再生障礙性貧血患者血漿IL-35表達水平及其與Tregs細胞的關系研究

劉景珍，葛一蓉，饒 媚

(湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫院兒三科，湖北 恩施 445000)

再生障礙性貧血是由多種疾病所致骨髓造血功能障礙的綜合征，以貧血、出血以及感染為主要臨床表現，其病因較多[1]，目前多認為與病毒感染、放射線以及化學藥物、遺傳因素等有關，相關研究表明再生障礙性貧血發生和發展與骨髓造血干細胞免疫性損傷的關系密切[2]，機體自身免疫反應一旦被不同刺激物激活，將導致調節性T細胞(Tregs)出現異常表達，并釋放一系列細胞因子，如白細胞介素-35(IL-35)，最終引發患者造血干細胞分裂受阻凋亡，加重再生障礙性貧血病情進展[3]。相關研究表明T細胞異?；罨窃偕系K性貧血的主要發病機制之一[4]，且有研究指出機體多種血清因子水平會隨再生障礙性貧血發展而相應變化，這些血清因子的表達水平變化可較好地反映再生障礙性貧血的病情嚴重程度[5]，因而有必要對再生障礙性貧血患者血清相關因子進行監測，對評估患者病情進展和臨床轉歸有重要臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料2012年1月至2017年1月我院收治的312例再生障礙性貧血患者(觀察組)和同期在本院體檢的35名健康體檢者(對照組)，納入標準：①符合《血液病學》[5]相關診斷標準；②入院后經醫師診斷及外周血象、骨髓涂片，骨髓活檢等檢查確診；③納入研究前未合并嚴重原發性精神障礙和癡呆；④患者及其家屬知曉本研究內容及目的，自愿簽署知情同意書；⑤健康體檢者為本院體檢中心經健康體檢合格者，且未合并心、肝、肺和腎等臟器功能障礙。排除標準：①腫瘤、結締組織以及感染性疾患等；②腦外傷、中毒、腦卒中、高血壓腦病、血糖異常及軀體重要臟器功能障礙等所致腦??；③合并嚴重自身免疫性疾病者。觀察組312例，男203例，女109例，年齡14～63歲[(44.05±3.28)歲]，病程1個月至22年[(15.02±3.04)年]，體重25～46 kg[(39.05±3.06)kg]；對照組35例，男22例，女13例，年齡15～65歲[(45.05±3.36)歲]，體重24～45 kg[(40.05±2.98)kg]。觀察組和健康組性別、年齡等基線資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法①再生障礙性貧血患者療效判斷和分組：納入研究的再生障礙性貧血患者均實施免疫抑制治療和促造血治療，均持續治療6個月，治療結束后對患者臨床療效進行評估，參照《兒童獲得性再生障礙性貧血診療建議》[6]標準：治療6個月內中性粒細胞絕對計數≥1.0×109/L，血紅蛋白≥80 g/L，血小板計數≥20 ×109/L，脫離輸注血制品記為有效，依據觀察組患者治療后療效情況分為有效組和無效組。②標本采集：納入對象均抽取6 ml空腹肘靜脈血分成兩份，其中一份經過1500 r/min離心處理后取血清，另一份則采用 Ficoll密度梯度離心法將外周血單個核細胞分離。③Tregs細胞檢測：采用流式細胞儀(儀器及試劑均由上海信然生物技術有限公司提供)檢測觀察組治療前和治療結束后有效者外周血中Tregs細胞含量。④血漿IL-35、IL-8水平檢測：采用酶聯免疫吸附法(奧地利公司提供的型號為Bioelisa ELX-800的酶標儀，試劑和試劑盒由上海酶聯生物科技有限公司提供)檢測納入研究對象血漿中IL-35、IL-8水平。

1.3觀察指標①觀察組和對照組血漿IL-35、IL-8、Tregs細胞含量比較；②觀察組各亞組與對照組血漿IL-35、IL-8、Tregs細胞含量比較；③再生障礙性貧血療效與血漿IL-35、IL-8、Tregs細胞含量的相關性分析；④再生障礙性貧血患者血漿IL-35、IL-8水平與其Tregs細胞含量相關性分析。

1.4統計學方法采用SPSS 19.0統計學軟件分析數據。計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用重復測量方差分析及t檢驗；計數資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗；變量間相關性采用Pearson相關性分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1觀察組和對照組血漿IL-35、IL-8、Tregs細胞含量比較觀察組IL-35、Tregs細胞含量明顯低于對照組，IL-8明顯高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 觀察組和對照組血漿IL-35、IL-8、Tregs細胞含量比較

