生食三文魚中副溶血性弧菌污染調查及耐藥性分析

古小莉，李惠青，呂曉瑜，李永賢，楊宏亮，黃 珂

(中國水產科學研究院南海水產研究所，農業部水產品加工重點實驗室，農業部水產品貯藏保鮮質量安全風險評估實驗室，廣東 廣州 510300)

副溶血性弧菌(Vibrioparahemolyticus)為革蘭氏陰性嗜鹽菌，廣泛分布于近海海域和海產品中，是引起食物中毒的主要病原菌之一，食用被副溶血性弧菌污染的食物可引起嘔吐、腹瀉等癥狀胃腸炎、敗血癥甚至死亡[1-2]。根據國家和廣東省食源性致病菌監測網統計[3-6]，自1998年以來，我國微生物性食物中毒的病原分布發生了顯著的變化，由副溶血性弧菌引起的食物中毒，已成為我國沿海地區微生物性食物中毒首位。

作為生食水產品消費重要地區，廣州地區生食水產品中副溶血性弧菌的污染狀況不容樂觀。對廣東省生食水產品副溶血性弧菌污染調查結果顯示[7-9]，生食水產品中副溶血性弧菌污染情況普遍，副溶血性弧菌已成為生食水產品的主要風險因子。三文魚是一種味道鮮美深受廣大消費者喜愛的生食水產品，市場流通的三文魚大多為冷藏進口，其在生長水域、長途運輸、存儲、銷售和食用加工等環節容易受到副溶血性弧菌的污染。隨著水產養殖業及臨床上抗生素的廣泛及不規范使用，副溶血性弧菌耐藥性日益嚴重[10-13]，耐藥菌可通過食物鏈直接轉移至人體內[14]，給臨床治療帶來了巨大挑戰，已嚴重威脅人類健康。為了解廣州市市售生食三文魚中副溶血性弧菌的污染狀況及分離株的耐藥情況，本研究對廣州市的批發市場、農貿市場及超市售賣的生食三文魚進行副溶血性弧菌污染調查及耐藥性分析，以期為生食三文魚副溶血性弧菌防控及對指導和規范臨床用藥提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

副溶血性弧菌ATCC17802，大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)ATCC25922均購自廣東環凱微生物有限公司。

1.1.2 儀器與試劑

Vitek 2 Compact 30全自動微生物鑒定儀(法國生物梅里埃公司)；3%NaCl堿性蛋白胨水(廣東環凱生物有限公司)；弧菌顯色培養基(法國科瑪嘉公司)；細菌鑒定GN卡及藥敏試驗AST-GN14卡(法國生物梅里埃公司)。

1.2 方法

1.2.1 采樣

2016年1—10月期間從廣州市的批發市場、農貿市場和超市按隨機采樣原則采集生食三文魚65份，其中批發市場43份，農貿市場和超市各11份，每份樣品約200 g均采用無菌方法采集，無菌采樣后置4 ℃低溫保存，3～8 h內完成檢測。

1.2.2 生食三文魚中副溶血性弧菌的分離和鑒定

副溶血性弧菌的分離根據GB 4789.7—2013《食品衛生微生物學檢驗：副溶血性弧菌檢驗》[15]方法，以無菌操作均質樣品，用3%NaCl堿性蛋白胨水增菌液進行增菌培養，用弧菌顯色培養基分離，挑取可疑菌落用Vitek 2 Compact 30全自動微生物鑒定儀進行鑒定。

1.2.3 藥敏試驗

采用Vitek 2 Compact 30全自動微生物鑒定儀的藥敏分析模塊，選取AST-GN14藥敏卡對篩選出的副溶血性弧菌進行藥敏試驗。以大腸埃希氏菌ATCC25922作為藥敏試驗質控菌株。

1.2.4 數據分析

數據統計分析采用SPSS 22.0軟件，x2檢驗比較樣品中副溶血性弧菌陽性率的差異，以P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異非常顯著。

2 結果與分析

2.1 生食三文魚中副溶血性弧菌污染狀況

2.1.1 不同月份生食三文魚中副溶血性弧菌檢出情況

2016年于廣州市共采集生食三文魚65份，副溶血性弧菌陽性23份，副溶血性弧菌總體檢出率為35.38%。其中7月副溶血性弧菌的檢出率最高，為50%，1月檢出率最低，為25%(表1)。不同月份生食三文魚中副溶血性弧菌的檢出率無顯著性差異(x2=2.57，P=0.465)。

