溫度和鹽度對波紋巴非蛤胚胎、幼蟲及稚貝發育的影響

司 和，宋志民，唐賢明，王國福

(海南省海洋與漁業科學院，海南 ?？?570100)

波紋巴非蛤(Paphiaundulata)屬軟體動物門、雙殼綱、簾蛤目、簾蛤科、巴非蛤屬，主要分布于我國及東南亞沿海，在澳大利亞及紅海沿岸也有分布[1]。棲息在低潮線下0.5～44.0 m的泥沙底質或軟泥底質中，營埋棲生活，環境適應性廣，繁殖力強、生長速度快，是淺海增養殖的新品種。同時波紋巴非蛤含有小分子多肽、生物活性肽、糖胺聚糖等活性成分[2-7]，其提取物具有較好的抗氧化性、降血脂等藥用及保健作用[8-15]。由于波紋巴非蛤的養殖苗種主要依靠自然采捕，致使野生苗種逐年減少，苗種短缺成為制約我國波紋巴非蛤養殖發展的瓶頸之一。本文探討了溫度及鹽度對波紋巴非蛤胚胎、幼蟲及稚貝發育的影響，為波紋巴非蛤的苗種繁育提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

智能人工氣候箱(PRX-350B)，顯微鏡(XSP6C)，細胞計數板，50 mL燒杯，250 mL燒杯，培養皿，篩絹。

1.2 試驗方法

試驗親貝殼長(47.7±2.2) mm，殼寬(26.3±1.3) mm，體質量(13.4±2.3) g，2014—2016年連續引自廣西北海。親貝清洗后在室外催熟，主要投喂亞心形扁藻(Platymonassubcordiformis)為主，輔以牟氏角毛藻(Chaetocerosmuelleri)和微綠球藻(Nannochlropsisoculata)。人工催產時先陰干4 h，再流水刺激，之后清洗并收集受精卵進行試驗。

1.2.1 溫度對波紋巴非蛤發育的影響

通過光照培養箱調節不同的溫度來研究溫度對波紋巴非蛤胚胎、幼蟲及稚貝發育的影響，設置溫度梯度為15、20、25、30、35 ℃，鹽度30，光照度1000 lx，晝夜光周期為12 h∶12 h。

1.2.1.1 溫度對波紋巴非蛤胚胎發育的影響

將收集的受精卵按100個/mL的密度放入50 mL小燒杯中，每個燒杯放入35 mL滅菌的海水，微波充氣，每個溫度梯度設置3個平行。12 h后計數統計發育成D形幼蟲的孵化率及畸形率。

1.2.1.2 溫度對波紋巴非蛤幼蟲發育的影響

用400目篩絹收集D形幼蟲，計數后按100個/mL的密度放入250 mL的燒杯中，每個燒杯放入200 mL滅菌的海水，下覆載玻片方便觀察，微波充氣，每個溫度梯度設置3個品行。每隔12 h觀察一次。

1.2.1.3 溫度對波紋巴非蛤稚貝生長的影響

將發育的稚貝放入培養皿中進行觀察，培養皿鋪設1～2 mm厚的細砂。設置密度設為5個/mL。每隔一周計數一次。設置3個平行。

1.2.2 鹽度對波紋巴非蛤發育的影響

通過光照培養箱調節鹽度來研究鹽度對波紋巴非蛤胚胎、幼蟲及稚貝發育的影響，鹽度梯度為15、20、25、30、35，溫度30 ℃，光照度1000 lx，晝夜光周期為12 h∶12 h。試驗方法同相應的溫度試驗，測定孵化率、畸形率、變態率、附著率及存活率。

1.3 數據分析

試驗數據利用Excel 2007及SPSS 20.0進行數據處理和統計分析，采用單因素方差分析或T-test分析，設顯著水平為0.05。

2 結果與分析

2.1 溫度對波紋巴非蛤發育的影響

2.1.1 對胚胎發育的影響

隨著溫度的升高胚胎孵化率逐漸升高，在30 ℃時達到最大值，之后逐漸降低(圖1)?；温逝c孵化率呈負相關，在低溫和高溫時均較高，在30 ℃時達到顯著性的最低值。

2.1.2 對幼蟲發育的影響

幼蟲存活率隨著溫度的升高先升后降，在30 ℃達顯著最大值，25 ℃次之，其他3組存活率都不高，三者均無顯著性差異，15 ℃存活率最低。附著率隨溫度的升高而先升后降，30 ℃附著率最高，20～25 ℃次之，兩者差異不顯著。30 ℃變態率最高，25 ℃次之，20 ℃變態率極低，三者均存在顯著性差異，35 ℃及15 ℃不適合幼蟲的發育生長(圖2)。

2.1.3 對稚貝生長的影響

30 ℃稚貝生長最快，4周后稚貝殼長達(2782±489.5) μm(圖3)。25 ℃生長次之，但在第3周及第4周時與30 ℃差異不顯著。35 ℃不適合稚貝生長，15 ℃生長最慢。

