劉利俊
(內蒙古烏蘭察布市中心血站成分科,內蒙古 烏蘭察布 012000)
?基礎研究?
甘油對冰凍解凍紅細胞質量的影響觀察
劉利俊
(內蒙古烏蘭察布市中心血站成分科,內蒙古 烏蘭察布 012000)
目的觀察甘油對冰凍解凍紅細胞質量的影響。方法 選取保存于2~6℃RH陰性去白細胞懸浮紅細胞10袋,-80℃冰凍并予ACP215全自動血細胞處理儀解凍,根據不同方法分為實驗組與對照組,前者5袋冰凍解凍去甘油,后者5袋不去甘油,觀察冰凍解凍去甘油紅細胞質量指標情況。結果兩組冰凍解除去甘油紅細胞中甘油殘余量、游離血紅蛋白濃度和血紅蛋白含量對比;差異無統計學意義(P>0.05);質量控制標準為:甘油殘余量≤10 g/L;游離血紅蛋白濃度≤1 g/L;血紅蛋白≥16 g/L。結論制備冰凍解凍去甘油紅細胞與國家標準均符合,且可為臨床搶救獲取更多時間。
甘油;冰凍解凍紅細胞質量;影響
隨著近年來我國廣泛開展成分輸血,Rh(D)陰性血用量隨之增長。超低溫甘油化冰凍保存紅細胞是血站貯備,若臨床急需可及時予以解凍洗滌,很大程度上爭取更多的搶救時間[1]。甘油化制備冰凍解凍紅細胞為長時間保存Rh(D)陰性血理想方案,本研究予ACP215全自動血細胞處理儀對2種冰凍紅細胞予以去甘油洗滌,且檢測2種方案制備冰凍解凍去甘油紅細胞質量,獲取滿意效果,現報告如下。
冰凍解凍去甘油紅細胞、一次性無菌空袋、9%Nacl、6%羥乙基淀粉溶液、0.9%Nacl一次性注射器、、一次性輸血器、分漿夾、掛鉤、止血鉗。無菌接管機、電子秤、DL-6M離心機、脫色搖床、血液分漿夾、高頻熱合機。
取6 d內紅細胞懸液10袋,2500轉/分離心10分鐘,分離上清液并移到六珠袋內,加入甘油,每分鐘振動60次,直至甘油加完排空袋內空氣;甘油化細胞置入室溫下半小時后,離心取100 mL上清液,冰凍保存于-80℃冰箱內,5袋甘油化紅細胞不去甘油,另外5袋甘油化冰凍紅細胞,切勿疊加放置。保存30 d后將冰凍紅細胞取出置入37~40℃恒溫水浴箱內熔化,血袋全部浸沒于水,輕輕振動使其快速融化,不得用手搓捏未融化的紅細胞,直至冰凍紅細胞完全解凍;予ACP215全自動血細胞處理儀選取去甘油程序,將裝有9%NaCl洗滌溶液袋用無菌接管機通過輸液器與三珠袋相連,調整輸液器滴速,注入9 %NaCl溶液80 mL,20分鐘加完,平衡5分鐘。再加入100 mL羥乙基淀粉溶液,先慢后快,10分鐘加完,平衡5分鐘。以2500轉/分離心8分鐘,去除上清。滴加100 mL羥乙基淀粉溶液,10分鐘內加完,平衡5分鐘。再加入0.9%NaCl溶液150 mL,30分鐘加完。2500轉/分,離心8分鐘,去除上清。滴加0.9 %NaCl溶液150 mL,加至一半時,平衡5分鐘。再調整滴速至90滴/分,20分鐘加完,2500轉/分,離心8分鐘,去除上清。滴加0.9 %NaCl溶液100 mL,2500轉/分,離心8分鐘,去除上清。洗滌上清液應無明顯溶血跡象,最后加入0.9 %NaCl 溶液100 mL,懸浮后供臨床使用。最后予鄰聯甲苯胺法對游離血紅蛋白進行檢測,血紅蛋白含量予血細胞計數儀檢測,甘油殘余量予過碘酸鈉法檢測,B-D細菌培養與檢測系統予以細菌培養、檢測。
觀察并對比2組冰凍解除去甘油紅細胞質量,包括甘油殘余量、游離血紅細胞含量、血紅蛋白含量。分析質量控制標準,甘油殘余量≤10 g/L,殘余白細胞≤1*107/U,游離血紅細胞≤1 g/L,血紅蛋白16 g/L[2]。