表1 不同月份生食三文魚中副溶血性弧菌的檢出情況

2.1.2 不同采樣地點生食三文魚中副溶血性弧菌檢出情況

流通環節中不同的采樣地點副溶血性弧菌檢出情況見表2，批發市場生食三文魚中副溶血性弧菌檢出率最高為48.84%，農貿市場和超市的副溶血性弧菌檢出率均為9.09%。不同采樣地點生食三文魚中副溶血性弧菌的檢出率差異有統計學意義，差異非常顯著(x2=10.06，P=0.007)。

表2 不同采樣地點生食三文魚中副溶血性弧菌檢出情況

2.2 藥敏試驗

從生食三文魚中共分離出63株副溶血性弧菌，分離株對臨床常見的17中抗生素的藥敏試驗結果見表3。由表3可見，全部分離株對阿莫西林、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、慶大霉素、環丙沙星、左氧氟沙星和呋喃妥因等12種抗生素敏感。哌拉西林、頭孢唑啉和四環素有中介敏感菌株，但無耐藥菌株。產生耐藥的菌株有對復方新諾明的耐藥率為6.35%，對氨芐西林的耐藥率高達98.41%。同時耐受兩種藥物(氨芐西林/復方新諾明)的有4株。

3 討 論

2016年對廣州市售生食三文魚中副溶血性弧菌監測的數據表明，廣州市售生食三文魚受副溶血性弧菌污染的情況嚴重，副溶血性弧菌檢出率高達35.38%，高于1999—2000年(18.9%)[16]及2013年(21.43%)[9]?？梢?，廣州市生食三文魚副溶血性弧菌污染呈逐年上升的趨勢。不同地點采集的生食三文魚中副溶血性弧菌檢出率差異非常顯著(P<0.01)，其中陽性樣品大多來自批發市場，批發市場檢出率高達50%，表明批發市場生食三文魚中副溶血性弧菌污染已呈普遍狀態。批發市場副溶血性弧菌檢出率較高或許與其售賣包裝方式及保藏方式容易導致污染有關。批發市場生食三文魚普遍無密實包裝鋪于冰面或無低溫措施直接擺放售賣，而超市和農貿市場為盒裝置于冷柜銷售。

不同月份生食三文魚副溶血性弧菌檢出結果顯示，7月份檢出率最高，達50%，10月份次之(33.3%)。7月和10月屬廣州氣溫最高的季節，溫度高的季節副溶血性弧菌檢出率高，這與李海麟等[17-19]的研究結果相符，研究指出該菌在環境中的分布呈明顯的季節性，與溫度直接相關，溫度越高就越利于副溶血性弧菌生長。因此，消費者在選購新鮮生食三文魚后，若不能立即食用，可將其低溫貯存，以延緩副溶血性弧菌生長。

表3 63株副溶血性弧菌對17種抗生素的敏感性

注：R.耐藥；I.中介敏感；S.敏感.

藥敏結果表明，63株副溶血性弧菌分離株對抗生素的敏感性大致相同，無多重耐藥情況，分離株存在3種耐藥譜：耐氨芐西林、耐復方新諾明和耐氨芐西林—復方新諾明。分離株對阿莫西林、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、慶大霉素、環丙沙星、左氧氟沙星和呋喃妥因等12種抗生素100%敏感，因此上述抗生素可作為廣州地區治療因食用生食三文魚感染副溶血性弧菌的首選抗生素。全部分離株對氨芐西林不敏感，耐藥率高達98.41%。氨芐西林普遍呈耐藥，與相關研究報道氨芐西林耐藥情況相似[10-12]。不能忽略的是，作為美國疾病控制與預防中心推薦兒童治療弧菌感染首選藥物的復方新諾明[20]，在本研究中出現了耐藥株，雖然耐藥情況不嚴重，但已有研究報道副溶血性弧菌對復方新諾明的敏感率為 100%[21-22]，表明副溶血性弧菌的耐藥性已逐漸出現變化，為臨床治療增加了難度。

綜上所述，廣州市售生食三文魚中副溶血性弧菌污染較嚴重，分離的副溶血性弧菌存在一定程度的耐藥情況，食用被副溶血性弧菌污染的生食三文魚可能會引發群體腹瀉等食品安全事件，對公眾健康構成了嚴重的威脅。今后應加強對生食三文魚中副溶血性弧菌的監測和抗生素的使用管理，有效預防和控制副溶血性弧菌的污染，才能提高生食三文魚的食品安全水平。

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