鼻咽癌及其高危者血清腫瘤特異性生長因子表達水平研究*

周小軍 周鳳姣

鼻咽癌是中國南方高發的惡性腫瘤，其發病與遺傳、環境及EB病毒活化感染等相關，目前已將EB病毒感染者、鼻咽癌前病變者及鼻咽癌高癌家族成員作為鼻咽癌高危者[1]。腫瘤特異性生長因子（Tumor specific growth factor,TSGF）是20世紀 80年代末由加拿大學者首先發現，它由惡性腫瘤產生，是腫瘤及其周邊毛細血管大量增生的物質基礎，隨腫瘤的生長而逐漸釋放到血液中[2]，在惡性腫瘤形成早期即可明顯升高，為惡性腫瘤血清標志物之一，根據腫瘤發生發展規律，任何腫瘤的發生發展都是由腫瘤細胞逐步發展成肉眼可見的腫瘤（1～2cm大?。?，鼻咽癌的發生也是由多種因素共同作用并經過漫長演變而導致的，經鼻咽癌高危者逐步發展為原位癌再到侵潤和轉移。那么TSGF是否在鼻咽癌高危者中有增高表現？不同分期的鼻咽癌，TSGF是否有特征性的規律？這些均值得研究。本項目選擇在鼻咽癌高發區廣東中山市進行，報道如下。

資料與方法

1 臨床資料

病例來源于廣州中醫藥大學附屬中山醫院，從2015年2月～2016年12月的154例患者，鼻咽癌組 31例：男 24例，女 7例；年齡 24～69歲，平均（47.23±10.92）歲；臨床分期，I期 8例、Ⅱ期 6例、Ⅲ期10例、IV期7例。鼻咽癌高危者組43例：男20例，女 23例；年齡 18～68歲，平均（42.86±12.83）歲，鼻咽癌高危者包括EB病毒感染者34例、鼻咽癌前病變者5例、鼻咽癌高癌家族非患癌成員4例。慢性鼻咽炎組17例：男10例，女7例，年齡16～39歲，平均（47.59±11.75）歲；健康對照組 63 例：男 33例，女 30例，年齡 18～69歲，平均（41.00±11.85）歲。

2 鼻咽癌及鼻咽癌高危者診斷標準

鼻咽癌及鼻咽炎的診斷：常規病理確診。以2008年中國鼻咽癌臨床分期工作委員會制定的分期標準對鼻咽癌進行臨床分期[3]。

鼻咽癌高危者包括EB病毒感染者、鼻咽癌前病變者、鼻咽癌高癌家族非患癌成員，診斷標準見下。

EB病毒感染者診斷標準：凡血清學EB病毒相關抗體（早期抗原IgA抗體、殼抗原IgA抗體、核抗原IgA抗體）檢查為陽性者。

鼻咽癌前病變者診斷標準：參照廣東中山大學腫瘤研究所等制定的標準[4]，凡是鼻咽上皮出現中重度異型鱗狀上皮化生或不典型增生即為癌前病變。異型細胞判斷標準為：基底細胞層數明顯增多，細胞大小不一，分化不良，核大異型，核仁明顯，核分裂易見，細胞核漿比例增大,排列極性混亂或消失。鼻咽上皮細胞異型性分級標準為：異型細胞占上皮全層的1/3為輕度異型增生 (Ⅰ級)，占全層的2/3為中度異型增生(Ⅱ級),占全層2/3以上而尚未達全層者,為重度異型增生(Ⅲ級)。

鼻咽癌高癌家族的診斷標準：參照國際遺傳性大腸癌的Amsterdam標準[5]制定，凡連續二代存在3人或3人以上的人患鼻咽癌者稱為鼻咽癌高癌家族，高癌家系成員為與鼻咽癌患者存在1/2血緣關系的成年人，年齡大于25歲小于65歲。

3 納入及排除標準

納入標準：符合鼻咽癌、鼻咽炎及鼻咽癌高危者的診斷標準，愿意接受血清學檢查者。

排除標準：年齡＜16歲者，或＞70歲者；有其它惡性腫瘤病、糖尿病及免疫性疾病者。

4 TSGF的檢測方法

4.1 實驗標本及主要試劑、儀器

收集研究對象全血標本，室溫放置2小時1000g離心20分鐘，取上清，-80℃保存待測。人TSGF ELISA試劑盒：E-10303，上海恒遠生物科技有限公司產品。酶標儀：芬蘭（Labsystems Multiskan MS），352 型。

4.2 實驗方法

應用雙抗體夾心法測定標本中TSGF水平，操作參考說明書，設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃恒溫箱溫育60min。棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，重復洗板5次。每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值，通過標準曲線計算樣品中TSGF濃度。

5 統計學方法

采用統計軟件SPSS 19.0進行數據分析，所有數據以均數±標準差表示，兩組數據采用獨立樣本t檢驗，多組數據間比較采用方差分析及組內多重比較，P<0.05表示差異有統計學意義。