采用SPSS 22.0統計學軟件對數據進行分析,計量資料以“s”表示,采用t檢驗;以P<0.05為差異有統計學意義。
兩組冰凍解除去甘油紅細胞中甘油殘余量、游離血紅蛋白濃度、血紅蛋白含量對比;差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。
表1 對比兩組冰凍解除去甘油紅細胞質量指標(s,g/L)
表1 對比兩組冰凍解除去甘油紅細胞質量指標(s,g/L)
組別(n=袋數) 甘油殘余量 游離血紅蛋白濃度 血紅蛋白含量實驗組(n=5) 6.57±1.41 0.33±0.12 16.52±0.48對照組(n=5) 6.35±1.27 0.34±0.14 16.71±0.52
甘油殘余量:≤10 g/L;游離血紅蛋白濃度:≤1 g/L;血紅蛋白:≥16 g/L。
冷凍保存RH陰性血為保存稀有血液唯一途徑,經大量臨床研究均獲得認可,但制備冰凍解凍去甘油紅細胞的環節較為復雜[3,4]。作為采供血機構,于單位或者街頭開展血液收集與獻血招募時,因為受到時間、環境等外部因素的制約,針對獻血者RH血型不予以檢測,僅當血液收集至血站后再采取相關儀器設備予以檢測,最終確定獻血者血型是否為RH型[5]。因為臨床通常較少使用RH陰性血液,故若血站6℃保存RH陰性血液比較多的時候,且可能存在A、B、O血型等不同情況,從而極易導致血液過期報廢[6]。紅細胞冰凍技術發明、應用,可有效解決上述問題,不僅避免采集RH陰性血液因臨床未及時使用而導致過期報廢情況的發生,而且可確保臨床需要RH陰性血液時及時供應。紅細胞保存于-80℃冰凍可延長保存時間,并提高保存效果,為目前臨床最有效的一種長期保存紅細胞方案,同時屬于稀有血型自身輸血重要手段。本研究采取的ACP215全自動細胞處理儀已有效代替以往手工制備法,不僅避免消耗時間過長,而且減小污染風險。ACP215全自動處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細胞為全封閉式,其制備時間比較短,僅耗時60 min,可有效縮短患者搶救等待時間,降低血液污染率與勞動強度,進而實現血站規范化、標準化及自動化制備模式。經研究結果發現:2組冰凍解除去甘油紅細胞中甘油殘余量、游離血紅蛋白濃度、血紅蛋白含量對比均無統計學意義;質量控制標準為甘油殘余量:≤10 g/L;游離血紅蛋白濃度:≤1 g/L;血紅蛋白:≥16 g/L提示冰凍解凍去甘油與不去甘油均與國家標準相符合,但冰凍解凍去甘油紅細胞可為臨床搶救獲取更多時間。分析原因可能為:甘油是紅細胞內低溫保護劑,能夠有效降低紅細胞于冷凍時電解質濃度下降,避免細胞膜脂蛋白復合物發生變性,以及類脂質丟失,進而防止發生溶血情況。
總結上文,冰凍紅細胞冰凍前不去甘油與去除甘油,制備冰凍解凍去甘油紅細胞與國家標準均符合,但后者能夠為臨床搶救獲取更多時間。
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R457.1
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ISSN.2095-8242.2017.069.13474.02
本文編輯:趙小龍