2.2 鹽度對波紋巴非蛤發育的影響

2.2.1 對胚胎發育的影響

隨著鹽度的增高，孵化率逐漸提高，在30時最高，35雖略有下降，但與鹽度30時無顯著性差異(圖4)?；温孰S鹽度的升高先降后升，鹽度30時最低。

2.2.2 對幼蟲發育的影響

幼蟲存活率、附著率及變態率均隨鹽度的升高先升后降(圖5)。在鹽度30時存活率、附著率及變態率都最高。鹽度35與30，幼蟲附著率差異不顯著。鹽度15不適合幼蟲生長。

圖2 溫度對波紋巴非蛤幼蟲發育的影響

圖3 溫度對波紋巴非蛤稚貝生長的影響

圖4 鹽度對波紋巴非蛤胚胎發育的影響

圖5 鹽度對波紋巴非蛤幼蟲發育的影響

2.2.3 對稚貝生長的影響

隨鹽度增高生長速率逐漸加快，鹽度30生長最快，但相比鹽度35差異不顯著(圖6)。鹽度小于20時波紋巴非蛤全部死亡。

圖6 鹽度對波紋巴非蛤稚貝生長的影響

3 討 論

20世紀80年代起，我國對波紋巴非蛤育苗及養殖技術陸續開展了一系列研究[16-19]。吳洪流等[20-22]觀察了波紋巴非蛤的性腺組織組織學，并對性腺發育進行了分期，為育苗工作提供了理論依據及指導。陳何東[23]進行了波紋巴非蛤育苗試驗，在28～29 ℃，海水相對密度1.021～1.022下育成了大量的波紋巴非蛤稚貝，在室外軟泥底池塘中進行了稚貝培育。王萬東等[24-26]在育苗過程中發現，高溫天氣對育苗產生負面影響。徐小偉等[27]系統研究了幾種生態因子對波紋巴非蛤胚胎發育的影響，發現波紋巴非蛤胚胎發育的適宜溫度為27～30 ℃；適宜鹽度為27～33，與本研究的結果一致。徐小偉等[28]對波紋巴非蛤的胚胎發育進行了掃描電鏡觀察，豐富了胚胎發育的形態學內容。洪一川等[29]在室外條件下對波紋巴非蛤進行了催產及幼蟲培育，發現14.6～20 ℃時幼蟲發育緩慢且無法完成變態，23～29.6 ℃時則發育正常，這與本試驗的結果相吻合。陳志等[30]通過響應面法研究了溫度、鹽度和密度交互作用對波紋巴非蛤稚貝生長的影響，結果表明，鹽度對稚貝的生長影響最為顯著，其次是溫度。李俊輝等[31-32]通過研究溫度及鹽度對波紋巴非蛤耗氧率及排氨率的影響發現，15～30 ℃，耗氧率和排氨率隨著溫度的升高而增大；在鹽度20～28時，耗氧率和排氨率隨著鹽度的升高而升高，28～36時，單位耗氧率與排氨率均隨鹽度的增大而降低。王冬梅等[33]發現，在鹽度為24～32時，波紋巴非蛤濾水率隨鹽度的升高而增大，鹽度為32～36時則隨鹽度的增大而減小。陳堅等[1,30]的研究發現，波紋巴非蛤成貝隨著鹽度的升高存活率先升后降，適宜鹽度為24～36。張躍平等[34]首次對波紋巴非蛤胚胎及浮游幼蟲的形態發育和生長特點進行了報道,并與簾蛤科另外5種經濟種類進行了比較。邵艷卿等[35]利用組織學方法對斧文蛤(Meretrixlamarckii)性腺發育及生殖周期進行了研究，在水溫29 ℃、鹽度28、pH 7.8～8.5的條件下由受精卵孵化成D形幼蟲，并經培養最終發育變態為稚貝。

溫度和鹽度是決定育苗成敗的關鍵的重要因子。隨著波紋巴非蛤需求量的逐漸增加，大規模開展育苗工作迫在眉睫。根據近年公布的研究成果，在室外開展波紋巴非蛤育苗工作總是難以持續的獲得波紋巴非蛤成貝，這與南方各海區夏秋兩季的海水特點密切相關。夏季水溫合適，但雨水偏多，加之臺風的影響，海水鹽度變化過大，各育苗中心受此影響較大。進入秋冬季節，臺風雨水減少，水溫下降至偏低的階段，對波紋巴非蛤的育苗工作不利。尋找合適的溫度及鹽度是育苗成敗的關鍵之一，本研究確立了育苗過程中的合適溫度、鹽度，對波紋巴非蛤育苗工作確立了有利條件。但是，其他因素，如餌料、光照、pH值等影響波紋巴非蛤發育的環境因子的研究還不充分，需要深入研究。

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