結果

1 鼻咽癌及鼻咽癌高危者血清TSGF水平

TSGF在鼻咽癌組、鼻咽癌高危組、慢性鼻咽炎組、健康對照組血清水平分別為（100.86±27.74）IU/ml、（99.13±27.70）IU/ml、（98.94±27.51）IU/ml、（86.72±26.11）IU/ml。采用單因素方差分析：四組方差齊（Levene方差齊性檢驗，Levene Statistic=1.065，P=0.366＞0.05）。四組間均值總體比較有顯著性差異（F=2.879，P=0.038<0.05）。兩兩比較經SNK 檢驗，鼻咽癌組、鼻咽癌高危組血清TSGF水平明顯高于健康對照組，P＜0.05，差異有統計學意義。其余各組間比較P＞0.05，差異均無統計學意義。見表1。

表1 鼻咽癌、鼻咽癌高危、慢性鼻咽炎、健康對照血清TSGF水平（IU/ml）

本組病例中，TSGF在慢性鼻咽炎也有一定的升高，其中部分慢性鼻咽炎有較高的水平，因本組鼻咽炎病例，都是內鏡檢查見鼻咽部隆起表面充血，活檢后病理顯示為鼻咽炎，見圖1。

圖1三例慢性鼻咽炎患者鼻咽部病變圖

2 鼻咽癌不同臨床分期血清TSGF水平

TSGF在鼻咽癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期血清水平分別為（71.39±5.73）IU/ml、（101.47±28.26）IU/ml、（112.64±24.85）IU/ml、（117.17±22.77）IU/ml，鼻咽癌血清TSGF水平依Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期進展呈現增高表現，pearson相關分析，相關系數為0.623，P＜0.05。采用單因素方差分析，四組方差不齊（Levene方差齊性檢驗，Levene Statistic=5.086，P=0.006＜0.05），四組間均值總體比較有顯著性差異（F=7.120,P=0.001<0.05，welch檢驗）。兩兩比較經 Dunnett T3進行。鼻咽癌Ⅰ期血清TSGF水平明顯低于鼻咽癌Ⅲ期、Ⅳ期組，P＜0.05，差異有統計學意義。其余各組間比較P＞0.05，差異均無統計學意義，見表2。

表2鼻咽癌不同臨床分期血清TSGF水平（IU/ml）

討論

TSGF是20世紀80年代末由加拿大學者首先在惡性腫瘤患者血清中發現，是一種小分子可溶性黏多肽，是腫瘤發生過程中腫瘤產生的與惡性腫瘤生長相關的糖類物質、氨基酸及其代謝產物的統稱，隨腫瘤的生長而逐漸釋放到血液中，能夠促進腫瘤的形成、生長和擴散，與多種腫瘤相關[6]。

本項目發現鼻咽癌患者血清TSGF水平明顯高于健康對照組，這與既往研究[7，8]鼻咽癌患者的血清TSGF明顯升高相一致。我們同時重點觀察了鼻咽癌高危人群的血清TSGF，顯示其血清TSGF水平也明顯高于健康對照組(P<0.05)，略低于鼻咽癌（P>0.05），說明在鼻咽癌高危者即已經出現TSGF的升高，血清TSGF檢測可作為鼻咽癌高危人群的輔助指標。關于此點，已經有相關學者在腫瘤的高危人群作了相應的研究，如在宮頸癌[9]的研究發現TSGF含量在宮頸鱗狀上皮內瘤變組明顯高于體檢組，在肝癌的高危人群[10]（HBsAg陽性者）中TSGF較AFP、AFU、GGT-Ⅱ有更高的陽性率，在食管上皮癌變[11]（食管上皮重度增生、原位癌及中、晚期癌）的血清TSGF水平明顯高于正常組（P＜0.05），隨著癌變過程，TSGF水平逐漸升高，至癌前病變達到最高值，癌變之后又呈現出下降趨勢。這些研究結果基本與本實驗一致。本項目研究同時發現慢性鼻咽炎組中血清TSGF也有一定程度的升高，（但無統計學差異），我們觀察到這部分鼻咽炎患者均可見到鼻咽新生物并有充血腫脹等炎癥性表現，（經活檢后才確定為鼻咽炎），因為炎癥可出現血管增生，可能也引起TSGF一定程度的升高，如研究肺炎時[12]發現其TSGF水平在急性炎時升高。

在鼻咽癌不同臨床分期中發現隨著鼻咽癌臨床分期的增加，血清TSGF含量升高。說明TSGF與腫瘤的侵潤、擴散及轉移有關，相似研究如在宮頸癌FIGO臨床分期的研究[13]中，也顯示血清TSGF水平與臨床分期呈正相關，差異有統計學意義。

鼻咽癌及其高危者TSGF水平增高，表明血清TSGF對于檢測鼻咽癌及鼻咽癌高危者有一定臨床診斷價值，聯合病原學（如EB病毒）檢測，可提高診斷的準確性，值得在鼻咽癌高危區進行鼻咽癌的篩查應用。