雷 楊,韓 宇
(1.通化市食品藥品檢驗所,吉林 通化 134000;2.吉林市食品藥品檢驗所,吉林 吉林 132000)
HPLC法測定胃痛丸中延胡索乙素的含量
雷 楊1,韓 宇2
(1.通化市食品藥品檢驗所,吉林 通化 134000;2.吉林市食品藥品檢驗所,吉林 吉林 132000)
胃痛丸由沉香、丁香、延胡索(醋炒)、姜半夏、當歸等18味中藥材組成,延胡索為主藥。對治療經閉痛經,產后瘀阻,跌撲腫痛有較好療效。
胃痛寧丸;延胡索乙素;反向高效液相色譜法
紫外-可見分光光度計:日本島津UV-1700;高效液相色譜儀:戴安Ultimate3000、日立;對照品為延胡索乙素,對照品、試劑均在有資質的經銷商處購買。
1.2.1 儀器、試劑與標準物質
色譜柱:C18(4.6×250 mm,5 μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調pH值至6.0)(55:45);檢測波長、280 nm。
1.2.2 對照品溶液的制備
取延胡索乙素對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1 mL含46 μg的溶液,即得。
1.2.3 供試品溶液的制備
取本品研細,取約1.0 g,精密稱定,置平底燒瓶中,精密加入濃氨試液-甲醇(1:20)混合溶液50 mL,稱定重量,冷浸1小時后加熱回流1小時,放冷,再稱定重量,用濃氨試液-甲醇(1:20)混合溶液補足減失的重量,搖勻,濾過。精密量取續濾液25 mL,蒸干,殘渣加甲醇溶解,轉移至5 mL量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得見圖1、圖2。
圖1
圖2
取延胡索乙素對照品甲醇溶液,經UV-1700型紫外-可見分光光度計在250~300 nm范圍內測定延胡索乙素在280.3 nm的波長處有最大吸收
分別采用乙腈-0.1%冰醋酸溶液(60:40)、甲醇-0.1%冰醋酸溶液(55:45)、甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調pH值至6.0)(55:45)為流動相,結果以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調pH值至6.0)(55:45)為流動相,保留時間適宜且色譜峰對稱性好,主峰與雜質峰分離度大。溶劑在主峰保留時間處無色譜峰,不存在干擾。用二極管陣列檢測器對色譜峰純度進行檢測,確定供試品中延胡索乙素為單一成分,故擬定標準選擇甲醇-0.1%磷酸溶液(7:93)為流動相。
供試品溶液提取溶劑的確定:
(1)方法為上述供試品提取方法
(2)取供試品1.0 g,加氨試液2 mL使濕潤,精密加甲醇50 mL,稱定重量,加熱回流2小時,防冷,再稱定重量,用甲醇補足損失的重量,搖勻,取續濾液作為供試品溶液。實驗結果顯示方法1提取完全,分離效果好。
正文中提取時間為冷浸1小時后加熱回流1小時,同時我們也考察了冷浸2小時,加熱回流2小時,結果是正文中提取的雜質少,主峰含量高,故選冷浸1小時后加熱回流1小時為該方法的提取時間。
結果表明延胡索乙素在0.12519~1.3687 mg,線性關系良好。
數據顯示,本方法精密度良好。
取同一供試品,依正文方法獨立測定6份,數據顯示本法重復良好。
取重復性試驗同批次樣品(含量:0.058 mg/g)6份,每份取約0.5 g,精密稱定,再分別加入延胡索乙素對照品適量,按標準正文含量測定項下方法測定,計算回收率。實驗結果表明,本方法回收率良好,該方法適合本品的含量測定。
精密吸取同一供試品溶液5 μL,分別在0,2,8,12,16,22 h進樣,計算峰面積的RSD值。結果表明供試品溶液在22h內穩定。
我們對取樣量、提取方法、流動相類型、流動相比例、提取溶劑、提取時間都進行了細致的考察,結果是按上述條件分離效果好,提取完全,含量高,方法相對簡便。同時也考察了陰性和溶劑,確定無干擾。
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ISSN.2095-8242.2017.069.13475.02
本文編輯:趙小龍