2.2觀察組各亞組與對照組血漿IL-35、IL-8、Tregs細胞含量比較有效組和對照組IL-35、Tregs細胞含量高于無效組，IL-8低于無效組；對照組IL-35、Tregs細胞含量高于有效組，IL-8低于有效組(P<0.05)，見表2。

表2 觀察組各亞組與對照組血漿IL-35、IL-8、Tregs細胞含量比較

2.3再生障礙性貧血療效與IL-35、IL-8、Tregs細胞含量相關性分析再生障礙性貧血患者預后與IL-35、Tregs細胞含量呈正相關(P<0.05)，與IL-8無相關性(P>0.05)，見表3。

表3 再生障礙性貧血預后與IL-35、IL-8、Tregs細胞含量相關性分析

2.4再生障礙性貧血患者IL-35、IL-8水平與其Tregs細胞含量關系分析再生障礙性貧血患者血漿IL-35水平與其Tregs細胞含量呈正相關(r=0.358，P<0.05)，IL-8與Tregs細胞含量無相關性(P>0.05)。

3 討論

再生障礙性貧血是因造血干細胞異常所引起的骨髓造血功能衰退的貧血性疾病，以全血細胞減少、貧血、感染、出血、發熱等為主要臨床表現，易繼發各種免疫系統疾病，目前多認為造血干細胞異常、免疫機制損傷以及骨髓內造血環境異常等因素有關，本病發病年齡無特異性，目前對其發病機制尚未完全明確，因此臨床對其治療尚存在一定難度，以預防、防治血細胞減少為主要目標，在臨床救治上常規藥物較難達到理想的治療效果，雖造血干細胞移植在其治療中取得較好臨床效果，但這種方法較難推廣應用[7]；而有學者研究則指出在再生障礙性貧血患者疾病發生過程中，免疫調節在患者骨髓造血功能降低情況下發揮著重要作用，其中T淋巴細胞是再生障礙性貧血發病機制中的重要效應細胞，由其分泌的細胞因子也是再生障礙性貧血患者的重要調節因子[8]。

李文靜等[9]研究指出Treg細胞及其相關因子IL-10、IL-35、TGF-β 可能直接參與再生障礙性貧血的發生和發展，在再生障礙性貧血發病機制中發揮重要作用，可作為評估再生障礙性貧血患者臨床療效的有效指標；遲作華等[10]研究則表明急性分泌性中耳炎患者Tregs細胞高表達，耳積液中3種細胞因子濃度明顯升高；而李軍華等[11]研究則證實IL-35是由Tregs分泌的具有抗炎以及免疫抑制作用的細胞因子。因而筆者考慮再生障礙性貧血患者血漿IL-35表達水平及其與Tregs細胞關系的研究可能存在一定臨床應用價值，本研究結果顯示，與對照組比較，觀察組IL-35、Tregs細胞含量明顯低，IL-8明顯高，有效組和對照組IL-35、Tregs細胞含量較無效組明顯高，IL-8明顯低，對照組IL-35、Tregs細胞含量較有效組明顯高，IL-8明顯低，再生障礙性貧血患者療效與IL-35、Tregs細胞含量呈明顯正相關，且再生障礙性貧血患者血漿IL-35水平與其Tregs細胞含量有明顯正相關，初步證實了IL-35和Tregs細胞在再生障礙性貧血疾病發生和發展中發揮重要作用，且再生障礙性貧血患者血漿IL-35與Tregs細胞數量有明顯相關性，這與既往文獻報告大體上相符。其中Tregs細胞為一類有免疫調節功能的T細胞，具有免疫抑制性以及免疫無能性的特點，可經T細胞受體介導的信號激活后，抑制輔助性T細胞以及殺傷性T細胞的活化、增殖，減弱活化T細胞對自身組織的攻擊，從而有效減輕對機體損傷[12]；本研究也證實經過治療的有效組Tregs細胞含量和IL-35較無效組明顯低，證實了Tregs細胞和IL-35與再生障礙性貧血發病緊密相關，兩者可作為再生障礙性貧血療效判斷的重要指標。IL-35是由Tregs分泌的細胞因子，其具有抗炎和免疫抑制作用，屬于IL-12家族一員，具有特異性生物學功能，在多種免疫相關性疾病發病中起著重要作用[13]，本研究證實再生障礙性貧血IL-35水平與Tregs細胞含量呈明顯相關性，表明Tregs細胞可分泌IL-35，兩者在再生障礙性貧血發病中均發揮著重要作用。

綜上所述，再生障礙性貧血患者血漿IL-35表達水平、Tregs細胞含量明顯下調，兩者可作為再生障礙性貧血疾病發生及臨床療效評估的有效指標。