性或術前病理明確轉移。排除標準：有遠處轉移的Ⅳ期，合并其他部位惡性腫瘤病史，已存在引起患側上肢水腫的疾病，既往有患側腋窩手術史。2013年4月～2014年4月，在充分溝通的基礎上，以患者意愿為主要參照行乳腔鏡腋窩淋巴結清掃(乳腔鏡組)和常規腋窩淋巴結清掃(常規組)各26例，2組一般資料無統計學差異(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 2組一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 手術方法 2組手術均為同一組醫師實施。

常規組：按照傳統開放手術方式完成CALND和乳腺癌改良根治術。

乳腔鏡組[6]：先行腋窩脂肪溶解抽吸MALND，再行乳腺癌改良根治術。MALND主要步驟：固定體位以充分暴露術區；配制脂肪溶解液并注入腋區；溶脂起效后行腋窩脂肪抽吸；建立腋窩氣腔以制造手術操作空間；行腋窩淋巴結清掃。

1.2.2 樣本的采集、處理、保存和測定 術前、術后1天、術后3天、術后5天采集外周靜脈血約5 ml，肝素抗凝，離心后取上清液置于-80 ℃冰箱保存，統一檢測。ELISA步驟：向孔內加入100 μl生物素標記的抗ICAM-1或CD44抗體，室溫下放置30 min；洗滌4次；加入100 μl辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素抗體，用黏性紙張貼在板子上，室溫下放置30 min；洗滌4次；加入100 μl四甲基聯苯胺(TMB)底物反應液，室溫下放置10～20 min；加入100 μl終止液。溶液顏色應該從藍色變成黃色。輕輕拍板子，保證孔內液體充分混勻，在30 min內用酶標儀測定OD值，波長為450 nm，630 nm波長OD值為參照， 分別得到ICAM-1、CD44的濃度和其對應OD值，結果見表2，繪制標準曲線。根據標準曲線得到相應的稀釋樣品的值，ICAM-1乘80，CD44乘20，從而得到各自的蛋白濃度。

表2 ICAM-1和CD44樣品濃度-OD對應表

1.3 統計學處理

2 結果

2組術前、術后1天、術后3天、術后5天ICAM-1和CD44水平均無統計學差異(P>0.05)，見表3。

表3 2組ICAM-1和CD44水平比較 ng/ml

3 討論

MALND在保證腋窩淋巴結清掃效果的前提下，進一步降低手術并發癥的發生風險，術后能夠獲得較好的上肢功能，因瘢痕創傷小而具有較佳的胸部及腋窩視覺效果，以及由此產生的乳房功能效果[8～11]，在乳腺癌外科治療中的地位也逐漸提升，但目前對MALND腫瘤學安全性的研究尚不多。

ICAM-1是作用較強的黏附分子之一，屬免疫球蛋白超家族，其特異性抗體為存在于淋巴細胞表面的淋巴細胞功能相關抗原1(lymphocyte function associated antigen 1,LFA-1)，在正常細胞不表達或僅有微量表達，在乳腺癌組織中高表達。ICAM-1促進白細胞與內皮細胞之間的黏附可能是誘導血管生成的起始事件[12]。ICAM-1與腫瘤的生物學行為有關，主要起異嗜黏附作用，且實體腫瘤的生長、轉移與腫瘤中表達水平有關。何軍等[13]觀察到有轉移的乳腺癌組織中ICAM-1水平明顯高于無轉移的乳腺癌組織，淋巴結轉移陽性者ICAM-1水平明顯高于淋巴結轉移陰性者。鄭輝等[14]觀察到ICAM-1及LFA-1與乳腺癌的淋巴道轉移有關，并且通過兩者的協同作用促進乳腺癌的淋巴道轉移，ICAM-1表達水平與乳腺癌的淋巴道轉移呈正相關，可作為數據指標預測和治療乳腺癌的淋巴轉移，其作用機制與增加癌細胞之間排斥、促進癌細胞與淋巴細胞之間黏附有關。CD44即Hermes抗原，是廣泛表達于細胞表面的一類單鏈糖蛋白，參與細胞運動及細胞內外的信號轉導，介導淋巴細胞與毛細血管后微靜脈的內皮細胞結合，通過與細胞內骨架蛋白結合而增強腫瘤細胞的運動能力，或與透明質酸結合形成降解物而促進腫瘤細胞滋養血管的生長，在腫瘤細胞轉移中起重要作用。研究證實乳腺癌轉移者CD44高表達，不同病理類型的乳腺癌組織間無統計學差異，但CD44高表達與乳腺癌的總生存期和無病生存期無統計學意義上的緊密聯系[15，16]。焦偉等[17]觀察到乳腺癌組織中CD44陽性表型細胞比例決定腋窩淋巴結轉移程度。包俊杰等[18]觀察到CD44陽性表達與乳腺癌浸潤轉移關系密切。人乳腺癌細胞株的研究證實，CD44參與乳腺癌細胞的運動、黏附和浸潤，從而促進轉移[19]。吳磊等[20]的研究顯示，沉默CD44表達可有效抑制乳腺癌細胞的增殖和侵襲能力。因此，ICAM-1和CD44等細胞表面黏附分子對細胞間的相互黏附等具有重要作用，對于判斷轉移具有指導和預測意義。

本研究應用ELISA法測定接受乳腔鏡和常規腋窩淋巴結清掃術的乳腺癌患者術前、術后1～5天血ICAM-1及CD44的表達水平，結果顯示，2組血ICAM-1及CD44的表達水平在各時點均無明顯差異。2組術后ICAM-1及CD44的表達水平均較術前下降，是手術解決了腫瘤負荷的正?，F象，側面反映了ICAM-1及CD44的表達水平對腫瘤的預測及指導作用。因此，我們認為MALND對癌細胞血循環微轉移無影響，進一步證明乳腺癌MALND在腫瘤學方面的安全性。

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EffectsandSignificanceofMastoscopicAxillaryNodeDissectiononExpressionofICAM-1andCD44inPeripheralBlood

LuoChengyu,WangMeng,GeShasha,etal.

BreastMinimallyInvasiveCenter,AffiliatedFuxingHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100038,China

Correspondingauthor:LuoChengyu,E-mail:luochengyu@163.com

ObjectiveTo investigate the oncologic safety of mastoscopic axillary lymph node dissection (MALND).MethodsA total of 52 patients with breast cancer were divided into two groups depending on patient’s choice: the MALND group (mastoscopic axillary lymph node dissection,n=26) and CALND group (conventional axillary lymph node dissection,n=26). The blood samples of the two groups were examined at preoperation and the 1st, 3rd, and 5thday after operation to analyze and compare the expressions of intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) and CD44.ResultsThere were no statistical differences in serum levels of ICAM-1 and CD44 between the two groups at preoperation and the 1st, 3rd, and 5thday after operation (P>0.05).ConclusionsAs compared with CALND, MALND does not increase the expression of ICAM-1 and CD44 in peripheral blood. MALND is oncologically safe.

Breast cancer; Blood dissemination; Mastoscopic axillary lymph node dissection; Intercellular adhesion molecule 1; CD44

A

：1009-6604(2017)09-0769-03

10.3969/j.issn.1009-6604.2017.09.001

2017-03-11)

(

2017-05-15)

(責任編輯：王惠群)

北京市科學技術委員會“首都臨床特色應用研究”(項目編號:Z131107002213145)

**通訊作者，E-mail：luochengyu@163.com